酒石酸长春瑞滨脂质体注射液的安全性及抗肿瘤作用研究

王莉芳，王彩霞，魏 娜，吕晶晶，毕宇鑫，艾天琦，李春雷

(1.河北省制剂工程技术研究中心，2.石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司，河北石家庄 050035)

长春瑞滨通过抑制微管聚合，使细胞分裂停止于有丝分裂中期，从而发挥抗癌作用［1］。临床上长春瑞滨是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的一线治疗药物，也用于转移性乳腺癌、难治性淋巴瘤、卵巢癌及头颈部肿瘤的治疗，主要剂量限制性不良反应为较强的神经毒性、骨髓抑制、白细胞下降、胃肠道反应及外周神经毒性［2-3］，这使得患者难以长期坚持用药，从而限制了药物疗效的发挥。

将长春瑞滨制成脂质体，可以使药物靶向于病变器官及部位，从而最大程度地避免药物引起的毒副作用［4］。本文对酒石酸长春瑞滨脂质体(NVB-lipo)与酒石酸长春瑞滨游离药(NVB-free)的毒性和抗肿瘤活性进行了比较研究，为NVB-lipo的临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 药物及细胞 NVB-lipo由石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司研制，批号091101;NVB-free(海南通用同盟药业有限公司)，批号20090901;环磷酰胺(缩写CTX，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号10011921);小鼠 S180、RM-1细胞均由中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心提供。

1.2 方法

1.2.1 小鼠最大耐受剂量毒性比较 设定最小给药剂量为20 mg·kg-1，以4/3比率递增给药剂量，共设6个剂量组，每组2只KM♀小鼠(河北省实验动物中心提供，SPF级，生产许可证号为 SCXK［冀］2008-1-003)。NVB-lipo和 NVB-free静脉给药后观察动物一般状况及体重变化。在20 d观察期内没有动物死亡、不可恢复的毒性反应，或者体重较实验前减轻小于15%的最大给药剂量为小鼠最大耐受剂量。

1.2.2 对S180实体瘤的抑制作用 抽取S180腹水型荷瘤小鼠腹水，生理盐水稀释，接种于KM小鼠前肢腋部皮下组织，接种细胞数1×106个/只。动物随机分成8组，NVB-lipo 2.5、5、10 和 20 mg·kg-1剂量组，NVB-free 10 和 20 mg·kg-1剂量组，CTX对照组和空白对照组(5% 葡萄糖注射液)。接种24 h后，CTX组腹腔给药30 mg·kg-1(隔天1次)，其余各组分别单次静脉给药。接种10 d后脱颈椎处死小鼠，剖取瘤块并称重。计算肿瘤抑制率:肿瘤抑制率/%=(1-给药组平均瘤重/空白对照组平均瘤重)×100%。

1.2.3 对小鼠前列腺癌RM-1实体瘤的抑制作用 选取生长良好、体内传代3次以上的RM-1肿瘤组织，剪碎，置于玻璃匀浆器中加入无菌生理盐水研磨，将瘤细胞悬液接种于7～8周C57♂小鼠(中国解放军军事医学科学院实验动物中心提供，7～8周，SPF级，生产许可证号为SCXK［军］2007-004)前肢腋下皮下组织。接种12 d后，挑选肿瘤体积为100～300 mm3的小鼠，按肿瘤体积分层将动物随机分为 NVB-lipo 2、5、10 和20 mg·kg-1剂量组，NVB-free 20 和 10 mg·kg-1剂量组及空白5% 葡萄糖注射液给药组，每组10只，单次静脉给药，给药容积为20 ml·kg-1。监测瘤径及体重，动态观察受试药的抗肿瘤作用。肿瘤体积(tumor volume，TV)计算公式为:V=1/2×a×b2(a和b分别表示肿瘤长和宽)。相对肿瘤体积抑制率/%=(1-TRTV/CRTV)×100%［TRTV:治疗组RTV;CRTV:空白对照组RTV，RTV(相对肿瘤体积)=Vt/V0V0为分笼给药时测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积］。

1.2.4 统计学方法 实验结果采用SPSS 11.5统计软件分析。

2 结果

2.1 小鼠最大耐受剂量毒性比较 NVB-lipo和NVB-free对小鼠的最大耐受剂量分别为35.6和26.7 mg·kg-1，表明制成脂质体后长春瑞滨毒性明显降低。

2.2 对S180实体瘤的抑制作用 NVB-lipo单次以2.5、5、10和20 mg·kg-1静脉注射，可剂量相关性的明显抑制小鼠S180实体瘤的生长，抑瘤率为 27.7% ～73.0%。NVB-free 10和20 mg·kg-1剂量组与空白组相比对 S180肿瘤无治疗作用(P＞0.05)，NVB-lipo 10和20 mg·kg-1与等剂量的NVB-free相比可以明显抑制S180实体瘤的生长(P＜0.01)。2.3 对小鼠前列腺癌RM-1实体瘤的抑制作用 与空白组相比，NVB-lipo各剂量组和NVB-free 20 mg·kg-1剂量组可明显抑制RM-1肿瘤生长;NVB-lipo 20 mg·kg-1与等剂量的NVB-free相比疗效更强。NVB-lipo 5、10和20 mg·kg-1剂量组在给药后第12天对小鼠前列腺癌RM-1实体瘤的相对肿瘤体积抑制率分别为45.9%、49.7%和74.4%，而NVB-free 20 mg·kg-1剂量组的相对肿瘤体积抑制率为38.3%。说明酒石酸长春瑞滨制成脂质体后可以明显改善长春瑞滨对小鼠前列腺癌RM-1实体瘤的治疗效果，且抑瘤维持时间明显优于长春瑞滨。

Tab 1Effect of NVB-lipo on tumor volume(Relative tumor inhibition rate)of RM-1(±s，n=10)

Tab 1Effect of NVB-lipo on tumor volume(Relative tumor inhibition rate)of RM-1(±s，n=10)

*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs control;△P＜0.05，△△P＜0.01 vs NVB-free of the same dose.Data in()indicate inhibite rate(%)

-1-1 Control 0 372.0±126.0 378.0±119.4 373.6±95.4 372.6±Time/d NVB-lipo/mg·kg NVB-free/mg·kg 20 10 5 220 10 90.1 374.5±108.2 372.6±90.1 371.3±91.1 2 632.2±503.2(25.9)851.2±481.8 4 906.3±410.3*(33.5)624.4±306.0(28.0)714.4±229.8(16.6)682.2±401.9(20.1)499.0±394.5*(41.9)728.0±300.2(14.8)1360.0±622.9 6 896.6±387.7＊＊(59.0)938.9±496.6*(32.2)1017.5±284.7(25.6)902.7±443.9*(33.9)839.9±308.9*(38.8)1056.2±444.4(22.6)2182.8±949.9 8 1234.6±584.0＊＊(65.0)1311.1±700.7＊＊(41.0)1332.0±528.6＊＊(39.4)1482.5±602.3*(32.3)1323.2±614.9＊＊(39.9)1506.7±662.0*(31.2)3522.0±1674.1 10 1644.8±969.5＊＊△(72.0)1629.7±762.4＊＊△(54.6)1605.5±601.7＊＊(54.7)2602.1±1222.3(26.4)1933.9±1035.4＊＊(45.6)2641.6±1123.8(25.3)5867.2±2260.0 12 2411.2±1337.0＊＊△△(74.4)3026.5±1416.7＊＊△(49.3)3131.0±1249.5＊＊(47.0)4631.9±2298.0(21.3)3419.3±1736.8＊＊(42.2)4786.0±1804.0(18.7)4812.0±2293.2＊＊(49.7)5115.0±1995.7＊＊(45.9)7235.3±3635.3(23.3)5844.6±2582.5＊＊(38.3)7070.9±2636.8(25.0)9394.9±3273.5

3 讨论

脂质体作为抗肿瘤药物的载体，可以减少药物在正常组织的分布，增加药物在肿瘤组织的蓄积，从而降低药物毒性、改善药物的治疗指数，但并不是所有的脂质体处方均可以改善疗效，降低毒性。治疗效果的改善依赖于动物模型、靶向效率和释药速率的交互作用［5］，因此开发脂质体药物必须对脂质体处方进行认真评估。本研究证明长春瑞滨脂质体和游离药对小鼠的最大耐受剂量分别为35.6和26.7 mg·kg-1，和游离药相比，长春瑞滨脂质体可明显抑制小鼠S180和前列腺癌RM-1实体肿瘤的生长。因此，酒石酸长春瑞滨脂质体在提高疗效的同时也降低了毒性，是一个具有开发潜力的药物。

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