喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞的抑制作用研究

吴岩印，张明月，丁 虹，孙国栋，唐艳超，杨 敏，范茂丹

(本文编辑:张仲书; 英文编辑:王建东)

喷他脒是一种抗肺孢子虫类药物，国外研究报道喷他脒对肿瘤细胞亦有杀伤抑制作用［1］。喷他脒通过双重抑制细胞有丝分裂蛋白和肝再生磷酸酶－2(phosphatase of regenerating liver，PRL－2)，降低肿瘤生长活性，减少肿瘤新生血管生成，使细胞丧失增殖能力。本研究通过观察不同浓度的喷他脒对上皮性卵巢癌CAOV3细胞株的影响，探讨其抗肿瘤的可能性。

1 材料与方法

1.1 实验材料 ①卵巢癌CAOV3细胞株(由浙江大学医学院附属妇产医院赠送);②喷他脒(批号:X02040000217，河南新乡制药公司)。

1.2 仪器与试剂 噻唑蓝(MTT)(Sigma)，二甲基亚砜 (dimethyl sulfoxide，DMSO)(Sigma)，RPMI－1640培养液 (Thermo)，胎牛血清(Gibco)，CO2细胞培养箱(Thermo Scientific HERA)。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养 用含10%灭活小牛血清、青霉素100IU/ml和链霉素100IU/ml的RPMI－1640培养液培养细胞，置37℃、5%CO2培养箱内，用0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化传代，选用对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，分别于96孔板，每孔加100 μl，5000 ～6000 个/孔。置 37℃、5%CO2恒温箱培养24 h。

1.3.2 喷他脒储存液的配制 称取喷他脒300 mg，加入5 ml二甲基亚砜，－20℃ 保存备用。

1.3.3 在细胞样品中加入不同浓度的喷他脒 实验组分别为喷他脒 0.10 μmol/L、1.00 μmol/L、10.00 μmol/L、100.00 μmol/L 组，同时设置空白组(培养基、MTT、DMSO)，对照组(细胞、喷他脒溶解介质、培养液、MTT、DMSO)，每组6个复孔，并分别培养 24 h、48 h、72 h。小心吸去上清，加入80 μl新鲜RPMI 1640培养液，再加入20μl MTT溶液，继续培养4 h。吸掉上清，每孔加入150μl DMSO，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。使用酶标仪测定492 nm处各孔的吸光值。

1.3.4 计算抑制率 抑制率 =［(对照组 －空白组)－(实验组－空白组)］/(对照组－空白组) ×100%。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件包进行统计分析，检测数据以均数±标准差表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

不同浓度的喷他脒处理卵巢癌CAOV3细胞后，细胞生长受到以时间及浓度依赖方式的抑制。其中低浓度的喷他脒(0.10 μmol/L、1.00 μmol/L)作用24 h后只表现出对细胞的生长存在着轻微的抑制作用。但随着喷他脒浓度的增加，卵巢癌CAOV3细胞的生长受到不同程度的抑制，表现为细胞生长抑制率明显上升。而且高浓度组喷他脒的抑制率与低浓度组喷他脒的抑制率差异具有统计学意义(P＜0.05)，作用不同时间各组间抑制率差异也具有统计学意义(P＜0.05)。见图1。

图1 喷他脒对CAOV3细胞生长抑制实验

3 讨论

近年，临床卵巢癌的治疗已有许多进展，但进展期卵巢癌的死亡率仍超过女性其他生殖部位肿瘤之和，因此寻找治疗卵巢癌的新药正在成为研究的热点问题。

喷他脒又称戊烷脒(Pentamidine)，是一种抗寄生虫药，为芳香双脒类化学合成药物，半衰期为0.5～1 h。喷他脒可用于治疗利士曼原虫［2］、艾滋病卡式肺囊虫感染等疾病，目前为治疗引发卡式肺囊虫继发性肺炎的首选药，被广泛应用于艾滋病的治疗，尤其是艾滋病合并卡式肺囊虫感染的患者［3－4］。目前已有学者发现喷他脒有抗肿瘤作用［5］。

在体外试验中，喷他脒有选择性地杀伤癌细胞的能力［6－8］。也有实验证实喷他脒可以在体外抑制包括恶性黑色素瘤、前列腺癌、直肠癌和乳腺癌等多种肿瘤细胞的增值能力［9－11］。

这些体内、体外的数据说明喷他脒可能是一个新的有效的抗肿瘤药物。本研究从体内体外两方面证实了喷他脒对卵巢癌细胞的抗肿瘤作用，这个结果为喷他脒治疗卵巢癌提供了一定的实验依据。

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