秦皮乙素的合成研究

王 刚，宿贵鹏

(遵义医学院药物化学教研室，贵州 遵义 563099)

秦皮乙素是中药秦皮的主要有效成分，化学名称:6，7一二羟基香豆素，俗称七叶亭或七叶内酯。为白色或淡黄色针状结晶［1］。据研究证明，秦皮乙素具有多种药理活性:①治疗肠道疾病，如溃疡性结肠炎、放射性直肠炎、小肠性腹泻、大肠性腹泻、腹痛等;②治疗结膜炎［2，3］;③治疗骨关节炎;④抗菌作用［4，5］;⑤抗氧化作用。因此，秦皮乙素具有广阔的开发前景，目前关于秦皮乙素的研究，原料来源于天然植物，但含量低，仅为1.03%［6］。为进一步研究它的生物活性，我们设计了秦皮乙素的合成方法，并成功合成得到该化合物。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂、原料 VARIAN 1000红外分光光度计(KBr压片);CL－2Z型恒温加热磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司);HZT－B100电子天平(福州化学仪器有限公司);RE－522旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);KEL－X－4显微熔点测定仪(上海微图仪器科技发展有限公司);Agilent6890－5973N气相色谱－质谱联用仪(美国安捷伦公司)。

対苯醌，苹果酸，乙酸酐，浓硫酸，乙酰乙酸乙酯，高氯酸，丙二酸二乙酯，无水乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯，甲酸，氢氧化钠均为分析纯;薄层硅胶(青岛海洋化工集团);蒸馏水，氮气，活性炭为市场购置的工业产品。

1.2 合成方法

1.2.1 合成路线 以对苯醌、乙酸酐、浓硫酸为原料，合成中间体1，2，4－苯三酚三乙酸酯，然后1，2，4－苯三酚三乙酸酯与苹果酸、浓硫酸缩合和环合，合成得到秦皮乙素。其反应式(见图1)。

图1 合成秦皮乙素的反应式

1.2.2 中间体1，2，4－ 苯三酚三乙酸酯的合成将乙酸酐(65 mL，0.68 mol)和浓硫酸(1.5 mL)加入到250 mL三口瓶中，30 min内边搅拌边分批少量加入对苯醌(25.0g，0.23 mol)，控制加入速度，并使反应温度保持在45℃，加毕在同一温度下反应约3 h，待反应完成后，再将溶液静置冷却一会儿，析出大量无色沉淀。然后加入冰水，搅拌，抽滤，洗涤得到沉淀，即1，2，4－苯三酚三乙酸酯粗品，粗品用甲醇重结晶，经真空干燥2 h，得1，2，4一苯三酚三乙酸酯81.83g，收率87%，熔点测定为:95～96℃。

1.2.3 秦皮乙素的合成 向50 mL三口烧瓶中依次加入 1，2，4—苯三酚三乙酸酯 7.3g，苹果酸4.8g，浓硫酸 11.5 mL，混合后升温到 110℃时，反应2.5 h，自然冷却，倒入底部铺有碎冰的冰水中，析出固体，抽滤，用乙酸乙酯以1∶1的比例萃取2次，挥干溶剂，反复重结晶多次，得到淡黄色晶体，经真空干燥2 h，得秦皮乙素1.33g，收率26%，测定熔点为:26～267℃。

2 结果与分析

2.1 中间体1，2，4－苯三酚三乙酸酯产物结构与图谱分析(见图2)

2.1.1 IR(KBr)/cm－1分析:环上 C=C 面外弯曲振动 572，628;芳环的 C一 H面外弯曲振动837，918;C一O伸缩振动1167，1210;芳环C=C伸缩振动1499;C=O伸缩振动1760;C一H伸缩谱带2949。

图2 中间产物1，2，4，—苯三酚三乙酸酯红外光谱图

2.1.2 GC－MS分析 气相条件:DB－5色谱柱，柱前压 50 kPa，分流比 10∶1，进样量 1 μl，柱初始温度50℃，保留5 min，然后以10℃·min－1的升温速度升温到 200℃，保留15 min，最后以10℃·min－1的升温速度升温到260℃，保留15 min。

质谱条件:EI离子源，电子能量70 ev，离子源温度200℃界面温度250℃，倍增电压1 700 V，氦气流速:2mL·min－1。

分析结果:通过 HPMSD化学工作站检索Nist05标准质谱图库和WileyNist05质谱图库，并结合有关文献谱图解析，鉴定出该化合物结构为1，2，4—苯三酚三乙酸酯，MS(m/z):252(M － H，100%)，相似度为95%。

2.2 秦皮乙素产物结构与图谱分析

2.2.1 TCL鉴别 取本品0.01 g，精密称定，置10 mL量瓶中，用甲醇5 mL超声溶解，摇匀，定容，作为供试品溶液。另取秦皮乙素对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各8 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(30∶10∶3)振摇分层后，取下层液加入0.5 mL甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(见图3～6)。

2.2.2 IR(KBr)/cm－1分析:分子间氢键 O 一 H伸缩谱带3 331，3 202;芳基 C一 H伸缩振动 3 062;内酯Vc=o 1 668;倍频或复合频谱带 1 620;环上C=C面内伸缩振动1 566;O一H面外弯曲振动140 1;C一O伸缩振动1 284;苯环上C一H面外弯曲振动818～878。与秦皮乙素标准品红外光谱图相比较，数据一致。

3 讨论

3.1 制备中间体1，2，4一苯三酚三乙酸酯时，加入对苯醌，反应温度不宜超过50℃，否则温度升高反应液易氧化变黑，影响产物纯度，采用油浴控温较好。

3.2 由于1，2，4一苯三酚三乙酸酯水解后极易被氧化影响目标产物的合成，秦皮乙素合成的反应过程中需先将空气排除再通入氮气，

3.3 通过TLC、IR、GC－MS等分析手段鉴定所得的产物符合目标产物秦皮乙素。

［1］杨晓军.微波辐射合成秦皮乙素的研究［J］.应用化工，2011，10(4):35 －38.

［2］周听，顾希钧.秦皮滴眼液的稳定性考察［J］.上海中医药杂志，2004，38(10):58 －59.

［3］陆萍，李明飞.秦皮滴眼液治疗慢性结膜炎的临床观察［J］.上海中医药杂志，2002，9:29 －31.

［4］刘世清，贺翎，彭昊，等.秦皮对兔实验性骨关节炎的基质金属蛋白酶－1和一氧化氮及前列腺素的作用［J］.中国临床康复，2005，9(6):50 －54.

［5］杨天鸣，葛欣，王晓妮.秦皮抗菌作用研究［J］.西北国防医学杂志，2003，24(5):387-388.

［6］陈胡兰，汤沛然，张梅，等.不同产地紫花地丁中秦皮乙素的含量比较［J］.成都中医药大学学报，2010，1(33):72－73.