紫外分光光度法测定刺梨总三萜与总黄酮含量＊

南 莹，李齐激，马 琳，张倩茹，杨小生

(1.遵义医学院，贵州 遵义 563099;2.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550001)

刺梨 (Rosa roxbughii Tratt)为蔷薇科蔷薇属多年生落叶丛生灌木，又名缫丝花、送春归，主产于我国四川、贵州等地［1］，现湖北、广东、江苏等地亦有种植。其全株均可药用，具有消食健脾，收敛止泻等功效［2］，用于治疗积食腹胀、痢疾、肠炎、高血压血管破裂出血、维生素C缺乏症等疾病，同时还能调节机体免疫功能、延缓衰老、解毒、抗动脉粥样硬化和抗肿瘤等功能［3］。刺梨富含超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)［4］、维生素(维生素E、维生素 C)［5］、微量元素(Zn，Sr，Rb)［6］、刺梨多糖［7］及多种化学成分［8，9］。经研究发现，刺梨总三萜和总黄酮为其药理活性成分［10］，本实验采用比色法对野生和栽培刺梨中总三萜和总黄酮进行含量测定研究，比较其含量差异，提供了质量控制方法技术基础，研究结果对于有效利用我省丰富的刺梨资源具有重要意义。

1 材料与试药

1.1 仪器 HP－8453双光束紫外可见分光光度计(惠普公司)，FA114万分之一电子天平(上海海康电子仪器厂)，电热恒温水浴锅(北京永光明医疗仪器厂)。

1.2 试药 芦丁对照品(编号080－200306，中国食品药品检定研究院)，熊果酸对照品(编号110742－200415，中国食品药品检定研究院)。高氯酸为优极纯，香草醛、冰乙酸、无水乙醇、三氯化铝、醋酸钾均为分析纯。

实验药材2012年9月采自贵州龙里，经贵州大学安华明教授鉴定为刺梨(Rosa roxburghii Tratt.fmalis Rehd.et Wils)的果实。

2 总三萜含量测定

2.1 方法

2.1.1 对照品溶液的制备 取熊果酸对照品适量，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇制成每1.0 mL含0.11 mg的溶液，稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取刺梨鲜果和粗粉约1 g，精密称定，加75%乙醇40 mL加热回流，提取3次，每次2 h，滤过，蒸干，分别用甲醇定容至50 mL和100 mL，备用。

2.1.3 显色条件与波长选择 取供试品溶液适量于具塞试管中，100°C水浴蒸干，加0.40 mL香草醛－冰乙酸溶液和1.00 mL高氯酸，在60°C水浴加热15 min后，移入冰水浴中，再加入5.00 mL冰乙酸，摇匀后置于室温。扫描最大吸收波长，对照品溶液和供试品溶液显色后的最大吸收峰为545 nm，与文献报道一致［11］，因此，选用545 nm为检测波长。紫外扫描图谱(见图1、2)。

图1 标准品UV－Vis扫描图谱

图2 刺梨样品UV－Vis扫描图谱

2.1.4 标准曲线的制作 精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL，分别置具塞试管中，以吸收值A为纵坐标，质量X为横坐标绘制标准曲线，得回归直线方程为:A=5.2684X+0.0061 ，r=0.9988，结果表明对照品含量在0.022～0.176 mg范围内与吸收值线性关系良好。

2.2 方法学考察

2.2.1 精密度试验 精密吸取对照品溶液6份，按2.1.3项下操作，测定吸光度，平均吸光度为0.453%，RSD为1.04%。结果表明仪器精密度良好。

2.2.2 稳定性试验 取约1 g刺梨粗粉，精密称定，按2.1.3项操作，测定吸光度，考察其稳定性，RSD为1.64%。结果表明供试品溶液显色后30 min内稳定性良好。

2.2.3 重复性试验 取刺梨粗粉6份，精密称定，按2.1.3项操作，测定吸光度，样品总三萜含量为11.25%，RSD为0.59%。结果表明本试验重复性良好。

2.2.4 加样回收试验 取约0.5g已知总三萜含量为12.485%的刺梨粗粉6份，精密称定，按比例精密加入对照品溶液，按2.1.3项制备供试品溶液，显色后测定A545nm吸光度，计算回收率，平均回收率为103.14%，RSD为1.73%，表明方法准确性好。加样回收率试验结果(见表1)。

表1 加样回收试验(n=6)

2.3 总三萜含量测定 取野生和栽培刺梨，按2.1.3项下方法制备供试品溶液，测定吸光度，计算含量，测定结果(见表2)。

表2 总三萜含量测定结果

3 总黄酮含量测定

3.1 方法

3.1.1 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，精密称定，置25 mL量瓶，加乙醇定容。精密吸取10.0 mL，加乙醇定容于25 mL量瓶，稀释至刻度，摇匀，即得每1.0 mL含0.24 mg的溶液。

3.1.2 供试品溶液的制备 取刺梨鲜果和粗粉约1 g，精密称定，加75%乙醇40 mL加热回流，提取3次，每次2 h，滤过，蒸干，分别用乙醇定容至25 mL和50 mL，备用。

3.1.3 显色条件与波长选择 取适量供试品溶液于具塞试管中，用乙醇稀释至5 mL，分别精密加入3.0 mL 2.5%AlCl3溶液及5.0 mL10%KAc 溶液，摇匀后室温放置40 min依法测定。扫描最大吸收波长，芦丁对照品溶液和供试品溶液显色后的最大吸收峰为420 nm，与文献报道一致［12］，因此，选用420 nm最为检测波长。紫外扫描图谱(见图3、4)。

图3 标准品UV－Vis扫描图谱

图4 刺梨样品UV－Vis扫描图谱

3.1.4 标准曲线的制作 精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6 mL，分别置具塞试管中，以吸收值A为纵坐标，质量X为横坐标绘制标准曲线，得回归直线方程为:A=2.3453X+0.0411，r=0.9984，结果表明芦丁含量在 0.048 ～0.384 mg范围内与吸收值线性关系良好。

3.2 方法学考察

3.2.1 精密度试验 精密吸取对照品溶液6份，按3.1.3 项操作，测定 A420nm，平均吸光度为 0.3263，RSD为0.63%。结果表明仪器精密度良好。

3.2.2 稳定性试验 取约1g刺梨粗粉，精密称定，按 3.1.3 项操作，测定，计算，RSD 为 0.47%。结果表明供试品溶液在显色后30 min内稳定性良好。

3.2.3 重复性试验 取刺梨粗粉6份，精密称定，按3.1.3项操作制备供试品溶液，测定，计算样品总黄酮含量为0.45%，RSD为0.59%。结果表明本实验重复性良好。

3.2.4 加样回收试验 取约0.5 g已知总黄酮含量为0.72%的刺梨粗粉6份，精密称定，按比例精密加入芦丁对照品溶液，按3.1.3项制备供试品溶液，显色后测定A420nm吸光度，计算回收率，平均回收率为100.60%，RSD为1.53%，表明方法准确性好。加样回收率试验结果(见表3)。

表3 加样回收试验结果(n=6)

3.3 总黄酮含量测定 取野生和栽培刺梨，按3.1.3项制备供试品溶液，测定吸光度，计算含量。含量测定结果(见表4)。

表4 含量测定结果

4 讨论

对野生与栽培刺梨总三萜和总黄酮的含量进行测定，两品种所含总黄酮无明显变化，分别为0.746%，0.721%。总三萜则以野生刺梨较高，为16.990%，栽培刺梨的含量略低，为12.485%。从活性物质总三萜和总黄酮的含量来看，野生刺梨资源与栽培资源均可具有开发价值。另外，刺梨干品与鲜品质量折算比例约为1∶5，即5 kg鲜品可得1 kg干品。在进行含量测定时，可按此比例进行预估。

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