沂南县养鸡场新城疫抗体水平监测

张桂贤

（临沂大学生命科学学院动物疫病抗体检测中心，山东临沂 276005）

新城疫以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征[1]。目前出现的鸡新城疫发病率一般在10%～25%，死亡率在15%～35%，产蛋鸡产蛋率下降30%左右，是危害养禽业的一种主要传染病[2]。沂南县某规模化蛋鸡场采血样50份向我院动物疫病抗体检测中心送检，以监测鸡场新城疫抗体水平，为鸡场后续免疫计划的制定奠定基础。

1 材料

1.1 仪器

电子天平、离心机、高压锅、pH计、冰箱、移液枪（0-100 μL，0-1000 μL）、恒温箱。

1.2 试剂

1.2.1 试验试剂

阿氏液（红细胞保存液）、3.8%柠檬酸钠、pH值7.2 0.01 mol/L PBS、1%鸡红细胞悬液均自配。

1.2.2 生物制品

鸡新城疫血凝抑制试验抗原、鸡新城疫血凝抑制试验阳性血清均购自哈尔滨维科生物技术开发公司批号分别为201105、201101。

2 方法

2.1 血样的处理

血液样品50份，将其编号，待样品凝固后自然析出血清可直接吸取血清待检或将血液样品2000-3000 rpm离心15 min，用移液枪吸取血清加入灭菌的0.5 mL离心管。若需较长时间保存血清，可置于4 ℃或 -20 ℃冰箱。

2.2 鸡红细胞悬液

用2 mL注射器采集未免疫的健康公鸡（翅静脉采血）的血液于含有抗凝剂的灭菌离心管内（按每mL血加入3.8%灭菌柠檬酸钠0.2 mL做抗凝剂），迅速混匀。如当时不用，可采血放入阿氏液内（保存液2份，血液1份）于4 ℃冰箱内可保存两周。再用pH值7.2的0.01 mol/L PBS液洗涤3次，每次均以1 000 r/min离心10 min，洗涤后用PBS配成0.5%～1%（V/V）红细胞悬液[3]，4 ℃保存备用。对免疫状态不明的鸡，应至少洗涤5次，每次离心后都要将红细胞上层的灰白色层（白细胞、血小板等）吸除。

2.3 抗原、阳性血清的配制

均用2 mL PBS溶解。溶解后用0.5 mL EP管分装，每支100 μL，-20 ℃冻存，随用随取，切忌反复冻融。

2.4 微量血凝及血凝抑制试验

严格按照新城疫微量红细胞凝集抑制试验操作规程（SN/T 1109—2002）操作。

3 结果

3.1 微量血凝试验

经血凝试验表明新城疫血凝抑制试验抗原血凝价为6 log2，则4单位抗原的稀释度为1:64。经4单位抗原的验证试验表明，4、2、1个血凝单位孔红细胞应出现完全凝集，0.5个血凝单位孔红细胞应出现50%凝集。新城疫血凝抑制试验抗原血凝价测定准确可靠。

3.2 微量血凝抑制试验

对50份血清经血凝抑制试验结果见下表1。

表1 新城疫抗体效价分布情况

4 讨论

4.1 试验结果表明沂南县该养殖场新城疫平均抗体效价为9.4 log2，远远大于5 log2，抗体水平较高，能抵抗新城疫病毒的侵入，该养殖场新城疫防疫工作效果好，鸡群不需要补种。但新城疫抗体水平会逐渐回落，一般认为雏鸡HI价≤4 log2时需进行首免，成年鸡HI价在6 log2时便需进行免疫接种[5]。

4.2 新城疫一般情况要用血凝抑制试验检测1日龄雏鸡的母源抗体，依据公式：首免日龄=4.5×（1日龄HI滴度－4）+5，一般为1～10日龄。如果监测发现大部分鸡只抗体水平较低，而少数抗体效价过高（≥9 log2）时，表明鸡群极可能遭受野毒的侵袭，必须采取紧急防制措施[6]。

4.3 由于养殖业对新城疫的重视以及预防免疫措施的改进，新城疫控制的比较好，自上世纪以来没有大规模的流行。临床上新城疫的发生多以非典型性形式出现，且新城疫常以大肠杆菌、传支、法氏囊、禽流感等混合或继发感染，给本病的诊断带来困难[7]。必须遵循“预防为主，养防结合，防重于治”的原则。从加强饲养管理着手，加强营养，改善环境，提高机体抵抗力；科学制定免疫程序，正确使用疫苗，及时做好免疫抗体监测，才能有效防控疫病的发生，提高鸡的健康水平和生产性能，确保养鸡业的健康发展。

[1]王林业.鸡新城疫的症状及防治[J].畜禽业，2011，21（8）：59.

[2]韩宪友.鸡新城疫发病特点及防治对策[J].养殖与饲料，2008，（2）：41.

[3]赵瑞宏，张丹俊，潘孝成.不同新城疫疫苗和免疫途径对鸡新城疫HI抗体的影响[J].现代农业科技，2009，37（19）：38.

[4]杨萍.血凝抑制试验（HI）影响因素探讨[J].吉林农业，2011，22（7）：64.

[5]董志刚.怎样制定一个合理的免疫程序[J].兽医导刊，2011，4（8）：41.

[6]方远书，祝丽丽.鸡新城疫的诊断和综合防控措施探讨[J].山东畜牧兽医，2011，32（7）：30-32.

[7]李言谱，尤永君，徐兆强.当前我国主要禽病的流行特点及防治措施[J].中国动物保健，2011，12（8）：42.