四川省汉族人群Duffy血型基因分型研究

蒿广德，刘 敏，齐文玲，蒲丽蓉，赵素蓉，刘铁梅

（1.广元市第一人民医院输血科，四川 广元 628017；2.吉林大学中日联谊医院输血科，吉林 长春 130021）

四川省汉族人群Duffy血型基因分型研究

蒿广德1，刘 敏1，齐文玲1，蒲丽蓉1，赵素蓉1，刘铁梅2＊

（1.广元市第一人民医院输血科，四川 广元 628017；2.吉林大学中日联谊医院输血科，吉林 长春 130021）

目的 研究四川地区Duffy血型基因型分布，为建立红细胞库奠定基础。方法对150名汉族健康献血者采用PCR-SSP方法进行Duffy血型系统进行基因分型检测。结果四川地区汉族人群Duffy基因分型检测结果，Fya基因频率为：0.929.Fyb：0.071；检出3例Fy（a-b-）个体。结论PCR-SSP法检测 Duffy血型简单、快捷、准确，为建立红细胞库奠定了基础。

Duffy血型；基因分型；红细胞库

（ChinJLabDiagn，2012，16：1209）

1950年在一位多次输血的血友病患者血清中发现的一个抗体，被称为抗Fya，1951年又在一名产妇血清中发现了抗Fyb，这是Duffy血型系统中最常见的两个抗体［1－2］。人血清免疫抗体抗-Fya比较常见，能够引起中至重度的新生儿溶血及溶血性输血反应。而抗-Fyb比较少见，引起的免疫反应较抗－Fya的弱些。Duffy血型系统有6个抗原，即Fya（FY1）、Fyb（FY2）、Fy3（FY3）、Fy4（FY4）、Fy5（FY5）、Fy6（FY6），基因位于染色体1q22-23，由于44号氨基酸的改变出现FY1和FY2这两种基因型，即2个不同的抗原。近些年分子生物学技术在血型研究领域的应用越来越广泛，我们对四川地区150名健康献血者用PCR-SSP方法对Duffy血型的基因分型调查分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本随机抽取150名汉族健康献血者EDTA抗凝全血200μl。采用快速盐析法提取DNA［3］，用 TB溶液30μl溶解待用。

1.2 引物设计根据FY1和FY2基因背景的不同 设 计 引 物 FY1：5’-AATGATCTTCTCCCGAATGGAG-3’；FY2：5’-AATGATCTTCTCCCGAATGGAG-3’。Antisence：5’-CACTGGCCCCACACCTAGGTT-3’，PCR产物长度224bp。人类生长激素（HGH）基因作为内参，特异性引物HGH-A链引物序列为：5’-TGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-3’，HGH-B 链 引 物 序 列 为：5’-CCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTG-3’，扩 增 产 物 为 434 bp。

1.3 Duffy血型基因分型检测条件建立，PCR反应体系为10μl，包括PCR引物混合物（序列特异性引物0.4μmol／L，内参引物0.4μmol／L）、10×PCR Buffer 1μl，dNTP 0.2mmol／L Taq酶 0.1u和DNA 0.4μg。按94℃，3min；94℃，30s、58℃，30 s、72℃，50s；30个循环后72℃，5min；4℃循环参数扩增。

1.4 采用上述方法对150名四川省健康献血者进行Duffy血型基因分型。样本扩增结束后PCR产物在2%的琼脂糖内电泳30min，结束电泳，凝胶成像记录结果。

2 结果

2.1 有Fya基因的个体在FY1特异性引物扩增后出现224bp的特异性条带，有Fyb基因的个体在FY2特异性引物扩增后出现224bp的特异性条带。有Fya基因条带，而没有Fyb基因条带的个体判定duffy血型为Fy（a＋b-）；没有Fya基因条带，而有Fyb基因条带的个体判定duffy血型为Fy（a-b＋）；既有Fya基因条带，又有Fyb基因条带的个体判定duffy血型为Fy（a＋b＋）；Duffy血型基因分型检测结果如图1-2所示。每2个泳道是一份标本检测结果，图1的2份样本检测结果是Fy（a＋b＋）和Fy（a-b-）；图2的2份样本检测结果是 Fy（a＋b-）和Fy（a-b＋）；Fy（a-b-）型个体的检测结果仅有内对照带，没有Fya和Fyb的特异性条带。

2.2 四川地区150名健康献血者样本检测结果Fy（a＋b-）总人数是131人，Fy（a-b＋）总人数是5人，Fy（a＋b＋）总人数是11人，Fy（a-b-）总人数是3人。Duffy血型中Fya的基因频率是0.929，Fyb的基因频率是0.071。见表1。

图1 Fy（a＋b＋）、Fy（a-b-）标本基因分型检测结果

图2 Fy（a＋b-）、Fy（a-b＋）标本基因分型检测结果

表1 四川地区Duffy血型基因分型检测结果

此试验只针对Fya、Fyb基因设计，故Fy（a－b－）3例不在基因频率统计内。

3 讨论

Duffy血型在临床上意义最大的当属Fya和Fyb抗原，人血清中抗-Fya比较常见，而抗-Fyb比较少见。Duffy血型在不同种族中的分布差异较大［4］，在人类学研究中也是一个有用的工具。目前Duffy血型系统共有6个抗原，即Fya（FY1）、Fyb（FY2）、Fy3（FY3）、Fy4（FY4）、Fy5（FY5）、Fy6（FY6）。抗－Fya和抗-Fyb都能引起溶血性反应，严重者可导致死亡。因为血型抗原不合的机率存在，而绝大多数的中国人都带有Fya抗原，产生抗-Fyb的可能性不容忽视［5，6］。分子生物学技术应用日益广泛，直接从基因水平检测Duffy血型，试验结果明确，简单易行。Duffy血型基因分布和献血者资料是建立当地红细胞库不可缺少的。

［1］赵桐茂.主编.人类血型遗传学［M］.北京：科学出版杜；1987，113-115.

［2］赵桐茂，张工梁.中国Duffy血型分布［M］.中华血液学杂志，1982.3（1）：32

［3］Birley AJ，Maclennan R，Wahlqvist M，et al.MN blood group affects response of serum LDL cholesterol level to a low fat diet［J］.Clin Genet，1997，51（5）：291.

［4］Sellami MH，Kaabi H，et al.Duffy blood group system genotyping in an urban Tunisian population［J］.Ann Hum Biol，2008Jul-Aug：35（4）：411.

［5］Sousa TN，Tarazona-Santos EM，et al.Genetic variability and natural selection at the ligand domain of the Duffy binding protein in Brazilian Plasmodium vivax populations［J］.Malar J，2010，9：334.

［6］G rodecka M，Czerwiński M，et al.Analysis of recombinant Duffy protein-linked N-glycans using lectins and glycosidases［J］.Acta Biochim Pol，2010，57（1）：49.

A study on Duffy blood group genotyping of Han in Sichuan

GAOGuang-de，LIUMin，QIWen-lin，etal.（1.TheDepartmentofTransfusionoftheFirstPeople’sHospitalinGuangyuan，Sichuan，Guangyuan，628017，China；2.The DepartmentofTransfusionoftheChina-JapanUnitedHospital）

ObjectiveTo study the distribution of Duffy blood group genotyping in Sichuan in China to establish the red cell bank.MethodsPCR-SSP was used to detect the Duffy blood group genotyping of 150healthy blood donors.ResultsThe genotyping frequency of Fyaand Fybwas0.929and 0.071respectively in healthy blood donors，and 3cases of Fy（a-b-）were found.ConclusionIt is accurate and simple to use PCR-SSP on detecting Duffy blood genotyping，and it is easier to detected to large scale investigation for red cell bank.

Duffy blood type；Genotyping；Red cell bank

R331.1

A

1007－4287（2012）07－1209－02

＊通讯作者

2011－10－25）