中药香附中促进胃肠动力有效组分提取方法研究

赵洪超

（沈阳市苏家屯区中医医院制剂室，辽宁 沈阳110101）

香附为莎草科植物莎草Rhizoma cyperi rotundusL.的干燥根茎，主产于山东、浙江等地，有行气解郁，调经止痛的功效，常用于治疗肝郁气滞，胸、胁、脘腹胀痛，消化不良，胸脘痞闷，寒疝腹痛，乳房胀痛，月经不调，经闭痛经[1]，被历代中医誉为“气病之总司，女科之元帅”[2]。香附中主要成分为挥发油类，另外，文献报道还有黄酮类、三萜类、糖类、生物碱类、酚类和萜类等[3]。香附具有抑制胃排空，促进肠传输的作用[4]。因此，对香附挥发油以外成分的深入研究对于揭示香附广泛的药理作用是十分有必要的。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-1800型紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器有限公司）；HSS型电子恒温水浴锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-DⅢ型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）。

1.2 试药

香附药材（辽宁本溪三药有限公司）；芦丁对照品（供含量测定用，批号：080-9002，中国药品生物制品检定所）；亚硝酸钠（沈阳化学试剂厂）；硝酸铝（天津天河化学试剂厂）；氢氧化钠（天津福晨化学试剂厂）。

2 方法与结果

2.1 紫外分光光度法

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称定芦丁对照品9.27mg，用甲醇溶解，定容于50mL量瓶中，得到浓度为0.1854 mg/mL标准溶液。

2.1.2 检测波长的选择

精密吸取芦丁标准溶液2mL，置于10mL容量瓶中，并依次加入0.3mL的5%NaNO2溶液，摇匀，静置6min，0.3mL的10%A1（NO3）3溶液，摇匀，静置6min，4.0 mL的4%NaOH溶液，摇匀，静置15min，于200～800nm范围内进行全波长扫描，结果在510nm有最大吸收峰，故确定检测波长为510nm。

2.1.3 标准曲线的绘制

分别精密吸取1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL芦丁标准溶液置于10mL容量瓶中，并依次加入0.3mL的5%NaNO2溶液，摇匀，静置6min，0.3mL的10%A1（NO3）3溶液，摇匀，静置6min，4.0mL的4%NaOH溶液，摇匀，静置15min。再取甲醇定容。用紫外分光光度计在510nm测定对照品溶液的吸光度，对照品溶液与吸光度的线性关系为y=10.128x+0.0685，R=0.9995。香附中总黄酮以芦丁计在0.02～0.08mg/mL范围内线性关系良好。

2.2 香附总黄酮提取工艺考察

2.2.1 香附总黄酮提取醇浓度考察

①称取香附粗粉（过60目筛）7份，每份5g，置100mL 圆底烧瓶中，分别用水、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇各50mL，加热回流提取1h，放冷，过滤，滤液定容至50mL量瓶，作为供试品溶液。②取以上供试品溶液0.2mL，按标准曲线法测定吸光度，计算总黄酮含量。结果见表1。

表1 香附总黄酮提取醇浓度考察结果

由表1可知，乙醇浓度为60%时香附总黄酮提取含量最高，故确定60%乙醇为香附总黄酮的最佳提取醇浓度。

2.2.2 香附总黄酮提取方法考察

①超声提取法：称取香附粗粉（过60目筛）5g，置100mL 具塞锥形瓶中， 加60%乙醇50mL，超声提取1h，过滤，滤液定容至50mL量瓶，作为供试品溶液。②回流提取法：称取香附粗粉（过60目筛）5g，置100mL 圆底烧瓶中，加60%乙醇50mL，回流提取1h，过滤，滤液定容至50mL量瓶，作为供试品溶液。③取以上供试品溶液0.2mL，按标准曲线法测定吸光度，计算总黄酮含量。结果见表2。

表2 香附总黄酮提取方法考察结果

由表2可知，回流提取法香附总黄酮提取含量高于超声提取法，故确定回流提取法为香附总黄酮的最佳提取方法。

2.2.3 香附总黄酮提取正交设计

选择主要影响提取效率的物料比（A），提取次数（B），提取时间（C），药材粒度（D）为考察因素，采用L9（34）正交表进行实验,因素水平表见表3。

表3 香附总黄酮提取正交因素水平表

取香附粉末约25g，按表3中的要求，加60%乙醇水浴回流提取，放冷，过滤，回收溶剂浓缩提取液，提取液定容至250mL量瓶中，作为样品溶液。精密取样品溶液0.2mL， 按标准曲线法测定吸光度，计算总黄酮含量。精密吸取样品溶液200mL，进行出膏率测定。并以香附总黄酮含量权重系数为0.8，出膏率权重系数为0.2进行综合评分，正交实验结果见表4，方差分析见表5。

表4 香附总黄酮提取正交实验结果

表5 方差分析

经直观分析和方差分析可见，影响香附总黄酮提取的因素大小顺序为B＞D＞C＞A，提取次数具有显著性差异，确定以A2B3C3D2，即8倍量60%乙醇，回流提取3次，每次2h，药材粒度为中粉为最佳提取工艺。

2.2.4 香附总黄酮提取工艺验证

为进一步考察选取工艺的可靠性及稳定性，分别称取药材5份各50g，按2.2.3最佳工艺进行平行实验，按标准曲线法测定总黄酮含量，并计算出膏率，结果见表6。

表6 香附总黄酮提取工艺验证结果

由表6可知正交优选的最佳提取工艺各项指标均优于正交试验中的最高值，说明优化是成功的。

3 讨 论

本实验采用考察不同比例的乙醇浓度对香附总黄酮提取效果的影响，结果发现60%乙醇对香附中总黄酮提取效果最好。有文献报道对香附总黄酮的提取采用超声提取[5]，本实验比较超声提取和回流提取，发现回流提取优于超声提取。在此基础上，本实验物料比、提取时间、提取次数和药材粉碎粒度这四个因素进行四因素三水平正交考察，最终确定香附总黄酮最佳提取工艺为8倍量60%乙醇，回流提取3次，每次2h，药材粒度为中粉。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].Ⅰ部.北京：化学工业出版社,2010：181.

[2] 明•李时珍.本草纲目(校点本上册)[M].北京：人民卫生出版社,1982： 888.

[3] 黄险峰,彭国平.香附的化学成分及药理研究进展[J].中药材,2003,26(1)：65.

[4] 王贺玲,等.理气中药对鼠胃肠动力的影响[J].世界华人消化杂志,2004,12(5)：1136-1138.

[5] 黄锁义,罗建华,张丽丹,等.香附总黄酮的超声波提取工艺研究[J].时珍国医国药,2008,19(1)：142-142.