双水相法提取血橙渣中黄酮类化合物的研究

卓 莉，阮尚全，邓红英

（1.内江师范学院 化学化工学院，四川 内江 641112；2.四川省高等学校 果类废弃物资源化重点实验室，四川 内江 641112）

双水相法提取血橙渣中黄酮类化合物的研究

卓 莉1,2，阮尚全1,2，邓红英1

（1.内江师范学院 化学化工学院，四川 内江 641112；2.四川省高等学校 果类废弃物资源化重点实验室，四川 内江 641112）

探讨双水相法提取血橙渣中黄酮类化合物的最佳工艺条件.采用单因素实验研究了乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比对提取率的影响.结果表明：乙醇体积分数为60%，温度为50℃，时间30m i n，料液比1:25时提取效果最好，提取率可达到0.40%.精密度实验R S D=4.0%.双水相提取血橙渣中黄酮类化合物方法简单，为血橙的深加工提供了一定的实验数据.

双水相法；提取；血橙；黄酮类化合物

血橙（C i t r u s s i n e n s i s）是一个混种的植物，新鲜的血橙是红色或橙色[1]，营养丰富，含有丰富的维生素E，p胡萝卜素，花青素苷和黄酮类化合物等多酚类物质.

黄酮类化合物（f l a v o n o i d s）是经植物光合作用产生的一大类化合物[2-3]，主要是指以2-苯基色原酮为基核的化合物，主要有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇等，以及它们的衍生物[4].黄酮具有广泛的生理活性,因此黄酮类化合物被广泛关注.传统的类黄酮化合物提取方法有溶剂浸提法，水提取法等[5].双水相体系萃取技术是一种高效而温和的分离新技术.

榨汁或食用后的柑桔类废弃物大概占柑橘总重的30%，如若丢弃处理，既污染了环境，又浪费了资源.目前用双水相体系提取血橙渣中黄酮类化合物的研究未见报道.为了更好的开发利用内江血橙，本实验采用水双相法提取血橙渣中的总黄酮.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：A E 240电子分析天平（中国梅特勒一托利多仪器公司），T-6新世纪紫外-可见分光光度计（北京谱析通用仪器责任有限公司）.

试剂：无水乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠（所用试剂均为分析纯），芦丁标准液（称取芦丁标准品0.0200 g，用30%乙醇定容至100 m L容量瓶）.

1.2 材料

血橙(购于内江资中)；样品的制备：将血橙渣在50℃烘干后研磨成粉末.

1.3 实验方法

1.3.1 吸光度的测定

将一定量待测液加入25 m L比色管中，加5%亚硝酸钠溶液1.00 m L，加10%硝酸铝溶液1.00 m L，6 m i n后加氢氧化钠试液6.00 m L，摇匀静置6 m i n，再加30%乙醇定容，放置15 m i n后在510 n m波长处测定吸光度，计算黄酮类化合物的提取率.

1.3.2 乙醇体积分数的影响

称取2.0000 g血橙渣粉5份，分别加入体积分数为30%、40%、50%、60%、70%的乙醇溶液40 m L，在硫酸铵为21 g，温度60℃的条件下回流提取30 m i n后抽滤，滤液用30%乙醇定容至100 m L.分别移取4.00 m L提取液于25 m L比色管中，按实验方法1.3.1测定吸光度.

1.3.3 提取温度的影响

称取2.0000 g血橙渣粉5份，分别加入体积分数为60%的乙醇溶液40 m L，在硫酸铵用量为21 g，分别在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃，回流提取30 m i n后抽滤，滤液用30%乙醇定容至100 m L.分别精密移取2.00 m L提取液于25 m L比色管中，按实验方法1.3.1测定吸光度.

1.3.4 提取时间的影响

称取2.0000 g血橙渣粉5份，分别加入体积分数为60%的乙醇溶液40 m L，硫酸铵21 g，在温度50℃，分别回流提取10 m i n、20 m i n、30 m i n、40 m i n、50 m i n后抽滤，将滤液用30%乙醇定容至100 m L.分别移取4.00 m L提取液于25 m L比色管中，按实验方法1.3.1测定吸光度.

1.3.5 料液比的影响

称取2.0000 g血橙渣粉5份，分别加入体积分数为60%的乙醇溶液20 m L、30 m L、40 m L、50 m L、60 m L，在温度50℃，加入21 g硫酸铵下回流提取30 m i n后抽滤，将滤液用30%乙醇溶液定容至100 m L.分别移取4.00 m L提取液于25 m L比色管中，按实验方法1.3.1测定吸光度.

1.3.6 提取率的计算

根据芦丁标准溶液的回归方程得出提取液中黄酮类化合物的浓度，通过下式计算得出血橙渣中黄酮类化合物的提取率：

黄酮类化合物提取率=（提取出的黄酮类化合物的质量／样品质量）×100%

2 结果与讨论

2.1 标准曲线的制备

吸取芦丁标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 m L分别置于25 m L比色管中，按实验方法1.3.1测定吸光度.以吸光度(A)为纵坐标，浓度(C/μg?m l-1)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为A=0.0146 C-0.0053，相关系数r=0.9996.结果表明芦丁溶液浓度8.00-48.00 μg/m L之间与吸光度值呈良好的线性关系.

2.2 单因素实验

2.2.1 乙醇体积分数的影响

按实验方法1.3.2考察乙醇体积分数对血橙渣中黄酮类化合物提取率的影响，结果见表1.实验数据表明，当乙醇的体积分数低于60%时，随着乙醇体积分数的增加，提取率显著增加，当乙醇的体积分数增加到50%-60%时，提取率比较平缓，乙醇体积分数增加到60%时，黄酮类化合物的提取率达到最高，而超过60%以后，黄酮得率反而降低，可确定当乙醇体积分数为60%时提取效果最好.

表1 乙醇体积分数对提取率的影响

2.2.2 提取温度的影响

按实验方法1.3.3考察提取温度对血橙渣中黄酮类化合物提取率的影响，结果见表2.实验数据表明：提取率随温度的增加先升高后下降，在50℃时提取率最高.

表2 温度对血橙渣中总黄酮提取率的影响

2.2.3 提取时间的影响

按照实验方法1.3.4考察提取时间对血橙渣中黄酮类化合物提取率的影响，结果见图4.结果表明：最佳提取时间为30 m i n，这可能是因为提取时间过短，黄酮类化合物没有被完全提取，时间过长黄酮类化合物因为长时间受热，发生分解或被氧化[16].

表3 提取时间对血橙渣中总黄酮提取率的影响

按照实验方法1.3.5考察料液比对血橙渣中总黄酮提取率的影响，结果见表4.随着料液比增加时，提取剂体积大，提取率反而降低，而料液比太小，提取不完全.本实验在料液比为1∶25时提取率最高.

表4 料液比对提取率的影响

2.3 精密度实验

根据单因素实验2.2的结果，分别称取2.0000 g血橙渣粉末5份，加入60%乙醇溶液50 m L，加21 g硫酸铵，在50℃下回流提取30 m i n，抽滤后，滤液用30%乙醇定容，移取4.00 m L提取液至25 m L的比色管中，并按实验方法1.3.1测定其吸光度后计算黄酮类化合物的提取率.根据提取率计算相对标准偏差.结果如表5所示：

表5 精密度实验结果

由表5可知，双水相法提取血橙渣中黄酮类化合物的提取率为0.40%，S D为0.02，R S D为4.0%，说明该实验方法精密度高.

3 结论

本实验研究双水相体系提取血橙渣中的黄酮类化合物，对影响提取率的因素：乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比用单因素实验进行了分析，确定最优提取条件为：乙醇体积分数60%、提取温度50℃、提取时间30 m i n、料液比1:25，提取率可达到0.40%.该方法的研究对于血橙的综合利用具有一定意义.

〔1〕陈日桥.开发血橙市场前景广阔[J].农技服务，2002（08）：1-2.

〔2〕陈业高.植物化学成分[M].北京：化学工业出版社，2004.223-240.

〔3〕张睿，雅琴，时阳.黄酮类化合物提取工艺研究[J].食品与机械，2003（1)：21.

〔4〕叶文峰.天然黄酮类化合物及其在食品中的应用.宜春师专学报[J].2000，22（5)：42-46.

〔5〕欧阳平，张高勇，康保安.总黄酮的新兴提取技术原理、应用及前景[J].天然产物研究与开发，2003（6）：563-566.

〔6〕王顺明，季长路，任晶晶.超声波协同双水相体系提取芫荽总黄酮的研究 [J].安徽工程科技学院学报，2009，24（3）：29-30.

O 622.4；O 652.62

A

1673-260 X（2012）09-0017-02

四川省教育厅青年基金项目（11ZB022），内江师范学院自然科学基金重点项目（12NJZ02）