枳椇云母汤对大鼠肝组织和胃黏膜乙醇脱氢酶活性及血乙醇浓度的影响

张敏娜 杭州市肿瘤医院中西医结合科 杭州 310002

张永华 杭州市第七人民医院

随着我国居民生活方式、膳食结构的改变和酒类产量及品种的增加，自然人群中嗜酒者比例呈上升趋势，酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）的发病率高达20%[1]。ALD已成为我国仅次于病毒性肝炎的第二大肝脏疾患[2]。目前西医治疗该病以戒酒、对症支持治疗为主，而中医在防治该病方面有独特之处。本实验旨在通过检测大鼠急性酒精性肝损伤后肝组织和胃黏膜ADH活性及不同时间点血浆乙醇浓度的变化，探讨枳椇云母汤对急性酒精性肝病的保护作用。

1 实验材料

1.1 动 物 清洁级SD大鼠60只，体质量200～250 g，雄性，由浙江中医药大学实验动物中心提供,许可证号为 SYXK（浙）2008－0074。

1.2 药物及制备 枳椇子（产地：陕西，由杭州市红十字会医院中药房提供）适量加2倍量水浸泡8h，再加水煎煮两次，第一煎加4倍量水，煎煮30～45 min，第二煎加2倍量水，煎煮30 min，煎液合并，滤过，浓缩；枳椇子浓缩液加蒸馏水配制成生药含量0.3 g/mL浓度备用。硫普罗宁肠溶片（商品名：凯西莱，批号081006，河南省新谊药业股份有限公司）研磨成细粉，用蒸馏水充分混匀，溶液浓度1.7 mg/mL。云母粉（批号浙Y20000072，杭州桐君堂医药药材有限公司）用蒸馏水充分混匀，生药含量0.25 g/mL；56%红星二锅头酒（批号GB/T10781.2－2006，北京红星股份有限公司）。

1.3 试剂及仪器 ADH检测试剂盒（南京建成生物技术研究所，批号20090220）。0412－1型台式低速离心机（上海手术器械厂生产）；5810R冷冻型台式大容量高速离心机（德国eppendorf股份公司生产）；Agilent6890N气相色谱仪（美国－德赛威有限公司生产）。

2 实验方法

2.1 造模及给药 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、全方组（枳椇云母组）、拆方组（云母组、枳椇子组）、对照组（凯西莱组），每组10只。正常组每天定时以1.4 mL/100g生理盐水灌胃，45 min后再次给予生理盐水1 mL/100g灌胃；其余各组分别定时以1.4 mL/100g二锅头灌胃，45 min后模型组给予生理盐水1 mL/100g灌胃；枳椇云母组给予枳椇云母液1 mL/100g灌胃；枳椇子组给予枳椇子液1 mL/100g灌胃；云母组给予云母液1 mL/100g灌胃；对照组给予凯西莱溶液1 mL/100g灌胃。均在正常饲料喂养的基础上造模10天[3-4]。

2.2 标本采集 造模最后1天禁食12 h，根据预实验结果血乙醇浓度的峰值在给酒后2 h～2.5 h，因此在最后一次给药后1 h，除正常组外，其余各组大鼠眼球采血2 mL，0.5 h后（即给药后1.5 h）再次采血2mL，分别放入肝素钠抗凝管内，待测。大鼠称重，用10%戊巴比妥（0.3 mL/100g）麻醉后，取肝右叶组织约0.5g左右，预冷的生理盐水冲洗后滤纸吸干，称重，制成10%组织匀浆，离心后取上清液；将胃组织冲洗后刮取胃体部胃黏膜组织，滤纸吸干称重，制成10%组织匀浆，离心后取上清液，待测。

2.3检测指标及方法

2.3.1 肝组织和胃黏膜ADH活性 采用分光光度连续比色法测定，按试剂盒说明操作。

2.3.2 血浆乙醇浓度测定 采用顶空气相色谱仪检测，然后将乙醇浓度对各自峰面积进行线性回归A=0.0065C+0.0246，求出相关系数。

3 实验结果

3.1 一般情况 正常组大鼠毛色光泽，精神状态良好，饮食、二便及体质量增长正常；模型组大鼠毛色差、缺少光泽，倦卧少动，食量减少，大便溏，体质量增长慢；全方组、拆方组、对照组均有不同程度的倦卧少动、食量减少、大便稀溏。

3.2 各组肝组织及胃黏膜ADH活性比较 实验后模型组大鼠肝组织及胃黏膜ADH活性高于正常组（P＜0.05）；枳椇云母组肝组织及胃黏膜ADH活力与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），与拆方组（枳椇子组、云母组）、对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；拆方组（枳椇子组、云母组）与模型组比较，肝组织和胃黏膜ADH活性明显升高（P＜0.05），与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1各组大鼠肝组织和胃黏膜ADH活性比较（±s）U/mgprot

表1各组大鼠肝组织和胃黏膜ADH活性比较（±s）U/mgprot

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与对照组比较，▲P＜0.05；与枳椇云母组比较，☆P＜0.05

组 别 n/只正常组 10模型组 10肝组织1.06±0.04 1.50±0.06*胃黏膜0.78±0.07 1.10±0.04*枳椇子组 10 1.65±0.07△☆云母组 10 1.61±0.08△☆1.20±0.07△☆1.22±0.04△☆枳椇云母组 10 1.72±0.05▲△△对照组 10 1.59±0.06△1.38±0.06▲△△1.19±0.09△

3.3 各组大鼠血浆乙醇浓度比较 给药后1h、1.5h，枳椇云母组、拆方组（枳椇子组、云母组）、对照组血中乙醇浓度明显低于模型组（P＜0.05，P＜0.01）；与对照组比较，枳椇云母组血中乙醇浓度明显降低（P＜0.01）；拆方组（枳椇子组、云母组）则无明显差异（P＞0.05），见表 2。

表2各组大鼠不同时间点血浆乙醇浓度比较（±s）mg/dL

表2各组大鼠不同时间点血浆乙醇浓度比较（±s）mg/dL

注：与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与对照组比较，▲▲P＜0.01

组 别 n/只模型组 10给药后1h 360.45±6.14 1.5h 332.25±5.72枳椇子组 10 339.29±5.96△云母组 10 336.09±5.67△311.59±6.02△309.25±5.86△枳椇云母组 10 325.93±6.04△△▲▲对照组 10 341.85±6.73△300.87±6.23△△▲▲313.39±4.96△

4 讨 论

酒精摄入人体后大约 25%通过胃黏膜吸收，75%通过肠道吸收。目前发现乙醇的代谢系统，主要包括乙醇脱氢酶系统和非乙醇脱氢酶系统，乙醇被氧化成乙醛，乙醛又被乙醛脱氢酶氧化成乙酸，最终分解成二氧化碳和水。在正常小剂量或短时间饮酒的情况下，以前一途径即乙醇脱氢酶系统代谢为主，乙醇脱氢酶在体内分布广泛，但主要分布在肝和胃肠[5]。而在大量或长期酗酒者后一途径系统亦亢进，该途径除可产生活性氧外，还主要生成毒素乙醛，对机体的损伤更大。因此如果能够提高ADH活性，使酒精代谢以ADH系统代谢为主，理论上也是对酒精性肝病有效的治疗途径。同时近来逐渐重视胃在乙醇首过代谢（first pass metabolism,FPM）中的重要作用，FPM即饮酒后约有15%～30%的乙醇首先在消化道内被氧化代谢的现象[6]。因此胃黏膜是乙醇代谢的第一道屏障。

枳椇子属养阴、生津、润燥、止渴、凉血类药，可解酒毒、清热利尿、止渴除烦。该药作为传统的解酒药已被广泛应用临床，实验研究证明其具有促进乙醇代谢作用[7]。云母为硅酸盐类矿物白云母，性味甘、平、温、无毒，入肺、脾、膀胱。研究证明[8-9]云母具有良好胃黏膜保护作用。本实验结果显示，枳椇云母汤能明显提高肝、胃ADH活性，降低酒后血浆乙醇浓度。其作用机制可能是抑制消化道对乙醇的吸收，加强乙醇在胃肠道的首过效应，提高大鼠肝脏和胃组织ADH活性，促进乙醇代谢，从而降低血浆乙醇浓度，起到有效的降醇解酒作用，减轻酒精对大鼠机体及肝脏的损害。

［1］Ioannou GN,Morrow OB,Connole ML,et al.Association between dietary nutrient composition and the incidence incidence cirrhosis or liver cancer in the United States population［J］.Hepatology,2009,50（1）:175-184.

［2］矫承媛.中医药防治酒精性肝病实验性研究述评［J］.中医药学刊，2004,22（2）:291-293.

［3］赵静,王泰,张晶,等.大鼠急性酒精性肝损伤模型分析［J］.中日友好医院学报,1996,10（1）:17-19.

［4］罗忠友.解酒剂的实验研究［J］.中药通报,1983,13（4）:28-30.

［5］江正辉,王泰龄.酒精性肝病［M］.北京:中国医药科技出版社,2001：1-3.

［6］Baraoma E,Abittan CS,Lieber CS.Contribution of gastric oxidation toethanol first-pass metabolism in baboons［J］.Alcohol Clin Exp Res,2000,24：946-951.

［7］聂增义.枳椇子对脂多糖诱发长期饲喂乙醇大鼠肝损伤的影响［J］. 国外医学中医中药分册,1998,20（4）：47.

［8］吕海丽.云母颗粒对无水乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤的影响及作用机理的探讨［D］.浙江中医药大学，2007.

［9］钱云，姒健敏，王良静.云母对胃黏膜保护作用机制研究［J］.中国中药杂志，2004，29（8）:781.