肤疡宁的处方工艺研究及其对小鼠皮肤烫伤的影响

韩 伟 ，董淑弘 ，吴勇杰 ，李文广 ，高明堂 ，覃 红

（1.定西市卫生学校，甘肃 定西743000；2.兰州大学基础医学院，甘肃 兰州 730000；3.甘肃省新药临床前研究重点实验室，甘肃 兰州 730000）

肤疡宁软膏为一临床验方，临床用于治疗皮肤烧伤疗效显著。该方是由油煎白芷、伏龙肝、冰片、白矾等组成、用麻油和蜂蜡制成的软膏剂。白芷具有解热、镇痛与抗炎作用[1]，由天津第一中心医院配制的白芷糊软膏（白芷、紫草、冰片等）用于烧烫伤有较好的效果[2]。冰片作为一个辛开之品，具有辛散透表之功，能引药由肌表直达腠理，提示冰片本身可以作为促渗剂应用于经皮给药制剂[3～4]。白矾可清热毒、燥湿等，具有抗菌消炎、收敛的作用[5]。肤疡宁软膏作为验方，其组方及工艺是否合理，尚待证实。从对祖国医学传统经验方挖掘、提高的思路出发，本实验研究了肤疡宁的处方工艺及其对小鼠皮肤烫伤的影响。

1 材料和方法

1.1 动物

昆明种小鼠，由甘肃省医学科学研究院实验动物中心提供。合格证号：医动字第14-009。雌雄分笼饲养。

1.2 药品和试剂

所用麻油、麻油加蜂蜡及肤疡宁各组方由兰州汉方医药科技有限责任公司提供，批号000704。肤疡宁分低、中、高3个浓度组，中浓度为拟用于临床的浓度（见表1）。脱毛剂配制方法：取硫化钠3份，加适量水搅拌使完全溶解，加1份肥皂粉、7份淀粉，加水至糊状。微加热使成半透明状半流体，冷至室温备用。湿润烧伤膏为汕头经济特区美宝制药厂产品，国药准字Z20000004，批号000403。醋酸氢化可的松软膏（下称氢化可的松软膏）为上海第九制药厂产品，批号980704。巴豆油致炎合剂由巴豆油2.0%、无水乙醇20.0%、蒸馏水5.0%和乙醚73.0%混合而成[6～7]。丙酮—硫酸钠溶液配制方法：取无水硫酸钠1.5 g，溶于蒸馏水150 ml 中，再缓缓向硫酸钠溶液中加入丙酮350 ml 即成。伊文思蓝用生理盐水配成0.5%浓度备用。

表1 肤疡宁各处方中药物组成及比例

1.3 仪器

721 型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品，YC-2A 型程控刺激器为四川成都仪器厂产品，Fuke DT8900 型数字式万用表为深圳市福克仪器有限公司，精度1μ A。

1.4 造模方法

1.4.1 巴豆油诱发的小鼠耳肿模型的制备 小鼠，雌雄各半，体重27～30 g。均先在右侧耳壳正、反两面均匀涂以0.1 ml 巴豆油致炎合剂诱发小鼠耳肿[7～8]。

1.4.2 烫伤致小鼠耳肿模型的制备 小鼠，雌雄各半，体重23～26 g。乙醚麻醉小鼠，将小鼠左耳置70℃水浴中浸两秒。

1.5 分组及给药

1.5.1 巴豆油诱发的小鼠耳肿模型组 昆明种小鼠80 只，随机分为8 组（见表2），涂巴豆油致炎合剂30 min 后在同侧耳壳正、反两面涂药。

表2 巴豆油诱发的小鼠耳肿模型组实验动物分组及给药

1.5.2 烫伤致小鼠耳肿模型组 昆明种小鼠90 只，随机分为9 组（见表3）。将小鼠左耳置70℃水浴中浸两秒，取出后立即在左耳壳正、反两面涂以药物。

表3 烫伤致小鼠耳肿模型组实验动物分组及给药

1.5.3 镇痛实验 昆明种小鼠140 只，雄性，体重18～22 g，随机分为7 组（见表4）。药物均匀涂于右耳壳内、外两面，于涂药后30 min、60 min、120 min分别测定右耳壳痛阈值。

表4 肤疡宁镇痛实验动物分组及给药

1.6 指标测定

1.6.1 小鼠耳肿胀抑制率测定 涂巴豆油致炎合剂致炎4 h 后脱颈椎处死动物，沿耳廓基线剪下双耳。在两耳对称部位用打孔器（内径6.5 mm）打下耳片，以两耳片重量之差为肿胀度，求出肿胀抑制率[7]。烫伤组小鼠烫伤后90 min 时，静脉注射0.5%伊文思蓝—生理盐水0.1 ml/10 g，注射染料后20 min 时脱颈椎处死小鼠，同上法求出肿胀抑制率。

1.6.2 小鼠耳毛细血管通透性测定 取上述耳烫伤各组小鼠左耳片剪碎，浸入4 ml 丙酮—硫酸钠提取液中，浸泡72小时，3000 rpm 离心10 min，取上清液于595 nm 波长处测光密度（OD595）[9～10]。按伊文思蓝标准曲线求出每ml 提取液中的伊文思蓝浓度，乘以提取液总体积4 ml 即为每只小鼠耳皮肤伊文思蓝的渗出量。用烫伤后伊文思蓝的渗出量来反映毛细血管通透性的变化。同时检测正常对照组小鼠耳片毛细血管漏出的染料量，作为测定正常皮肤毛细血管通透性之参比样品。

1.6.3 痛阈测定 用电刺激法。选18～22 g 雄性小鼠，固定者以戴橡胶绝缘手套的手固定小鼠，暴露小鼠右耳。在右耳壳内面耳根至耳尖之正中连线左右两侧皮下各刺入一枚4#针头，分别为正、负极，两电极间距为3 mm。两刺激电极连接到YC-2A 型程控刺激器上（四川成都仪器厂），刺激直流脉冲波宽1 ms，频率50 Hz，串长500 ms。刺激电流从0 开始逐渐增大，直至出现嘶叫。用Fuke DT8900 型数字式万用表（深圳市福克仪器有限公司，精度1μA）测程控刺激器输出端的电流强度，此时的电流强度即为嘶叫阈，以嘶叫阈作为痛阈。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 对巴豆油诱发的小鼠耳肿的影响

2.1.1 肤疡宁方中固体药物比例与抗炎强度的关系（见表5）

表5 肤疡宁对巴豆油诱发的小鼠耳肿的影响

用药各组均使巴豆油诱发的小鼠耳肿明显减轻。和模型对照组比较，除肤疡宁高浓度组外，差别均有显著性。除氢化可的松软膏组外，以麻油的抗炎作用最强。作用强度由强到弱依次为麻油组＞肤疡宁低浓度组＞蜂蜡+麻油组≈肤疡宁中浓度组＞肤疡宁高浓度组。其中麻油+蜂蜡组与肤疡宁中浓度组强度接近。肤疡宁方中随着固体成分的增加，全方对巴豆油诱发的小鼠耳肿的抑制率下降，剂量-效应关系反置。

2.1.2 处方中麻油比例与处方抗炎强度的关系 随着处方中麻油比例增加，对巴豆油诱发的小鼠耳肿的抑制率增加，两者呈线性相关（R2＞0.9），且两者变化高度平行（见图1）。证明该方中抗炎活性组分为赋形剂麻油，固体各组分对巴豆油诱发的化学性炎症无抗炎作用。

图1 肤疡宁方中麻油比例与其对小鼠耳肿抑制率的关系

2.2 肤疡宁对烫伤致小鼠耳肿的影响

2.2.1 对烫伤诱发的小鼠耳肿胀的影响（见表6）氢化可的松软膏组、湿润烧伤膏组、肤疡宁中、高浓度组均使烫伤诱发的小鼠耳肿减轻，但肤疡宁高浓度组抗炎作用弱于该方中浓度组。各用药组比较，以肤疡宁中浓度组减轻烫伤性小鼠耳肿的作用最强。麻油组、麻油+蜂蜡组对烫伤性小鼠耳肿无明显影响。

表6 肤疡宁对烫伤诱发的小鼠耳肿的影响

2.2.2 肤疡宁对烫伤诱发的小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加的影响（见表7） 氢化可的松软膏组、湿润烧伤膏、肤疡宁中、高浓度组均使烫伤诱发小鼠耳皮肤炎症组织内染料渗出减少。各用药组比较，以肤疡宁中浓度组降低烫伤性小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加的作用最强。麻油组、麻油+蜂蜡组对烫伤性小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加无明显影响。

2.3 肤疡宁对小鼠耳壳皮肤痛阈的影响（见表8）

和模型对照组比较，麻油组、麻油+蜂蜡组对小鼠耳壳皮肤痛阈均无明显影响。肤疡宁软膏低、中、高浓度组明显升高小鼠耳壳皮肤痛阈，且有时间相关性，表明肤疡宁软膏有一定的镇痛作用。

表7 肤疡宁对烫伤诱发的小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加的影响

表8 肤疡宁对小鼠皮肤痛阈的影响

3 讨论

本实验观察到，用药各组均使巴豆油诱发的小鼠耳肿明显减轻，以麻油组作用最强。作用强度由强到弱依次为麻油组＞肤疡宁低浓度组＞麻油+蜂蜡组≈肤疡宁中浓度组＞肤疡宁高浓度组。其中麻油+蜂蜡组与肤疡宁中浓度组强度接近。肤疡宁方中随着固体药物的增加，全方对巴豆油诱发的小鼠耳肿的抑制率下降，剂量—效应关系反置。分析处方中麻油比例与处方抗炎强度的关系表明，随着处方中麻油比例增加，对巴豆油诱发的小鼠耳肿的抑制率增加，两者呈线性相关（R2＞0.9），且两者变化高度平行。提示该方中抗化学性炎症的活性组分为赋形剂麻油，固体各组分对巴豆油诱发的化学性炎症无抗炎作用。对烫伤诱发的小鼠耳肿，肤疡宁中、高浓度组均可使其减轻，但肤疡宁高浓度组抗炎作用弱于该方中浓度组；而麻油组、麻油+蜂蜡组对烫伤性小鼠耳肿无明显影响。以烫伤小鼠耳皮肤组织内伊文思蓝渗出量反映皮肤毛细血管通透性的变化，与对照组比较，肤疡宁中、高浓度组均使烫伤诱发的小鼠耳皮肤组织内染料渗出减少。以肤疡宁中浓度组减少烫伤性小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加的作用最强；麻油组、麻油+蜂蜡组对烫伤性小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加无明显影响。表明肤疡宁具有抑制烫伤小鼠耳皮肤毛细血管通透性增加的作用。和模型对照组比较，麻油组、麻油+蜂蜡组对小鼠耳壳皮肤痛阈无明显影响。肤疡宁低、中、高浓度组明显升高小鼠耳壳皮肤痛阈，且有时间相关性，表明肤疡宁有一定的镇痛作用。综上所述，肤疡宁软膏中固体组分有镇痛作用，并对小鼠烫伤性炎症具有抗炎作用，而对巴豆油诱发的化学性炎症无抗炎作用；该方中对巴豆油性化学性炎抗炎的活性组分则为赋形剂麻油。

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