便秘型肠易激综合征的SERT基因多态性及其与患者临床疗效的关系

张自翔，谢 军，黄才斌，廖跃光，舒 涛，付曲波

(赣南医学院第一附属医院，江西赣州341000)

5-羟色胺(5-HT)是一种调节消化道功能的神经递质，参与调节胃肠道感觉、运动和分泌功能。5-HT转运蛋白(SERT)可再摄取神经突触间隙的5-HT，对其起灭活作用［1］。国外研究显示，SERT基因启动子区域(5-HTTLPR)与第2内含子可变数目串联重复序列(VNTRs)存在的基因多态性可能与便秘型肠易激综合征(C-IBS)的发病有关，并影响5-HT的药物疗效［2］。2005年1月 ～2007年5月，我们对比研究了C-IBS患者和健康人的SERT基因多态性，并探讨替加色罗治疗C-IBS的临床疗效与SERT基因多态性的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择赣南医学院第一附属医院收治的C-IBS患者84例(C-IBS组)，均符合罗马Ⅲ诊断标准［3］，男 37 例、女 59 例，年龄(44.2 ±13.1)岁，并经大便常规、细菌学检查以及肠镜排除器质性疾患。另选同期健康体检者103例作为对照组，男41例、女62例，年龄(46.2±13.3)岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 SERT基因型检测 抽取研究对象外周静脉血3 ml，EDTA抗凝，采用Omega公司(美国)DNA Blood Mini Kit试剂盒提取基因组DNA。采用PCR扩增，引物序列参照文献［4］由上海博亚生物技术公司合成。5-HTTLPR多态性上游引物:5'-GGCGTTGCCGCTCTGAATGC-3'，下游引物:5'-GAGGGACTGAGCTGGACAACCAC-3'。PCR反应总体积为 25 μL，内含有2×PCR 缓冲液12.5μL，dNTPs各100 μmol/L，引物各5 pmol/μL，Taq DNA 聚合酶1.25 U(TaKaRa)，模板DNA 100 ng。反应条件为:95℃ 1 min、62 ℃ 30 s、72 ℃ 1 min，共35个循环，最后72℃延伸10 min。VNTRs多态性上游引物5'-GTCAG TATCACAGGCTGCGAG-3'，下游引物 5'-TGTTCCTAGTCTTACGCCAGT-3'。PCR反应总体积为25 μL，内含有10×PCR 缓冲液2.5 μL，dNTPs各100 μmol/L，引物各 5 pmol/μL，Taq DNA 聚合酶 1 U(TaKaRa)，模板DNA 100 ng。反应条件为:95℃ 1 min，58 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共36个循环，最后72℃延伸10 min。产物检测用2%琼脂糖凝胶，80 V电压电泳40 min，溴乙锭染色后，用凝胶成像仪观察照相。根据电泳条带长短判定基因型。

1.2.2 治疗方法 从84例C-IBS患者中选择近3个月症状明显又未接受过药物治疗者65例，在2周基线期症状稳定后，给予4周替加色罗6 mg，2次/d，早餐及晚餐前0.5 h服用。于2周基线期和4周治疗期间，采用日记卡由患者自己记录每天腹痛和腹部不适等症状和排便的变化。患者主体症状评估是通过一个长度为10 cm的带刻度的VAS自我评估表格来完成［5］。评分标准:完全缓解为0分，显著缓解为1分，轻度缓解为2分，无变化为3分，恶化为4分。次要症状的评估包括腹痛或腹部不适、大便次数、大便性状改变，采用7分法。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计软件;计量资料以¯x±s表示，组间比较采用ANOVA和t检验;计数资料以百分比表示，组间比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SERT基因多态性

2.1.1 两组Hard-Weinberg平衡检验结果 C-IBS组、对照组5-HTTLPR和VNTRs基因型、等位基因频率期望值与观察值比较差异无统计学意义(P＞0.05)，说明吻合度好，分布达到遗传平衡，具有群体代表性。

2.1.2 启动子区5-HTTLPR多态性位点 启动子区5-HTTLPR共检测出3个等位基因片断，长度依次为484、528、572 bp。根据其长短定义为 S、L 和XL等位基因。共检测到5种基因型，依次为S/S、S/L、S/XL、L/L、L/XL。见表1。

2.1.3 第2内含子区VNTRs多态性位点 第2内含子区VNTRs共检测出2个等位基因片断，长度依次为267、301 bp;共检测到3种基因型，依次为10/10、12/10、12/12。重复串联为9等位基因(250 bp)是已经报道的稀有片断，本研究未发现。见表2。

表2 两组第2内含子区VNTRs区基因型及等位基因分布比较［例(%)］

2.2 替加色罗疗效与SERT基因多态性的关系替加色罗药物治疗65例，其中4例因各种原因退出试验(1例腹痛，1例腹泻，2例失访)。61例完成试验患者中，S/S基因型29例，S/L基因型17例，L/L基因型15例。①主体症状缓解有效率:S/S组为93.1%(27/29)，S/L 组为 70.6%(12/17)，L/L 组33.3%(5/15)，三组间比较差异有统计学意义(P＜0.01)。②主体症状评分:基线期S/S组、S/L组、L/L组主体症状评分分别为(3.02 ±0.38)、(3.00 ±0.41)、(3.08 ±0.39)分;组间比较，P ＞0.05。治疗第4周后三组评分分别为(1.37 ±0.81)、(1.53 ±1.02)和(2.31 ±0.51)分，S/S 组和 S/L 组均比 L/L组疗效好(P均＜0.05)。③次要症状疗效比较:治疗4周后，L/L组与S/S组或S/L组比较，腹痛或腹部不适、大便次数、大便性状等症状评分均有统计学差异(P＜0.05)，S/S组和S/L组间无统计学差异(P ＞0.05)。

3 讨论

研究表明［6］，5-HTTLPR的多态性能产生不同浓度的5-HT转运蛋白;L/L基因型具有高转录活性，是L/S和 S/S基因型的1.4～1.7倍。研究显示，5-HTTLPR、VNRTs区多态性在肠易激综合征与健康人中的分布无差异性，但拥有S/S基因型患者更易患C-IBS，而L/S基因型患者易患腹泻型肠易激综合征(D-IBS)。Yeo等［2］研究发现美国白人5-HTTLPR的S/S基因型与肠易激综合征相关，并可能是D-IBS发病的风险因子。我们的结果显示，在汉族人群中SERT基因5-HTTLPR多态性与C-IBS相关，L/L基因型频率显著高于对照组，提示拥有L/L基因型的人群可能更易患C-IBS。推测L/L基因型高表达SERT蛋白，导致肠神经元突触间隙内的5-HT过多摄取，神经信号传导减弱，致使肠蠕动及分泌功能减弱，出现便秘。

国外研究报告，药物代谢酶、转运体及受体的基因多态性与药物治疗的个体差异性相关［7］。研究发现5-HTTLPR多态性能影响5-HT3受体拮抗剂(氟西汀)抗忧郁的疗效，表现为L/L和S/L基因型疗效较好而S/S基因型疗效较差。Camilleri等［8］在一项对30例D-IBS患者进行阿洛司琼治疗结果显示，L/L基因型患者的结肠转运时间比S/L基因型的更慢，而在S/L与S/S基因型之间则无差异，提示SERT基因L/L基因型对5-HT3受体拮抗剂阿洛司琼可显示更好的疗效。大量国内外研究证实替加色罗能有效缓解C-IBS患者总体症状及便秘、腹痛、腹部不适及腹胀等，安全性良好［9，10］。但临床仍然不乏治疗无效或欠佳的患者。本研究显示，替加色罗治疗S/S组和S/L组均比L/L组疗效好，S/S组和L/S组之间疗效无统计学差异。而且在单个症状的改善方面，S/S组和S/L组优于L/L组，这些数据与Lesch等［4］的研究基本一致。因此我们推测，L/L基因型的高表达致使突触间隙的5-HT超前摄取，减少了5-HT与5-HT1PR和5-HT4R的结合，神经传导减弱，肠运动和分泌减少。尽管替加色罗能高效结合5-HT4R，刺激蠕动反射，促进胃肠运动和肠分泌，但L/L基因型的高表达可能会部分抵消替加色罗的生物学效应，影响其药物疗效。本研究显示SERT基因多态性与替加色罗药物疗效之间存在显著相关性，5-HTTLPR区基因多态性可能成为CIBS患者实现个体化治疗的一个参考指标。

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