5种收涩中药对小鼠S180肉瘤抑制作用初步筛选

郭继龙，苗宇船，关 伟，刘 扬，王世军

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山东中医药大学，山东济南250014）

祖国医学早在两千多年前已经对肿瘤有所认识，并在以后的发展中积累了大量的关于肿瘤治疗的方药、疗法，主要集中在活血化瘀、清热解毒、补中益气方面药物的研究，收涩药物在这方面仅有个别报道。本研究主要采用几种收涩中药对小鼠S180肉瘤抑制作用初步筛选，为中药抗肿瘤拓宽思路与途径。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠80只，体重（20±2）g，雄性，由山西省中医院实验动物中心提供，清洁级，动物合格证号：scxk（京）2001-0003；S180肉瘤，由山东省医学科学院药物所肿瘤室提供。

1.1.2 实验药品 五味子、乌梅、五倍子、椿皮、金樱子由山西中医学院附属医院门诊部提供，经学校中药专家鉴定质量符合实验要求；环磷酰胺（上海华联制药有限公司，批号：031002）。

1.1.3 实验器材 医用图像分析仪（Image-Pro Plus），美国；研究显微镜，美国光学仪器公司；石蜡切片机；小鼠灌胃器，实验室自制。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的制备及给药 S180腹水瘤小鼠腹部皮肤消毒，使用注射器抽吸腹水，与生理盐水按1∶4比例稀释，镜检计数细胞浓度调至约为2×106/L。每只小鼠左侧腋窝消毒后皮下接种0.2 mL肿瘤细胞悬液［1］。实验动物接种肿瘤后随机分为空白对照组、乌梅组、椿皮组、五倍子组、五味子组、金樱子组、环磷酰胺组7组，每组11只。各组小鼠分别标号，称重。于第2天开始给药，空白对照组灌胃生理盐水每只0.2 mL/d；环磷酰胺组给予环磷酰胺每只40 mg/d，药物组灌胃量为成人临床用药量的10倍，即五味子组给予五味子水煎液75 g/（kg·d）、乌梅组给予乌梅水煎液250 g/（kg·d）、五倍子组给予五倍子水煎液75 g/（kg·d）、椿皮组给予椿皮水煎液62.5 g/（kg·d）、金樱子组给予金樱子水煎液225 g/（kg·d）。连续用药7 d后处死动物。

1.2.2 检测指标

1.2.2.1 肿瘤重量及抑瘤率（Z）处死动物，剥离瘤组织，称重。

式中Z代表抑瘤率，T代表各药物实验组平均瘤重，C代表空白对照组平均瘤重。

1.2.2.2 胸腺指数（X）处死动物，摘下胸腺，称重。

1.2.2.3 瘤组织一般形态学观察 常规HE染色，切片，光镜下观察瘤组织结构及坏死面积。

1.2.2.4 细胞核形态学检测［1］采用Image-Pro Plus图像分析系统，物镜×40，将Feulgen染色片置载物台，随机选择视野（尽量在瘤块的边缘，以染色为紫色最佳），微机摄像机将图像摄入，选择不重叠肿瘤细胞，测试总数80～100个左右，检测细胞核面积（S）、周长（L）、形状因子（Y）、异形指数（X）等四个指标。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 肿瘤组织形态学变化

肉眼观察，与空白对照组比较，各实验组小鼠肿瘤体积较小，颜色苍白，形态较为规则，容易剥离。HE染色镜下观察，肿瘤组织有大片的坏死，严重者可占到面积的一半以上，坏死组织周围有大量的淋巴细胞浸润，但各组之间没有显著的差异性。在没有坏死的肿瘤组织中还可见到凋亡细胞的存在。

2.2 抑瘤率

与空白对照组比较，乌梅组、椿皮组、环磷酰胺组抑瘤作用较强，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；而五味子组、五倍子组、金樱子组也有抑瘤趋势，但与空白对照组比较差异无统计学意义。结果见表1、图1。

表1 对S180肉瘤重量及抑瘤率的影响 （±s）

表1 对S180肉瘤重量及抑瘤率的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，1）P<0.05，2）P<0.01

组别 n 瘤体重量（g）抑瘤率（%）空白对照组 110.692±0.250 -乌梅组 110.412±0.23640.461）椿皮组 110.321±0.28953.612）五倍子组 110.550±0.23620.52五味子组 110.606±0.45614.30金樱子组 110.575±0.58416.91环磷酰胺组 110.350±0.24649.422）

图1 对S180肉瘤重量的影响

2.3 胸腺指数

与空白对照组比较，乌梅组、椿皮组、五味子组、金樱子组胸腺指数偏大，差异具有统计学意义（P<0.05），结果见表 2。

表2 对胸腺指数的影响 （±s）

表2 对胸腺指数的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，1）P<0.05

组别 n 胸腺指数空白对照组 111.93±0.018乌梅组 114.62±0.0281）椿皮组 114.33±0.0201）五倍子组 111.94±0.019五味子组 112.02±0.023金樱子组 114.14±0.0251）环磷酰胺组 111.65±0.015

2.4 肿瘤细胞核形态学观察

经Feulgen染色的细胞，核呈现紫红色，胞质和其他成分呈淡绿色［2］。与空白对照组比较，乌梅组、椿皮组及环磷酰胺组核面积、形状因子及异形指数均降低（P<0.05，P<0.01）。结果见表 3。

表3 对S180肉瘤细胞核形态的影响 （±s）

表3 对S180肉瘤细胞核形态的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，1）P<0.05，2）P<0.01

组别 n 核面积（mm2）核周长（mm）形状因子 异型指数空白对照组 113.056±0.8907.796±0.9091.475±0.3574.279±0.491乌梅组 92.459±0.3481） 6.337±0.4371） 1.307±0.0391） 4.051±0.0611）椿皮组 102.561±0.2611） 6.312±0.4141） 1.241±0.0362） 3.947±0.0392）环磷酰胺组 102.398±0.2582） 5.958±0.3391） 1.182±0.0372） 3.853±0.0602）

3 讨 论

肿瘤一直是困扰人类健康的主要疾病，与心血管疾病、中风并列为人类疾病的三大杀手。中药在抗肿瘤方面也有重要贡献，主要集中在活血化瘀药、清热解毒药、补气药等方面药物的研究。收涩药，又称固涩药，大多性味酸涩，适用于久病体虚、正气不固所致的自汗、盗汗、久泄、久痢、遗精、滑精、遗尿、尿频、久咳虚喘，以及崩带不止等滑脱不禁的证候。这些症状与肿瘤恶病质有相识之处，收涩药物是否也有抑制肿瘤的作用，临床有个别报道［3］。

本实验证明，选取的几种收涩中药对肿瘤都具有一定的抑制作用。但效果并不是都很显著，其中椿皮、乌梅效果较为显著；金樱子、五味子具有一定趋势，效果不是很明显，很可能与给药途径、给药剂量有关系［4］，待进一步研究。

［1］吴细丕，钱林法.实验动物与肿瘤研究［M］.北京：中国医药科技出版社，2000：432.

［2］刘育艳.Feulgen 染色改良法［J］.山西医科大学学报，2000，31（4）：397.

［3］吴秋玲，卢宏达，郭继龙，等.虫类中药抗肿瘤作用研究进展［J］.山西中医学院学报，2010，11（5）：71-73.

［4］彭梅.14种多糖对小鼠S180肉瘤抑制活性筛选［J］.山地农业生物学报，2011，30（1）：56-59.