IL－8－251A/T多态性与肝癌相关性

侯 波 裴锐锋 (吉林省人民医院急诊外科，吉林 长春 3002)

白细胞介素(IL)－8是趋化因子CXC家族一员，是巨噬细胞和上皮细胞等分泌的细胞因子。大量正常细胞和肿瘤细胞均表达IL－8，主要作用是启动炎症反应，且在肿瘤生长、血管生成、侵袭和转移中发挥重要作用〔1，2〕。IL－8 基因启动子区－251位点存在一个功能性单核苷酸多态性(SNP)位点，即 IL－8－251A/T，携带A等位基因的个体IL－8水平明显增加〔3〕。目前，多项流行病学研究已经证实该多态性位点与多种肿瘤，包括中国台湾地区肝癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌和肺癌等发病相关〔4，5〕。本研究调查 IL－8－251A/T 多态性与中国东北地区肝癌相关性，旨在为揭示肝癌发病机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 我院普外科肝癌患者229例，男157例，女72例，平均(61.5±13.0)岁，均经组织病理学证实。其中，临床Ⅰ～Ⅱ期136例，Ⅲ～Ⅳ期93例;高分化128例，低分化101例;有转移135例，无转移94例;HBsAg阳性117例，HBsAg阴性112例。243例健康对照人群来自我院体检中心，男170例，女73例，平均(60.6±13.3)岁，体检各项指标均正常，无肿瘤家族史及肝炎、肝硬化等肝脏疾病。研究对象均为无血缘关系的汉族个体。

1.2 DNA提取及引物合成 取外周静脉抗凝血2 ml，－20℃低温保存，运用全血基因组DNA提取试剂盒提取DNA(北京百泰克公司)。参照文献〔6〕设计引物，上游引物:5′－ATCTTGTTCTAACACCTGCCACTCT－3′，下游引物:5′－ TAAAATACTGAAGCTCCACAATTTGG－3′。引物由上海生工技术有限公司合成。

1.3 IL－8－251A/T多态性分型 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性(PCR－RFLP)对 IL－8－251A/T多态性进行分型。PCR 反应体系为 25 μl，其中包括基因组 DNA 1.5 μl，上、下游引物各 0.25 μl，10 × 反应缓冲液 3.0 μl，dNTPs 2.5 μl，Mg2+1.5 μl，TaqDNA 聚合酶 1.0 U，无菌去离子水补足 25 μl。PCR扩增条件:94℃预变性4 min;94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，35个循环。PCR扩增产物采用限制性内切酶MfeⅠ酶切消化。8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，硝酸银染色，分析判读结果:TT基因型有121 bp一条带，AT基因型有121、82和39 bp三条带，AA基因型有82和39 bp两条带，其中39 bp跑至胶外。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件，直接计数法计算基因型和等位基因在肝癌组和对照组中的分布，各组基因型和等位基因频率比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 两组IL－8－251A/T多态性基因型频率和等位基因分布比较 两组IL－8－251A/T多态性TT、AT和AA基因型频率及等位基因分布差异不显著(P＞0.05)(表1)。

表1 两组IL-8-251A/T多态性比较〔n(%)〕

2.2 IL－8－251A/T多态性与肝癌临床特征的相关性 根据临床分期、分化程度、转移和HBsAg状态进行分层分析，发现HBsAg阴性肝癌患者中TT基因型分布明显高于HBsAg阳性患者(P=0.002);未发现 IL－8－251A/T多态性与临床分期、分化程度和转移状态具有明显相关性(P＞0.05)(表2)。

表2 IL-8-251A/T多态性与肝癌临床特征的相关性〔n(%)〕

3 讨论

肝癌的危险因素包括乙肝病毒感染、饮酒、长期接触致癌物等。然而，并非接触危险因素的个体全部患肝癌，存在个体差异，肝癌易感性研究有助于阐明个体差异的分子基础。

Gao 等〔5〕运用 meta 分析未发现 IL－8－251A/T 多态性明显增加或降低肿瘤发病风险。Chien等〔4〕调查了131例中国台湾地区肝癌患者和340例正常对照组IL－8－251A/T多态性，未发现该多态性与肝癌发病相关。本研究亦未发现IL－8－251A/T多态性与中国东北地区肝癌发病呈明显相关，IL－8－251TT基因型降低了中国东北地区HBsAg阳性患者肝癌发病风险。以往研究显示乙肝病毒感染患者血清中IL－8水平明显高于正常对照人群，乙肝病毒相关的肝癌细胞株中亦检测到高水平IL－8〔7〕。提示IL－8－251TT基因型可能通过血清中IL－8表达量的不同参与肝癌发生发展。

综上，IL－8－251A/T多态性可作为乙肝病毒感染患者肝癌发病率的一个分子遗传学标记物。多中心、大样本量的深入研究将有助于为肝癌风险预测和个体化用药提供一条新途径。

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