高危型HPV检测联合肉眼醋酸试验在宫颈癌前病变筛查中的应用

赵金娟

合肥市第一人民医院妇产科，安徽 合肥 230061

宫颈癌是女性恶性肿瘤中发病率位居第二的肿瘤。宫颈癌新发病例数全世界每年达到47万例，其中，发展中国家占80%。宫颈癌有可逆且较长的癌前病变期，因此，宫颈癌的早期发现就显得尤其重要[1]。另外，目前控制宫颈癌的主要手段是筛查[2]。本文进行了高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）检测联合肉眼醋酸试验在宫颈癌前病变筛查中应用的研究，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年8月～2010年2月于我院就诊的532例可疑宫颈癌前病变患者为研究对象，年龄21～62岁，平均31.2岁。

1.2 方法

1.2.1 肉眼醋酸试验 于试验前向所有可疑宫颈癌前病变患者讲解检查过程，签署《知情同意书》。患者取膀胱截石位于检查床上，先观察有无分泌物，外生殖器和会阴部有无疣、溃疡、丘疹、水泡、水肿、表皮剥脱等，有无腹股沟淋巴结肿大。暴露宫颈，观察宫颈形态及大小，拭净宫颈表面的分泌物，辨别鳞柱状交界区，观察是否有宫颈炎、湿疣、白斑、陈旧性裂伤、纳氏囊、息肉、宫颈外翻等；将沾有5%醋酸溶液的棉球涂于宫颈表面，1 min后观察宫颈着色情况。

1.2.2 实时荧光定量PCR技术 取冻存已裂解的细胞，沉淀RNA，清洗RNA后将RNA干燥，合成样品cDNA，将包含逆转录buffer、上游引物、下游引物、dNTP、逆转录酶、DEPC水、RNA模板共10 μl的反应体系混合，得到逆转录终溶液后，将梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因行实时荧光定量PCR检测，制备出用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板，最后将待测样品的待测基因行实时荧光定量PCR检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据处理与分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肉眼醋酸试验情况

532例可疑宫颈癌前病变患者均进行肉眼醋酸试验，发现异常着色的患者320例，占60.15%，年龄28～59岁，平均35.4岁。

2.2 实时荧光定量PCR技术检测高危型HPV感染情况

320例肉眼醋酸试验异常着色的患者中，高危型HPV阳性190例，阳性率为59.38%。212例肉眼醋酸试验正常着色的患者中，高危型HPV阳性18例，阳性率为8.49%。肉眼醋酸试验异常着色患者高危型HPV感染阳性率（59.38%）明显高于肉眼醋酸试验正常着色患者（8.49%），差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 1。

表1 不同检测方法高危型HPV感染情况比较

3 讨论

宫颈癌在发展中国家是严重威胁妇女健康和生命的疾病之一[3]，也是唯一通过人为干预即可降低病死率和发病率的恶性肿瘤[4]。宫颈癌前病变是指癌症发生部位于癌症发生前产生的病变。其中，与宫颈浸润癌密切相关的癌前病变主要是指宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN），其进展变化过程中的细胞学改变则被作为筛选方法的依据[5]。宫颈癌前病变主要通过筛查达到及时、有效诊断的目的。HPV持续感染是宫颈癌前病变和宫颈癌发病、致病的主要原因[6]。

以往传统的宫颈细胞学检查为宫颈巴氏涂片法，虽然宫颈巴氏涂片法在以前大大降低了宫颈癌的死亡率和发病率，但是巴氏涂片法漏诊率高，假阴性率高。李洁等[7]报道，宫颈巴氏涂片法的敏感度为20%～35%，已逐渐被其他的检查方法如肉眼醋酸试验和HPV-DNA法代替。肉眼醋酸试验的试验原理为蛋白凝固。HPV感染上皮的不正常细胞和细胞过多产生的蛋白质与醋酸结合后凝固，出现发亮、雪白的损害，其边缘为羽毛状、角状或锯齿状。Ottaviano等[8]最早将肉眼醋酸试验应用于临床，他认为宫颈不典型增生细胞、宫颈不典型鳞化状细胞等由于含有较丰富的染色质，细胞核浆比例大，加入醋酸后表层细胞和细胞浆发生凝结，降低细胞的透明度，出现肉眼可见的白色，而正常的柱状上皮虽然在醋酸的作用下出现细胞肿胀，血管收缩，一过性降低细胞透明度，也可出现一过性白色改变，但是时间较短，故涂抹醋酸1 min后观察到白色改变则为宫颈不典型增生细胞和宫颈不典型鳞化状细胞。肉眼醋酸试验具有依从性好，失访率低，方法简单，易于掌握，具有只需集中、系统、短期的培训即可操作等优势[9-11]。全球宫颈癌联盟（ACCP）认为，在发展中国家，可将肉眼醋酸试验作为宫颈癌前病变的初筛方法[12-13]。本研究肉眼醋酸试验的灵敏度为60.15%，稍低于Sankaranarayanan[11]研究中选取56939例患者筛查的灵敏度76.8%。

实时荧光定量PCR技术是一种近年来发展较快的多色荧光检测核酸定量技术[14-15]。实时荧光定量PCR技术定量检测PCR扩增引物，且在封闭状态下检测，克服了扩增引物污染导致的假阴性、假阳性等缺陷，特异性增强，提高了检测质量，是临床应用分子生物学实验技术的一种可靠的方法[16]。本研究结果显示，肉眼醋酸试验异常着色患者HPV感染阳性率为59.38%，类似于刘红卫等[17]报道的高危型HPV阳性率为63.39%。

本研究分别检测了肉眼醋酸试验异常着色患者的高危型HPV感染阳性率和肉眼醋酸试验正常着色患者的高危型HPV感染阳性率，意在用较为精确的实时荧光定量PCR技术检测证明正常着色和异常着色患者中高危型HPV阳性率的差异，从而进一步说明肉眼醋酸可作为较为可靠的初筛方法筛选出宫颈癌前病变患者。

综上所述，肉眼醋酸试验联合高危型HPV-DNA检测可及时有效地发现宫颈癌前病变，可作为宫颈癌前病变筛查方案应用于临床。

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