高效液相色谱法同时测定骨筋丸胶囊中龙胆苦苷和芍药苷的含量

李 楠 1，杨燕飞 1，陈 燕 2

1镇江市药品检验所，镇江 212003；2南京中医药大学，南京 210046

骨筋丸胶囊是由乳香、没药、白芍、延胡索、三七、木香、红花、郁金、独活、牛膝、秦艽、桂枝、血竭、马钱子等14味中药组成的制剂，具有活血化瘀、舒筋通络、祛风止痛的功效。用于治疗肥大性脊椎炎、颈椎病、足跟骨刺、增生性关节炎、大骨节病等[1-3]。收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册中，为了更好地控制制剂质量，采用高效液相色谱法同时测定骨筋丸胶囊中龙胆苦苷和芍药苷的含量。

1 仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪（DAD检测器、安捷伦科技）。

龙胆苦苷对照品（批号为110770-200712，99.1%）、芍药苷对照品（批号为110736-200934，95.7%）均由中国药品生物制品检定所提供；骨筋丸胶囊（黑龙江省济仁药业有限公司，批号为090502，贵州康纳圣方药业有限公司，批号为20090905、20110201）；甲醇（色谱纯），其它试剂均为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:大连依利特C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相:甲醇-水梯度洗脱（0～15 min 甲醇 20%～30%，15～16 min甲醇 30%～20%，16～20 min甲醇 20%）；流速:1.0 mL·min-1；检测波长:230 nm；柱温:30℃；进样量:10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

龙胆苦苷对照品22.32 mg，加甲醇制成1 mL含0.1096 mg的溶液；芍药苷对照品20.74 mg，加甲醇制成1 mL含0.09924 mg的溶液，分别作为贮备液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，混匀，取0.25 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇15 mL，超声处理30min，放冷，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

阴性试验:按处方称取除白芍、秦艽外的其余中药，按成熟工艺制备白芍、秦艽阴性样品溶液，再按“2.3”项下的方法进行操作，注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图，结果显示，其他成分对龙胆苦苷、芍药苷含量测定无干扰。见图1。

2.4.1 线性关系考察 分别精取贮备液适量，加甲醇稀释成每1 mL含龙胆苦苷0.08295 mg、芍药苷0.01489 mg 的混合溶液，分别精密吸取 2、3、5、7、10、15 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，读取峰面积。以峰面积（A）对进样量（C）作线性回归，龙胆苦苷 回 归 方 程 :A=821.18C-2.2008，r=1.0000，在0.1659～1.244 μg范围内呈良好线性关系；芍药苷回归方程:A=1368.6C+1.1226，r=0.9999，在 0.02978～0.2234 μg范围内呈良好线性关系。

图 1 HPLC色谱图（A）对照品；（B）供试品溶液；（C）阴性对照溶液 1:龙胆苦苷；2:芍药苷

2.4.2 精密度实验 取线性关系考察项下的混合溶液，照“2.1”项下色谱条件，吸取5 μL注入液相色谱仪中，连续进样6针，记录色谱图，读取峰面积，龙胆苦苷的RSD为0.16%，芍药苷的RSD为0.31%。本方法进样精密度较好。

2.4.3 重复性试验 取本品内容物0.50 g（贵州康纳圣方药业有限公司，批号20110201），按供试品溶液制备方法制备供试品溶液6份，按“2.3”项下的方法提取，吸取5 μL注入液相色谱仪进行检测，记录色谱图，读取峰面积，计算含量，龙胆苦苷含量为3.400 mg·g-1，其 RSD为 1.78%，芍药苷含量为0.5131 mg·g-1，其 RSD 为 1.59%。

2.4.4 稳定性试验 取本品内容物0.50 g（贵州康纳圣方药业有限公司，批号20110201），按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别于室温放置0、2、4、8、16、24 h 进样，照“2.1”项下的色谱条件，吸取 5 μL注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，读取峰面积。龙胆苦苷的RSD为1.00%，芍药苷的RSD为1.47%。表明本品供试品溶液在24小时内稳定。

2.4.5 回收率试验 取本品内容物0.50 g（贵州康纳圣方药业有限公司，批号20110201，其龙胆苦苷含量为 3.400 mg·g-1，芍药苷含量为 0.5131 mg·g-1）、0.25 g，各6份，精密称定，分别加入龙胆苦苷贮备液7mL、芍药苷贮备液1 mL，按“2.3”项下的方法操作，测得龙胆苦苷和芍药苷的量，平均回收率分别为98.4%和96.8%，RSD分别为1.64%和2.43%。

2.5 样品含量测定[4]

取 3 批样品，按“2.3”方法提取，照“2.1”色谱条件进行测定，结果见表1。

表1 样品含量测定结果（mg·g-1）

3 讨 论

由于处方中白芍和秦艽的处方量较大，故易于控制其质量，对血竭、马钱子的相关检测方法已有参考文献报道，同时考虑到对照品的来源等综合影响因素，故最终采用本文方法进行骨筋丸的质量控制，在实际工作中可以考虑综合多种方法对骨筋丸的质量进行全面控制。

[1]卫生部药品标准.中药成方制剂[S].第十三册，139.

[2]国家药品标准[S].试行标准YBZ05282004.

[3]国家药品标准[S].试行标准YBZ11062005.

[4]吴美香，高洪琳，张 霞，等.骨筋丸胶囊中秦艽的龙胆苦苷的检测研究[J]. 中国药品标准，2011，12（3）:202-5.