麦贞花颗粒有效成分的含量测定

田立元 常星洁 严 冬 刘志辉

1.江苏省中医院药学部，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学药学院，江苏 南京 210046；3.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210046

麦贞花颗粒由麦冬、灵芝、女贞子、红花、槐米五味药组成，具有补益心肾、化瘀通络之功效，用于冠心病、心绞痛的治疗，疗效显著。麦冬作为方中君药，其皂苷类成分具有较好的抗心肌缺血和心肌梗死作用；女贞子为臣药，其环烯醚萜类成分具有降血脂、降血糖、降低血液黏度等多种药理活性[1-3]，故选择麦冬皂苷D和女贞子环烯醚萜类成分之一特女贞苷作为含量测定指标成分，与本制剂治疗冠心病、心绞痛目的一致。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪：G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A VWD检测器；Waters2695高效液相色谱仪；Alltech 2000ES ELSD检测器；电子分析天平（BP-211D型，德国赛多利斯公司）等。

麦冬皂苷D、特女贞苷对照品（购自南京泽郎医药科技有限公司，含量测定用，批号分别为ZL20110312MDZG和ZL20100928TNZG）。测定用甲醇和乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 麦冬皂苷D含量测定[4-8]

2.1.1 色谱条件与系统适应性试验 Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：以水为流动相A，乙腈为流动相B，按下列洗脱程序进行梯度洗脱：0～28 min，28%B；28～38 min，50%B；38～42 min，28%B。 柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；蒸发温度：103℃；气体流速：2.7 L/min。HPLC图谱见图1。

图1 麦冬皂苷D对照品、供试品、阴性样品溶液色谱

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取麦冬皂苷D对照品适量，加甲醇制成每1毫升含400 μg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 麦冬水提液适当浓缩，等体积水饱和正丁醇萃取4次后，萃取液用氨水洗涤2次，正丁醇液减压回收至干，残渣加甲醇溶解并定容至5 mL，微孔滤膜滤过，即得。

2.1.4 阴性溶液的制备 按照供试品溶液的制备方法，取缺少麦冬的阴性对照样品，制备成阴性对照溶液。

2.1.5 线性关系考察 分别吸取麦冬皂苷对照品溶液（411.2μg/mL）3、5、10、15、20、25、30 μL，依次进样，测定，以进样量对数值为横坐标（X），峰面积对数值为纵坐标（Y），将测得的实验数据进行回归分析，得方程Y=1.6964X+5.4144，r=0.9996，结果表明麦冬皂苷D在进样量1.234～12.336 μg与峰面积的线性关系良好。

2.1.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪中，重复进样6次，结果以麦冬皂苷D峰面积计RSD为1.26%。

2.1.7 重复性试验 取麦贞花颗粒约15 g，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液，测定，计算，结果平均含量为：麦冬皂苷D 0.0138 mg/g，RSD以麦冬皂苷峰面积计为2.59%。

2.1.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于 0、2、4、8、12 h 进样，测定，麦冬皂苷 D 以峰面积计 RSD为1.17%，说明供试品溶液在12 h内稳定。

2.1.9 加样回收率试验 取麦贞花颗粒（麦冬皂苷含量为0.0138mg/g）约15 g，共6份，精密称定，加入麦冬皂苷D对照品适量，依法制备供试品溶液。按含量测定方法进行测定，计算。见表1。

表1 麦冬皂苷D加样回收率结果

2.1.10 样品含量测定 取麦贞花颗粒的三批中试产品，依法制备供试品溶液，测定，计算。结果三批中试产品麦冬皂苷D含量分别为 0.0138、0.0149、0.0130 mg/g。

2.2 特女贞苷含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（40∶60）；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：224 nm；进样量：5 μL。 HPLC 图谱见图2。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取特女贞苷对照品适量，加甲醇制成每1毫升含400 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取麦贞花颗粒约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，称定重量，超声30 min，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

图2 特女贞苷对照品、供试品、阴性样品溶液色谱

2.2.4 阴性溶液的制备 按照供试品溶液的制备方法，取缺少女贞子的阴性对照样品，制备成阴性对照溶液。

2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取特女贞苷对照品溶液（406.4 μg/mL）一定量，加甲醇稀释成浓度为 40.64、81.28、121.92、203.20、243.84、325.12 μg/mL 的一系列对照品溶液， 按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标（Y）样品浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，回归方程为：Y=6.2924X+3.5859（r=0.9995），结果表明特女贞苷在 40.64～325.12 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液5 μL，注入高效液相色谱仪中，重复进样6次，以特女贞苷峰面积计RSD为1.12%。

2.2.7 重复性试验 取麦贞花颗粒约3 g，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液，测定，计算，特女贞苷平均含量为3.72 mg/g，以特女贞苷峰面积计RSD为3.87%。

2.2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于 0、2、4、8、12 h 进样，测定，以特女贞苷峰面积计 RSD 为2.21%，说明本品在12 h内稳定。

2.2.9 加样回收率试验 取麦贞花颗粒（特女贞苷含量为3.73mg/g）约1 g，共6份，精密称定，加入特女贞苷对照品适量，依法制备供试品溶液，按样品测定方法进行测定，计算。见表2。

2.2.10 样品含量测定 取麦贞花颗粒的三批中试产品，依法制备供试品溶液，测定，计算。结果三批中试产品特女贞苷含量分别为 3.69、3.73、3.85 mg/g。

3 讨论

3.1 特女贞苷供试品的制备

比较了不同提取方法（加热回流和超声提取）以及不同提取溶剂（30%、50%、70%浓度乙醇）对特女贞苷含量测定的影响，结果表明50%乙醇超声提取特女贞苷含量最高。继而考察不同提取时间（30、60、90 min）对其含量影响，结果 30 min后特女贞苷含量没有增高，故供试品溶液制备方法为：50 mL稀乙醇超声提取30 min，滤过，即可。

表2 特女贞苷加样回收率结果

3.2 指标成分的选择

麦冬皂苷类成分具有抗心肌缺血和心肌梗死作用，文献报道[4]川麦冬药材中麦冬皂苷D含量较高，采用HPLC-ELSD法对其进行含量测定，方法成熟、稳定，且处方中麦冬作为君药，故选择麦冬皂苷D作为含量测定指标之一。近年来关于女贞子环烯醚萜类成分的研究日益增多，它具有保肝利胆、降血脂、降血糖、降低血液黏度、增强机体免疫调节等多种药理活性，鉴于制剂中麦冬皂苷D含量较低，故将麦冬皂苷D和特女贞苷共同作为制剂含量测定指标，专属性强，重现性好。

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