针刺对超排卵小鼠子宫内膜形态学的影响

朱书秀，刘 杰，张 英

（1.江汉大学 医学院，湖北 武汉 430056； 2.湖北省妇幼保健院，湖北 武汉 430070）

针刺对超排卵小鼠子宫内膜形态学的影响

朱书秀1，刘 杰2，张 英1

（1.江汉大学 医学院，湖北 武汉 430056； 2.湖北省妇幼保健院，湖北 武汉 430070）

目的：探讨电针对超排卵小鼠子宫内膜组织形态学的影响。方法：将40只小鼠随机分成空白对照组、阴性对照组、COH组和电针+COH组，电针+COH组取关元、中极、三阴交行电针治疗，应用光学显微镜观察子宫内膜厚度、腺体面积、腺体周长等组织形态学的变化。结果：COH组腺体数目少，腺腔小，电针+COH组间质血管丰富，腺体数目较多，腺腔较大，与COH组比较，P＜0.05或P＜0.01。子宫内厚度24 h组间差异无统计学意义，P＞0.05。48 h后，COH组偏薄，与其他组相比，P＜0.05。结论：电针可改善超排卵小鼠子宫内膜成熟度，提高子宫内膜容受性。

针刺；超排卵；子宫内膜

人类辅助生殖技术是20世纪70年代兴起的一种治疗不孕不育症的新方法，该项技术的主体为体外受精-胚胎移植（IVF-ET）。控制性超排卵（COH）是IVF-ET的重要步骤，旨在通过药物手段，在可控制的范围内诱发多个卵泡发育成熟。随着该技术在IVF-ET中的应用，临床受精率已达75%～90%，但胚胎种植妊娠率仍只有20%～35%［1］，其具体原因尚不清。本研究通过建立长周期超排卵动物模型，观察电针对超排卵后子宫内膜组织形态学的影响，初步探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明纯种性成熟小鼠40只，6～8周龄，体重25～30 g。连续观察2个动情周期，随机分成4组，即空白对照组、阴性对照组、COH组和电针+COH组。饲养条件为自由摄食、饮水，环境温度18～22℃，相对湿度60%～80%。

1.2 超排卵程序

依据文献［2］，采用控制性超排卵长方案。首先进行降调节，于每日上午腹腔内注射阿拉瑞林（上海丽珠）40 μg∕100g体重，连续9 d；至第9天同时注射孕马血清促性腺激素（Sigma）40 IU∕100 g体重，1次，进行Gn启动；48 h后注射绒促性素（hCG，Serono）100 IU∕100 g体重。阴性对照组，每日同时给等体积生理盐水，共10 d，空白对照组不进行注射。

1.3 电针治疗

电针+COH组在降调节日（注射阿拉瑞林）即行电针治疗，至取材停止针刺，1次∕d。取“关元”、“中极”、“三阴交”，采用ϕ0.16×7 mm美容针灸针，进针2 mm，关元、中极接韩氏电针仪（HANS-100A），连续波，频率2 Hz，强度1 mA，留针20 min。

1.4 组织定量测量

COH组和电针+COH组在注射hCG后24 h、48 h，空白对照组和阴性对照组自排卵后（阴道涂片呈排卵征象）24 h、48 h，取出子宫经4%多聚甲醛固定后，石蜡包埋，连续切片，常规HE染色。利用HPIAS-1000病理图文分析系统（同济医大千屏音像公司），测量内膜平均厚度，计算机自动测量每个腺体的横断面积、周长。

1.5 统计学方法

2 结果

实验结果见表1、表2。空白对照组和阴性对照组子宫内膜腺体数目多，腺腔大，间质疏松，间质细胞多呈圆形，间质血管丰富，腺上皮细胞呈单层柱状。COH组间质致密，间质细胞多呈梭形，腺体数目少，腺腔小，与空白对照组和阴性对照组比较，P＜0.01，腺上皮呈假复层现象。电针+COH组间质细胞多以圆形为主，少部分呈梭形，间质血管丰富，腺体数目较多，腺腔较大，与COH组比较，P＜0.05或P＜0.01，腺上皮细胞呈单层柱状。但子宫内厚度24 h组间差异无统计学意义，P＞0.05；48 h后，COH组偏薄，与其他组相比，P＜0.05。

表1 24 h各组小鼠子宫内膜形态学指标 （±s）

表1 24 h各组小鼠子宫内膜形态学指标 （±s）

注：与空白对照组比较，a：P＞0.05，b：P＜0.01；与COH组比较，c：P＜0.05，d：P＜0.01。

腺体周长∕μm 191.6±30.88 187.4±25.60a151.1±26.08b176.6±24.53ac组别空白对照组阴性对照组COH组电针+COH组内膜厚度∕μm 401.2±37.55 389.1±35.77a389.7±32.51a438.7±36.66ad腺体面积∕μm22114.2±516.03 1989.3±365.03a1427.0±344.94b1794.8±354.94ad

表2 48 h各组小鼠子宫内膜形态学指标 （±s）

表2 48 h各组小鼠子宫内膜形态学指标 （±s）

注：与空白对照组比较，a：P＞0.05，b：P＜0.05，c：P＜0.01；与COH组比较，d：P＜0.05，e：P＜0.01。

腺体周长∕μm 145.2±19.03 153.8±17.89a99.6±13.81c135.2±17.55ae组别空白对照组阴性对照组COH组电针+COH组内膜厚度∕μm 398.6±20.19 411.4±36.13a372.5±26.73b420.3±26.74ae腺体面积∕μm21633.7±375.25 1513.9±304.43a1241.2±195.14c1447.6±232.23ad

3 讨论

近年来辅助生殖技术临床应用迅速普及，控制性超排卵可同时诱发多个卵泡发育、成熟，得到较多的卵子，但常用的促排卵药物，均对内膜有不同程度的负面影响［3-4］，导致子宫内膜种植窗开放异常，降低辅助生殖技术的妊娠率。本研究显示，控制性超排卵24、48 h后，COH组分泌期子宫内膜厚度与空白对照组、阴性对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），但COH组间质致密，间质细胞多呈梭形，腺体数目少，腺腔小，空白对照组、阴性对照组子宫内膜腺体数目多，腺腔大，间质疏松，间质细胞多呈圆形，间质血管丰富，腺上皮细胞呈单层柱状。两者差异有统计学意义，说明控制性超排卵对子宫内膜发育存在不良影响。

如何提高IVF-ET的妊娠率，仍是生殖医学临床亟待解决的问题。中医学认为：控制性超排卵要求多个卵细胞共同发育，卵泡期由于短时间内天癸大量泌至，必将耗损肾精。超排卵时机体的特殊生理状态系人为的一种相对虚损的状态，其病位在冲任，病机为肾精亏虚。针对这一特定的生理状态，本研究取“关元”、“中极”、“三阴交”进行治疗。因为任脉起于胞中、主胞胎。关元、中极为任脉与足三阴经交会穴，两穴具有温肾暖宫、培补元气之功；三阴交为足三阴经交会穴，可疏通三阴经气血，使经血充沛。三穴相配可补肾精、调冲任、温胞宫。

本研究显示，控制性超排卵小鼠经电针治疗后，间质细胞多以圆形为主，少部分呈梭形，间质血管丰富，腺体数目较多，腺腔较大，与COH组比较，P＜0.05或P＜0.01，腺上皮细胞呈单层柱状。但子宫内厚度24 h组间差异无统计学意义，P＞0.05，48 h后，电针+COH组较COH组厚。提示电针关元、中极、三阴交可通过改善子宫内膜组织形态学指标提高子宫内膜成熟度，发挥对子宫内膜容受性的改善作用。

［1］黄荷凤.现代辅助生育技术［M］.北京：人民军医出版社，2003：110.

［2］王振迎，陈晓勇，陈瑾，等.寿胎丸加减方对超排卵小鼠种植窗期子宫内膜整合素β3蛋白表达的影响［J］.南昌大学学报：医学版，2010，50（3）：33-36.

［3］潘永苗，石一复.GnRHa超排卵对小鼠子宫内膜形态学和雌、孕激素受体表达的影响［J］.生殖与避孕，2002，22（4）：195-198.

［4］高娟，章汉旺.GnRHa超排卵对小鼠着床期子宫内膜厚度及整合素αv、β1表达的影响［J］.现代妇产科进展，2005，14（2）：135-137.

（责任编辑：范建凤）

R245.97

A

1673-0143（2012）06-0056-02

2012－09－21

朱书秀（1973—），男，副教授，博士，研究方向：针灸作用机理。