5个灵芝菌株在梅州的比较试验*

李 忠，钟莹莹，王志达，陈逸湘，凌宏通，宋 斌

(1.梅州市微生物研究所，广东 梅州 514071；2.广东省微生物研究所，广东 广州 510070)

灵芝 (Ganoderma lucidum)隶属于担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、灵芝属，是中国传统的药用真菌，被称为神草，在我国已有2000多年的药用历史[1]。灵芝中含有灵芝多糖、三萜类化合物、核苷、氨基酸、甾醇、生物碱等多种成分[2-4]。大量药理研究表明，灵芝具有调节免疫、抗肿瘤、抗衰老、护肝和降血糖血脂等方面的作用[2-7]；临床上还应用于美容、改善记忆和改善睡眠等方面[2,8]。灵芝资源市场需求量大，开发前景广阔。通过对5个赤灵芝菌株的比较试验，筛选出适宜梅州及其周边地区生长的灵芝菌株，以期为灵芝的进一步开发利用提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

杂交灵芝种、广1号灵芝种，从广东省农科院蔬菜研究所引进；大别山G8灵芝种，由广州宝兴生物科技有限公司梅州灵芝实验基地提供；梅州本地灵芝种，由梅州市微生物研究所提供；三明京大灵芝种，从福建省三明真菌研究所引进。

1.2 培养基配方

母种培养基：马铃薯汁 20%、葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、琼脂2%，加水至1 000 mL。

原种培养基：玉米粒99%、石膏1%。

栽培料配方：木屑78%、麦麸12%、玉米粉8%、石膏 1%、糖 1%。

1.3 母种的制作

取马铃薯200 g，洗净去皮切碎，加水1 000 mL煮沸20 min，纱布过滤，再加20 g葡萄糖和20 g琼脂及其它药品，充分溶解后补足水至1 000 mL，分装入21 mm×200 mm试管中，每试管约10 mL，121℃灭菌30 min后取出试管摆斜面至冷却。在超净工作台内定量接入平板尖端菌丝，每个菌株接10支，25℃恒温培养。

1.4 原种的制作

玉米粒除杂、除坏，水浸泡12 h～13 h后，沸水煮至用手按开玉米粒里面不糊为宜，晾干至表面无水，加入石膏拌匀，混合装袋，每袋折合干料80 g，121℃灭菌1.5 h，冷却后在超净工作台内定量接入平板尖端菌丝，每个菌株接20瓶，25℃恒温培养。

1.5 栽培方法

将木屑78%、麦麸12%、玉米粉8%、石膏1%、蔗糖1%混匀，按料∶水=1∶1.5加水拌匀，拌好后分装到33 cm×17 cm×0.05 cm的聚丙烯塑料袋中，每袋装折合干料350 g，121℃灭菌2 h，自然冷却后在超净工作台内定量接入原种，每个菌株接150袋～200袋，室温培养。菌丝满袋后开袋，待菌盖白色生长圈基本消失呈红褐色时移入收粉架，保证湿度，定期通风，约40 d后可采收孢子粉和子实体[9,10]。

1.6 拮杭试验

拮抗试验是鉴定菌株间遗传差异的传统方法，通过拮抗试验将供试菌株进行鉴定、归类，避免重复[11]。菌丝间的拮抗反应是菌株间不同遗传特性的重要表现，表明不同菌株分别属于不同的亲和群。实验将0.5 cm2的菌块接种到PDA平板上，25℃恒温培养5 d～8 d得到活化菌种。在活化后的菌落边缘取直径5 mm的菌块，按3个菌株以“品”字形同时接种在一个PDA平板上 (直径9 cm，接种块间相距3.5 cm)，25℃恒温培养，每天定时观察菌株间是否有拮抗线，以及拮抗线是否明显。每个组合重复3次。

1.7 试验结果观测

母种萌发后每天划线，测量并记录菌丝生长速度，记录菌丝长满试管的时间以及菌丝的浓密程度、颜色、气生菌丝量等情况。原种待菌丝长到瓶肩部时开始沿菌丝生长边缘划线，测量并记录菌丝生长速度、满瓶时间以及菌丝的浓密程度等。栽培中观察记录原基形成时间、采收时间，观察子实体的生物学性状，包括菌盖颜色、菌盖面积、菌柄长度，并记录出芝产量，计算污染率、生物学效率等数据。灵芝孢子粉作为灵芝的精华，它集中了灵芝的最有效成分[12]，因此梅州赤灵芝栽培以收孢子粉为主、子实体为辅，试验中只测第1潮灵芝产量。

2 结果与分析

2.1 供试灵芝菌株间菌丝的拮抗性

拮抗试验表明，多数接种在同一平板上的供试菌株在培养6 d后开始出现拮抗线，5个灵芝菌株间菌丝的拮抗反应见表1。

除了本地菌株与三明菌株之间无明显拮抗现象外，其它菌株之间均存在拮抗反应，因此可以推测至少4个灵芝菌株亲缘关系较远，分属不同亲和群，是互不相同的灵芝菌株，不存在异名同种现象。

表1 供试菌株的拮抗反应

2.2 不同灵芝菌株母种试验结果

不同灵芝菌种在母种培养基上的生长状况见表2。

表2 不同灵芝菌种在母种培养基上的生长状况

由表2可以看出，5个赤灵芝菌株在母种培养基上的生长速度各不相同，其中杂交灵芝其生长速度最快，满管天数最短，其次是广1号；菌株三明和G8生长速度差不多，满管天数相同，都是14 d；而本地菌株其生长速度相对较慢，满管天数也要较长时间，需要18 d。从菌丝的生长形态来看，杂交和广1号气生菌丝多，其它3个菌株相对较少。从菌丝密度、菌丝颜色、菌丝的边缘整齐度来看，5个菌株都差不多，菌丝浓密，颜色雪白，边缘较整齐。总的来看，杂交灵芝菌株在母种培养基中的生长状况最好，其菌丝长势好、生长速度快，菌丝浓密雪白、边缘整齐。

2.3 不同灵芝菌株原种试验结果

不同灵芝菌株在原种培养基中的生长状况见表3。

表3 不同灵芝菌株在原种培养基中的生长状况

从表3可以看出，杂交菌株在原种培养基中的生长速度最快，满瓶天数最短，但是其菌丝生长速度相对于在母种培养基的生长速度就减慢了。而其它4个菌株相对于母种培养基的生长速度都有不同程度的加快，5个菌株的菌丝满瓶天数差值相对较小，没有母种时的差别那么大。此外，5个灵芝菌株在原种培养基中的菌丝萌发和定殖能力都比较强，菌丝密度较密，色泽雪白。

2.4 不同灵芝菌株栽培试验结果

2.4.1 灵芝菌株在栽培袋中的生长状况

根据广东梅州当地大规模栽培赤灵芝的实际情况，实验选择室温下培养栽培袋菌株。不同灵芝菌株在栽培袋中的生长状况见表4。

不同灵芝菌株在各阶段所需要的时间见图1。

由于正值冬季气温较低，生长相对较慢，从表4可见，5种菌株菌丝满袋所需天数依次为杂交＜广1号＜G8＜本地＜三明。同表2、表3菌丝生长速度次序变化不大，只有三明种在室温下生长速度较之为慢。从污染率来看，杂交菌株较之其它4个菌株较低只有1.65%，但5个菌株的污染率都在正常范围 (5%)之内。此外从图1可以看出，开袋后杂交菌株原基形成最慢，菌盖形成到子实体成熟所需时间短，子实体积蓄养分时间与其余4个菌株各阶段所需时间相差都不远，尤其是菌盖形成到子实体成熟所需时间都较长，均超过12 d，因此子实体积蓄养分均较充足。

2.4.2 不同灵芝菌株子实体生物学性状比较

不同灵芝菌株子实体生长特性统计参数见表5。不同灵芝菌株子实体生长特性比较见表6。

表5 不同灵芝菌株子实体生长特性统计参数

从表5统计参数可知，杂交菌株的子实体和其它4个菌株差别较大，分支数多、菌柄长且直径小、菌盖薄且小，同时畸形率很高，达46.15%；而其它4个菌株的子实体生长特性参数差别相对较小。从表6来看，子实体颜色都是红褐色，只是杂交菌株的子实体颜色较淡；子实体形状差别较大，子实体大小不一、菌柄长短不一、菌盖边缘规整程度不同；但也有相似之处，子实体都是丛生，出芝也较整齐，除杂交子实体是近圆形外，其它的都是肾形。

表6 不同灵芝菌株子实体生长特性比较

2.4.3 不同灵芝菌株的产量及生物学效率比较

根据梅州栽培赤灵芝的特点，只对第1潮产的子实体和孢子粉进行统计。不同灵芝菌株产量比较见表7。

由表7可见，无论是子实体还是孢子粉，本地和G8两菌株的产量都明显高于其它3个菌株，其生物学效率也明显高于其它菌株。其中本地菌株生物学效率最高，达14.57%；杂交菌株生物学效率最低，只有6.50%。从孢子粉产量来看，本地菌株产量最高，为8.99 g，占干料的2.57%；其次是G8菌株为8.88 g，占干料的2.54%。因此，从收集孢子粉角度来看，本地和G8两菌株是适合梅州生产推广的优良菌株。

表7 不同灵芝菌株产量比较

3 讨论与小结

通过拮抗实验发现，本地菌株与三明菌株之间无明显拮抗现象和菌丝倒退现象。推测这两个菌株亲缘关系较近，可能存在异名同种现象，需要做进一步的验证实验。

通过比较试验可以看出，杂交灵芝菌株的母种、原种和栽培袋中的菌丝生长速度都是最快，菌丝活力和适应性较强。同时栽培袋污染率低，但是出菇晚、子实体成熟早、营养积蓄少，子实体菌盖的增大和加厚不充分，生物学效率低，这可能与菌株本身是杂交而成有关系。但杂交菌株生长周期短，污染率底，菌盖不规则，可能更适合于做盆景。

三明和广1号两菌株相对于其它3个菌株，具有菌丝生长速度快、污染率低等特点，但生物学效率不高，子实体虽然大但厚度薄，孢子粉产量偏低，不利于作为优良菌株在梅州应用推广。而G8和本地2个菌株菌丝雪白浓密，气生菌丝量多，子实体原基形成快，菌盖大小适中且厚实，出芝较整齐，子实体形状和色泽好，产孢量多，生物学效率高，具有较高的商品价值。综上所述，G8和本地2个菌株在梅州气候条件下栽培的子实体生物学性状好、产孢量多、生物学效率高，是适合本地区生产推广的优良菌株。

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