菊花、金银花浸膏的提取工艺研究

朱焕容 黄晓丹 罗燕玉 黄卓芸

广州王老吉药业股份有限公司，广东广州 510450

菊花为菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.）的干燥头状花序。金银花为忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾或带初开的花[1]。菊花和金银花皆为国家批准的既是食品又是药品的物品，皆含有具有抗菌、抗病毒作用的绿原酸，两者均有清热解毒的功效[2]，在我国传统食品如龟苓膏、凉茶中常常组合使用。据文献报道，绿原酸具有多种生物活性，绿原酸可调节淋巴细胞分泌肿瘤坏死因子（TNF-α）和干扰素（INF-α）， 发挥免疫调节作用[3]，绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化的作用[4-5]，对多种疾病的预防和治疗具有作用，应用前景较好[6]。

菊花、金银花为本公司开发的新产品菊花龟苓膏中的主要组成成分，现对菊花金银花浸膏的提取工艺进行研究，参考相关文献，采用正交试验法[7-8]，为菊花龟苓膏的生产提供科学依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent 1200 高效液相色谱仪，DAD检测器，自动进样器。

1.2 试药

绿原酸对照品（批号：110756-200110，中国药品生物制品检定所提供），流动相用甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。菊花、金银花均经我公司食品质量部鉴定，菊花为菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.）的干燥头状花序；金银花为忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥花蕾或带初开的花。

2 方法与结果

2.1 菊花金银花浸膏制备方法

采用传统水提法，水提法是提取绿原酸较好的方法[9]。本实验采用3 因素3 水平正交实验设计，因素A提取时间分别为 1、1.5、2 h；因素 B 提取次数分别为 1、2、3 次；因素 C 醇沉浓度分别为63%、70%、75%。取同批菊花金银花药材9 份，每份50 g，按表1 设计进行试验，第1次加药材量9 倍水，第2次加药材量7 倍水，第3次加药材量7 倍水，合并提取液，过滤，浓缩至相对密度为1.05，醇沉，取上清液过滤，上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25，备用。

2.2 绿原酸含量测定方法[10]

2.2.1 绿原酸标准储备液（2.00 mg/mL）称取绿原酸标准品0.02 g（精确至0.000 1 g）置于10.0 mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，混匀（此标准储备液在4℃冰箱中，可保存 5d）。

2.2.2 绿原酸标准使用液（200 μg/mL） 准确量取1.00 mL绿原酸标准储备液于10.0 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀（此标准使用液在4℃冰箱中，可保存5d）。

2.2.3 试样处理 称取2 g菊花金银花浸膏（精确到0.001 g）于25.0 mL容量瓶中，加入20 mL 70%甲醇，超声提取30 min，用70%甲醇定容至刻度，混匀，过0.45μm滤膜，滤液供色谱分析。

2.2.4 标准曲线的制备分别吸取绿原酸标准使用液，用流动相在容量瓶中稀释成浓度分别为 2.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL的标准系列。

2.2.5 液相色谱条件 色谱条件：Diamonsil C18 色谱柱 （5μm，4.0 mm×250 mm）；流动相：乙腈-0.5%乙酸溶液（10∶90）；流速：1.0 mL/min；检测波长：327 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。

2.2.6 色谱分析 取标准溶液和试样溶液注入色谱柱中，以保留时间定性，以试样峰面积与标准比较定量。

2.3 正交试验

2.3.1 因素与水平 选择提取时间（A）、提取次数（B）、醇沉浓度（C）3 个因素，设计 3 个水平，选用 L9（34）正交表。因素水平见表1。

表1 正交试验因素水平

2.3.2 结果分析 见表2～4。

表2 L9（34 ）正交试验及结果

表3 收率方差分析

表4 绿原酸含量方差分析

从表2 可见，在实验水平范围内，收率较佳的工艺为A3B3C2，绿原酸含量较佳的工艺为A3B2C1。表3、4的方差分析结果表明，A、B、C因素对收率的影响都不显著；A因素对绿原酸含量的影响较大（P＜0.05），B、C因素对绿原酸含量的影响不显著。综合分析结果，主要考虑绿原酸含量，确定此方法的提取工艺为微沸提取2次，第1次加9 倍水，第2次加7 倍水，每次2 h，醇沉浓度为63%。

2.4 最佳工艺验证

按照上述优化工艺，平行提取3 份，分别测定收率和绿原酸的含量，收率分别为9.45%、9.65%、9.53%，平均收率为9.54%；绿原酸含量分别为10.33%、9.89%、11.92%，平均含量为10.71%。结果表明，筛选出来的工艺稳定可行。

3 讨论

3.1 提取时间的选择

分析结果表明，提取时间对菊花金银花中绿原酸的含量有显著影响，但是菊花金银花在加水提取的过程中容易变软，提取过长，药渣会严重堵塞管道，影响提取液从管道流出。本次选定的提取时间为每次2 h，基本不影响提取液的流出，在实际生产中要根据设备管道的大小再进行调整。

3.2 醇沉浓度的选择

醇沉浓度对本次提取来说不是显著因素，但是在实际操作过程中发现，醇沉浓度低于63%时醇沉的液和渣分离不彻底，大大影响提取效率，醇沉浓度为63%时，醇沉效果已经较好，绿原酸的含量也较高，不需要再提高醇沉浓度。

菊花金银花浸膏提取精制后作为菊花龟苓膏的主剂，具有两方面的技术优势：②菊花金银花浸膏经过精制后为均匀的中间产品，对保证龟苓膏成品的稳定性及优良的口感发挥重要作用。②菊花金银花提取精制后投料，保证投料准确性及便捷性。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：205-206，292.

[2] 卫生部.卫生部关于进一步规范保健食品原料管理的通知[S].卫法监发[2002]51 号.

[3] 马力，唐凤敏，曾天舒，等.菊花多糖和绿原酸免疫调节作用的研究[J].医药导报，2008，27（10）：1168-1170.

[4] 王宏军，吴国娟，孙健，等.绿原酸的药效学研究[J].医药导报，2008，27（10）：1168-1170.

[5] 刘颖，郭明晔，白根本，等.绿原酸的研究进展[J].中药材，2012，35（7）：1180-1185.

[6] 王丽萍，郭栋，王果，等.中药绿原酸的研究进展[J].时珍国医国药，2011，22（4）：961-963.

[7] 邢俊波，李萍，刘云，等.正交实验法优选金银花中绿原酸提取工艺的研究[J].时珍国医国药，2002，13（6）：321-322.

[8] 张艳丽，孟丽军.金银花中绿原酸提取工艺的正交试验研究[J].唐山学院学报，2007，20（4）：108-111.

[9] 聂凌鸿，岳淼.金银花中绿原酸提取工艺的优化[J].食品研究与开发，2008，29（1）：51-55.

[10] 杨大进，方从容，王竹天，等.中华人民共和国国家标准保健食品中绿原酸的测定[M].北京：中国标准出版社，2008：1-8.