鼻内翻性乳头状瘤组织中COX-2的表达及临床意义

范西惠，韩佳利，阎艾慧，李明彦，赵明俊

（1.扬州第一人民医院耳鼻咽喉科，江苏 扬州 225001；2.中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科，沈阳 110001）

鼻腔鼻内翻性乳头状瘤（nasal inverted papilloma，NIP）是一种鼻部常见的良性肿瘤，临床上有侵袭性生长、易复发、易恶变的特点，目前研究认为NIP的发生发展过程是多种基因蛋白相互作用的结果，了解这些基因的表达变化及相关调控机制不仅有助于明确NIP的发病机制，而且为NIP的早期诊断、预防、治疗提供了可靠的理论依据。研究发现，环氧化酶 2（cycloxygenase-2，COX-2）在多种恶性肿瘤的发生、发展和转归中扮演了极其重要的角色。COX-2过度表达可导致前列腺素产物增加，而前列腺素产物可通过抑制细胞凋亡及分化、促进血管生成等多种途径，促进肿瘤的形成［1］。本研究应用免疫组织化学技术，检测NIP及其恶变组织中COX-2蛋白的表达，探讨COX-2与NIP发生发展的关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集2006年1月至2008年12月期间中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科72例NIP患者手术切除的瘤体组织。所有患者随访18个月，诊断均经病理证实，且术前未接受放化疗及长期服用COX-2抑制剂。其中男性42例，女性30例，年龄21～80岁，平均年龄为51.53岁。按Krouse分期［2］：T1期 11例、T2期 19例、T3期 30例、T4期12例。72例根据病理结果是否癌变分为2组：NIP组（60例）和NIP恶变组（12例）。另选择10例因结构性鼻炎同期住院行鼻中隔矫正、下鼻甲部分切除或泡状中鼻甲手术患者的鼻甲黏膜标本作为正常对照，其中男性6例，女性4例，平均年龄49岁。以上标本4%多聚甲醛固定后，石蜡包埋，4 μm厚连续切片置于经多聚赖氨酸防脱玻片上备用。

1.2 主要试剂与方法

兔抗人COX-2多克隆抗体、SABC组化试剂盒、DAB显色剂购自武汉博士德生物科技公司。采用免疫组化SABC法检测COX-2蛋白的表达，染色步骤按说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照，用已知胃癌的阳性切片作为阳性对照。

COX-2免疫组化染色以细胞质出现特异性棕黄颗粒状为阳性染色细胞。采用高清晰度彩色病理图文分析图像软件，在显微镜物镜（×40）及同一外部条件下采集图像，测定阳性染色细胞的平均光密度值（average optical density，AOD）用以表示各组织中COX-2表达的相对量。

1.3 统计学处理

采用SPSS 15.0统计软件，数据用±s表示，行方差分析和t检验，检验水准：α=0.05（双侧）。

2 结果

2.1 COX-2蛋白的表达比较

COX-2蛋白在正常鼻黏膜组织中不表达，在NIP及其癌变组织的上皮细胞胞质中阳性表达，表现为浅黄或深棕色颗粒（图1）；PBS缓冲液代替一抗的阴性对照和阴性片不着色。正常鼻黏膜组、NIP组和NIP恶变组比较，COX-2蛋白的AOD值逐渐增高，分别为（0.14552±0.07937）、（0.18552±0.02201）、（0.228 58±0.027 82）。3组经单因素方差分析后两两比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。

2.2 COX-2表达与NIP复发的关系

60例未恶变NIP患者，分为复发组和初发组。复发组16例患者，曾有1～3次的手术史。复发组和初发组COX-2的表达分别为（0.183 52±0.019 9）和（0.228 58±0.022 6），2组比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 NIP组织中COX-2表达与临床参数的关系

NIP组中COX-2的表达在不同的发病年龄、性别间比较，差异无统计学意义（P>0.05），而吸烟者COX-2的表达高于不吸烟者（P<0.05）。T3+T4期NIP组织中COX-2表达高于T1+T2期，差异有统计学意义（P<0.05），见表 2。

3 讨论

NIP是常见的鼻腔鼻窦良性肿瘤，发病率约占鼻腔鼻窦肿瘤的0.5%～7%。NIP的重要生物学特征是术后易复发和癌变，恶变率为5%～32%，且多恶变为鳞状细胞癌，极少数恶变为腺癌［3］。Roh 等［4］发现炎性细胞很少出现在其他类型的鼻乳头状瘤中，却在NIP中多见，我们在NIP的组织切片中也看到了大量淋巴细胞的浸润现象，因而推测NIP的发生与最初炎性反应有关。前列腺素（prostaglandin，PG）是一类重要的炎性介质，在各种急慢性炎症中发挥着重要作用。COX是一种膜结合蛋白，为PG合成过程中的一个重要限速酶，COX有COX-1、COX-2、COX-3亚型。其中COX-2是一种“早期即刻反应”基因，其在静息状态下不表达，当细胞受到如内毒素、感染因子、生长因子、致癌物等因素刺激后便从头合成，COX-2mRNA量迅速增加，其升高可达20～40倍［5］。本研究显示COX-2蛋白在正常鼻黏膜中不表达，当鼻黏膜伴随炎症时可有少量表达，说明NIP的形成可能与慢性炎症刺激有关。

本研究中复发组COX-2的表达和初发组比较，差异无统计学意义，说明术后复发与组织中COX-2的表达可能无明显关系。导致NIP术后复发的主要因素是手术切除不彻底，特别是额窦和筛板受浸时，手术难度增加，瘤体残留机会增多；其次，手术造成的肿瘤种植也不可忽略。

表2 N I P组织中C O X-2表达在不同临床指标中的比较Tab.2 The corre lation between C ox-2 expression and clinicopa thological features of NIP

近年研究表明COX-2在鼻咽癌、喉癌、下咽癌、口腔癌等头颈部肿瘤的原发灶中表达明显增加［6］。COX-2促进肿瘤恶变可能的机制为：（1）促进肿瘤血管的形成，为肿瘤的生长和浸润提供必需的营养；（2）刺激bcl-2蛋白表达，促进细胞增殖和抑制细胞凋亡，使细胞增殖和凋亡失衡；（3）诱导前致癌物的活化［7］。本研究中发现，从NIP形成至NIP恶变的过程中COX-2的表达量进一步升高，这表明在NIP形成后，炎性刺激因素非但未去除，反而蓄积并慢性累加，致COX-2蛋白的再激活，诱发肿瘤组织恶变。

COX-2蛋白表达与多项NIP相关临床参数进行比较，结果显示NIP组织中COX-2的表达与患者的年龄、性别无明显相关，与吸烟、Krouse分期相关。结果显示，从T1+T2期到T3+T4期，随着NIP病变累及范围的加重，COX-2蛋白表达水平逐渐升高，这说明COX-2蛋白表达与NIP病变侵袭范围相关。另外，NIP吸烟者COX-2表达同不吸烟者比较，差异有统计学意义。吸烟能诱导COX-2的过度表达和活性增强，促使前列素 E2（prostaglandin E2，PGE2）的释放，而PGE2有助于肿瘤的癌变和生长［8］；提示吸烟是NIP发病的高危因素，戒烟对预防NIP发生及恶变可能有一定的临床意义。

综上所述，COX-2蛋白在NIP及其恶变组织中表达上调，可能与NIP的发生、发展及预后密切相关。通过对COX-2的深入研究，寻找判断NIP发生、发展及恶变的可靠证据，可望为NIP的化学预防和靶向治疗提供新的策略和途径。

［1］Telliez A，Furman C，Pommery N，et al.Mechanisms leading to COX-2 expression and COX-2 induced tumorigenesis：topical therapeutic strategies targeting COX-2 expression and activity ［J］.Anticancer Agents Med Chem，2006，6（3）：187-208.

［2］张罗，韩德民，张盛忠，等.鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤［J］.中国耳鼻咽喉头颈外科，2008，15（10）：599-604.

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［4］Roh HJ，Procop GW，Batra PS，et al.Inflammation and the pathogenesis of inverted papilloma［J］.Am J Rhinol，2004，18（2）：65-74.

［5］Zafirellis K，Agrogiannis G，Zachaki A，et al.Prognostic value of COX-2 immunohistochemical expression evaluated by quantitative image analysis in col-orectal cancer［J］.APMIS，2008，116（10）：912-922.

［6］杨立，覃刚，王力红，等.环氧化酶2及其抑制剂与头颈部鳞状细胞癌［J］.国际头颈耳鼻咽喉头颈外科杂志，2007，31（3）：166-169.

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［8］Huang RY，Chen GG.Cigarette smoking，cyclooxygenase-2 pathway and cancer［J］.Biochim Biophy Acta，2011，1815（2）：158-169.