紫芪颗粒对小鼠免疫功能的影响

易先国，雷咸波，何书海，孙 伟，刘汉儒

（1.信阳农业高等专科学校动物科学系，河南 信阳 464000；2.河南省信阳市光山县动物卫生监督所，河南 信阳 464000；3.西南大学药学院，重庆 北碚 400700）

畜禽免疫抑制性疾病是集约化养殖业所面临的严峻问题，严重制约我国畜牧业的发展。大量文献资料表明，部分中药可调整和明显增强机体免疫功能，使参与细胞免疫的细胞数量增加、活性增强，使参与体液免疫的抗体增加［1］。

紫芪颗粒由紫锥菊、黄芪组成，具有免疫增强及抗病毒的作用［2-3］。本试验采用氢化可的松制造免疫抑制小鼠病理模型，再分组灌胃给药不同剂量的紫芪颗粒溶液，探讨其对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，为紫芪颗粒治疗畜禽免疫抑制性疾病提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 体重为20g±2g小鼠，雌雄各半，由重庆腾鑫生物技术有限公司提供。

1.2 主要药品与仪器 药品：紫芪颗粒（西南大学药学院自制，批号：20091127）；氢化可的松注射液（西南药业股份有限公司，国药准字H50021209，规格：5mL，含量：25mg）。新生牛血清（FCS）（杭州新锐生物工程有限公司，批号：20080302），小鼠淋巴细胞分离液（天津灏洋生物制品科技有限责任公司）。仪器：AC85-268摄影显微镜及配套相机（重庆光学仪器厂），GNP-9080型隔水式恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司），755B紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）。

1.3 主要溶液的配制 无Ca2+、Mg2+Hank′s液：8.00g NaCl、0.35g NaHCO3、0.40g KCl、0.06g Na2HPO4·12H2O、0.06g KH2PO4加 H2O 至1000.00mL，用5.6%NaHCO3调pH值至7.2，115℃灭菌15min。4℃贮藏备用。

5.6 %NaHCO3液：5.60g NaHCO3，加蒸馏水100.00mL，115℃20min灭菌，4℃贮藏备用。

Alserver′s溶液：二水枸橼酸钠8.0g、枸橼酸0.5g、葡萄糖20.5g、氯化钠4.2g加蒸馏水至1000mL、过滤，分装，10磅高压20min，4℃冰箱保存备用。

新生牛血清（FCS）：杭州新锐生物工程有限公司，批号：20080302，购得的新生牛血清先经过56℃，30min灭活后使用。

1.4 试验动物分组及造模 本试验共分为6组，每组10只小鼠，分为正常生理盐水对照组（A）、正常紫芪颗粒药物对照组（B）、免疫抑制模型对照组（C）、紫芪颗粒低剂量组（D）、紫芪颗粒中剂量组（E）和紫芪颗粒高剂量组（F），见表1。

表1 试验动物分组及处理

免疫抑制小鼠模型的建立：氢化可的松免疫抑制小鼠，所用的氢化可的松剂量为75μg／g体重。一般而言，糖皮质激素的抗炎剂量是体内生理浓度的10倍，免疫抑制的剂量应为抗炎剂量的2倍［4］。

1.5 给药剂量和给药时间的确定 根据《新药临床前安全性评价与实践》（袁伯俊主编，军事医学科学出版社），通用公式logS=0.8762+0.698logW（S：体表面积；W：体重）［5-7］，换算成小鼠剂量为0.026 g／d。具体各组用药剂量、次数如下：生理盐水对照组给0.05mL／只·次·d生理盐水；紫芪颗粒低剂量组给0.05mL／只·次·d浓度为0.5g／mL紫芪颗粒溶液；紫芪颗粒中剂量组给0.1mL／只·次·d浓度为0.5g／mL紫芪颗粒溶液；紫芪颗粒高剂量组给0.15mL／只·次·d浓度为0.5g／mL紫芪颗粒溶液。

各抑制组在灌胃给药的第11天皮下注射氢化可的松0.4mL／只·次，隔日1次，共5次，继续给药喂养10d，测定各个指标。

1.6 观察指标与方法 （1）腹腔巨噬细胞吞功能测定 基本按文献［8］方法进行。（2）小鼠外周血淋巴细胞分离及花环形成试验：基本按文献［9，10］方法进行。（3）血清溶血素测定：基本按文献［11］方法进行。（4）脾腺指数测定：按文献［11］方法进行。

1.7 数据处理SPSS分析软件处理。

2 结果与分析

测定结果，见表2。

表2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、E-玫瑰花环形成率、血清溶血素、脾脏指数测定结果 （）

表2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、E-玫瑰花环形成率、血清溶血素、脾脏指数测定结果 （）

注：与生理盐水比较，＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01；与紫芪颗粒+生理盐水组比较，△：P＜0.05，△△：P＜0.01；与生理盐水+氢化可的松组比较，＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01

通过SPSS分析可知，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率：免疫低下模型组与生理盐水组之间差异极显著（P＜0.01），表明用氢化可的松造免疫低下小鼠模型有意义；紫芪颗粒正常药物对照组与生理盐水组之间差异极显著（P＜0.01），紫芪颗粒低、中剂量治疗组与免疫低下模型对照组之间差异极显著（P＜0.01），而与正常生理盐水对照组之间无显著性差异，表明紫芪颗粒低、中剂量能显著的增强免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能，使其达到正常生理水平，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数之间各组差异性不大，紫芪颗粒正常药物组的吞噬指数最高，表明紫芪颗粒能增强正常小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能。

淋巴细胞E-玫瑰花环形成率：免疫低下模型对照组与生理盐水对照组之间差异显著（P＜0.05），表明氢化可的松造模有意义；紫芪颗粒正常对照组与生理盐水对照组之间差异极显著（P＜0.01），表明紫芪颗粒能明显提高正常小鼠淋巴细胞的免疫功能，紫芪颗粒低、中、高剂量抑制组与正常生理盐水对照组之间均无显著性差异，表明紫芪颗粒均能增强免疫抑制小鼠淋巴细胞功能，使其达到正常生理水平。

小鼠血清溶血素生成量：紫芪颗粒正常对照组与生理盐水对照组之间有极显著性差异（P＜0.01），表明紫芪颗粒能极显著的提高正常小鼠血清溶血素量；紫芪颗粒低、中、高剂量组与生理盐水对照组之间均有极显著性差异（P＜0.01），表明紫芪颗粒能极显著的提高免疫低下小鼠血清溶血素量，能使免疫低下小鼠的血清溶血素量高于正常组。

小鼠脾脏功能：免疫低下模型对照组与生理盐水对照组之间差异显著（P＜0.05），表明用氢化可的松造模有意义；紫芪颗粒正常对照组与生理盐水对照组之间差异极显著（P＜0.01），表明紫芪颗粒能极显著的增加正常小鼠的脾脏重；紫芪颗粒低剂量组与生理盐水对照组之间差异不显著，与免疫低下模型对照组之间有显著性差异（P＜0.05），表明紫芪颗粒低剂量能提高免疫抑制小鼠脾脏功能达到正常生理水平；紫芪颗粒中、高剂量组与生理盐水对照组之间差异显著（P＜0.05），与模型对照组之间差异不显著，表明紫芪颗粒中、高剂量组在提高免疫抑制小鼠脾脏功能方面无明显作用。

3 小结与讨论

本文通过对免疫低下模型小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬百分率、淋巴细胞E-玫瑰花环形成率、血清溶血素生成量、鼠脾脏功能指标的测定显示，免疫低下模型组与生理盐水组之间差异极显著（P＜0.01），表明氢化可的松能显著的降低正常小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能，降低正常小鼠的淋巴细胞E-玫瑰花环形成率，降低正常小鼠的血清溶血素生成量和降低正常小鼠的脾脏功能，证明了本试验成功的用氢化可的松制造免疫低下小鼠模型。

通过对紫芪颗粒正常药物对照组与生理盐水组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬百分率、淋巴细胞E-玫瑰花环形成率、血清溶血素生成量、鼠脾脏功能指标的测定显示，紫芪颗粒正常药物对照组与生理盐水组之间各个指标差异都极显著（P＜0.01），表明紫芪颗粒能显著的增强正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，能明显提高正常小鼠淋巴细胞的免疫功能，能极显著的提高正常小鼠血清溶血素生成量，能极显著的增加正常小鼠的脾脏重，证实了紫芪颗粒能明显的提高正常小鼠的免疫功能。

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