HPLC法测定薏苡仁不同炮制品中5-羟甲基糠醛及糠醛的含量*

张令志 1，吴 皓2，李 伟 2，文红梅2，崔小兵 2**

1江苏宿迁市食品药品检验所，宿迁 223800；2南京中医药大学，南京 210029

薏苡仁，禾本科植物薏苡（Coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟种仁[1]。《本草纲目》列为上品，性凉，味甘、淡。健脾渗湿，除痹止泻。麸炒焦香，糠醛又称麸醛，具有明显的焦香味。按照中医理论，薏苡仁炒焦产生焦香味，有健脾作用，但未见科学的实验证实。根据现代药物化学和药理学研究证明，炒焦产生的黄色葡萄糖经热转化而成具有毒副作用的5-羟甲基糠醛。所以《中国药典》对葡萄糖输液等规定了5-羟甲基糠醛的限量（比色法）。为了进一步全面研究5-羟甲基糠醛的健脾作用和毒副作用，首先要建立一个比较精确的含量测定方法。本文首次通过HPLC法比较了薏苡仁生品、薏苡仁麸炒品、薏苡仁清炒品中5-羟甲基糠醛及糠醛含量的变化，通过测定5-羟甲基糠醛及糠醛含量，可为薏苡仁炮制提供了一个客观的评价方法，为焦香健脾理论提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

waters-2695液相色谱仪，PDA检测器。

1.2 药品与试剂

5-羟甲基糠醛及糠醛对照品（均购于中国药品生物制品检定所，批号分别为111626-201007、110709200304）；样品，薏苡仁经南京中医药大学王春根教授鉴定为禾本科植物薏苡（Coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟种仁。

甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯；水为二次蒸馏水。

1.3 样品制备

样品依据中药炮制的相关理论。本实验将薏苡仁加工为清炒薏苡仁、麸炒薏苡仁。每种炮制方法各平行炮制3份。

清炒薏苡仁:称取适量干净薏苡仁，置烧热的平底锅中，用文火加热，炒至深黄色，有香气，取出放凉。

麸炒薏苡仁:称取适量麦麸（每100g薏苡仁，用麦麸15 g），置烧热的平底锅中，炒至冒烟，放入干净薏苡仁，不断翻炒，炒至深黄色，筛去麸皮，薏苡仁和麸皮放冷备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:welchrom C18（250 mm×4.6 mm）；流动相:甲醇-0.5%醋酸水溶液（5∶95）；检测波长:276 nm；流速:1.0 mL·min-1，柱温:35℃，进样:10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取对照品5-羟甲基糠醛7.5 mg，用20%甲醇定容至10 mL；对照品糠醛7.5 mg，用20%甲醇定容至100 mL；分别制得对照品储备液，再吸取上述两储备液各1 mL，加20%甲醇定容至50 mL，配制成 5-羟甲基糠醛 15 μg·mL-1、糠醛 1.5 μg·mL-1的对照品混合溶液。

2.2.2 供试品溶液

称取麸炒薏苡仁样品细粉约0.5 g，精密称定，置10 mL量瓶中，加20%甲醇8 mL，超声处理30 min，加20%甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 分别精密吸取上述混合对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.4 mL 置于 10 mL量瓶中，加入20%的甲醇水溶液定容至10 mL。按上述色谱条件测定峰面积，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程分别为:5-羟甲基糠醛 Y=7.986×104X+1685.7，r=0.9999；糠醛 Y=3.196×104X+107.44，r=0.9998。表明 5-羟甲基糠醛在 0.15～3.6 μg·mL-1、糠醛在 0.015～0.36 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10 μL，重复进样6次，测得5-羟甲基糠醛糠、糠醛峰面积，其RSD值分别为0.28%、0.35%。

2.3.3 重复性试验 取同一批麸炒薏苡仁样品，平行6份，按“2.2.2”项制备，平行测定两次，结果5-羟甲基糠醛和糠醛含量的RSD分别为0.98%、1.06%。表明该方法重复性好。

2.3.4 稳定性试验 取同一份麸炒薏苡仁供试品溶液，在 1、2、4、8、12、24 h 分别进样，每次进样 10 μL，测得5-羟甲基糠醛、糠醛峰面积对数的RSD分别为0.21%、0.40%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.5 回收率试验 精密称取麸炒薏苡仁样品5份，每份约0.25 g，再精密加入对照品储备液0.2 mL（5-羟甲基糠醛 15 μg·mL-1、糠醛 1.5 μg·mL-1），按照“2.2.2”供试品溶液制备加样回收样品溶液，分别进样，每次进样10 μL，测定，计算回收率。结果5-羟甲基糠醛、糠醛的平均回收率分别为98.76%、100.84%，RSD分别为1.51%、1.32%。结果见表 1、表 2。

表1 麸炒薏苡仁中5-羟甲基糠醛加样回收试验结果（n=5）

表2 麸炒薏苡仁中糠醛加样回收试验结果（n=5）

2.3.6 样品的含量测定 薏苡仁不同样品按“2.2.2”项制备，取10 μL进样，以标准曲线计算含量，平行3份，每份进样2次。结果见表3，色谱图见图1。

表3 薏苡仁不同炮制品中5-羟甲基糠醛及糠醛的含量测定（n=5）

图1 薏苡仁不同炮制品色谱图

3 讨 论

3.1 色谱条件的选择

比较了甲醇-水、甲醇-0.5%HOAc等不同系统和比例的流动相。先后采用甲醇-水（10∶90），甲醇-水（5∶95），甲醇-0.5%HOAc（8∶92），甲醇-0.5%HOAc（7∶93），甲醇-0.5%HOAc（6∶94），甲醇-0.5%HOAc（5∶95）的流动相进行试验。结果表明，以甲醇-0.5%HOAc（5∶95）为流动相，能达到满意的分离效果，且操作简便。

3.2 样品提取条件的选择

称取样品0.5 g，置于10 mL量瓶中，加入不同浓度的甲醇水溶液定容至10 mL（20%、40%、50%、70%），超声不同的时间（15、30、45、60 min），结果表明20%甲醇、提取时间30 min基本提取完全。

3.3 薏苡仁不同炮制品中5-羟甲基糠醛及糠醛的含量分析

根据中医药理论，麸炒焦香健脾，糠醛具有明显的焦香味。由结果可见，炒薏苡仁中5-羟甲基糠醛含量为生薏苡仁的7倍,糠醛含量为生薏苡仁的2倍，说明加热可促进5-羟甲基糠醛、糠醛的产生；麸炒薏苡仁中5-羟甲基糠醛含量为生薏苡仁的31倍，糠醛含量为生薏苡仁的6倍，说明加热以及麦麸都可促进5-羟甲基糠醛、糠醛的产生，而5-羟甲基糠醛、糠醛是麸炒过程中麦麸发生梅拉德反应（麦麸中糖与氨基酸）的产物。本文以5-羟甲基糠醛、糠醛含量来评价薏苡仁的不同炮制品，可以很好的控制其质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社，2010:353.