探讨脑梗死的患者C反应蛋白-717A/G多态性与C反应蛋白及相关危险因素的关系

冯 涛 徐秀芝 杨 勇 祝鸿雁 范玉伟 王连堃

黑龙江省医院南岗分院神经二科，黑龙江哈尔滨 150000

C反应蛋白(CRP)被发现是一项较敏感的反应机体炎症状态的指标，近年来有学者证明CRP有对未来发生脑梗死的预言能力[1，2]，但在遗传标记方面目前还没有信息支持这一结果。本研究应PCR-RFLP方法检测125例脑梗死患者和130例健康对照者CRP-717A/G基因多态性，探讨中国东北地区脑梗死患者CRP-717A/G基因多态性与CRP及脑梗死其他危险因素的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

我们选取发病3 d内的脑梗死患者125例，诊断符合2008年欧洲卒中指南制定的缺血性脑血管病诊断标准，经脑CT或MRI检查证实，其中男76例，女49例，平均年龄（67.60±9.42）岁。对照组为健康体检者130例，三个月内没有感染，男73例，女57例，平均年龄（67.5±8.26）岁。

1.2 方法

1.2.1 一般资料 年龄、性别、血压，于清晨空腹静脉血检测血常规、血脂、血糖、凝血常规及C反应蛋白，测颈动脉内膜中层厚度，脑梗死病灶大小，神经功能评分。

1.2.2 DNA提取 采外周静脉血2～3 mL，ACD抗凝，用血液基因组DNA纯化试剂盒提取DNA。

1.2.3 PCR 扩增 taq酶，dNTP，引物序列（均由上海捷瑞公司合成），上游引物：5′-GACTCCTGCCTGAAGCTTTACATA-3′，下游引物：5′-ATACATGTGCCATGCTGGTGTG-3′，扩增片段大小为376bp。PCR 扩增体系（共12.5μL）：模板DNA 50～100 ng，4×dNTP各2.5 mmol，PCR引物各5μmol，rTaq 0.5 U。PCR 扩增条件：95℃预变性4 min，95℃变性30 s，58℃退火40 s，72℃延伸30 s，共30个循环，最后72℃延伸7 min。

1.2.4 酶切 按内切酶Bsh1236 I说明书要求酶切PCR产物并采用电泳分型。

1.3 统计学方法

两组间基因型、等位基因频率比较应用χ2检验方法，P＜0.05为差异有显著意义。应用SAS9.13统计软件，对计量资料的各基因型间的比较则应用单因素方差分析。

2 结果

①通过逻辑回归分析，对脑梗死作用由大到小分别是：C反应蛋白(OR=8.4820），胆固醇(OR=4.5349)，血糖（OR=3.5510），纤维蛋白原(OR=1.8955)，年龄(OR=1.3260），收缩压(OR=1.1350）。②C反应蛋白启动子区-717A/G位点与脑梗死关系。脑梗死组及对照组的CRP-717A> G 基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡，两组间等位基因频率及各基因型频率分布无显著差异（P=0.21），结果见表1。

表1 脑梗死组与对照组-717A/G基因型频率、等位基因频率比较

3 讨论

由于我们研究的样本量比较少，可能会存在统计学上的偏差，但肯定CRP是一项与脑血管病有直接关系的敏感指标，我们将扩大样本量继续深入研究探讨脑梗死患者C反应蛋白多态性与C反应蛋白及相关危险因素的关系。

[1]Biasucci LM，Liuzzo G，Grillo RL，et al. Maseri A (1999)Elevated levels of C-reactive protein at discharge in atientswith unstable angina predict recurrent instability[J].Circulation，1999:855-860.

[2]Ferreiros ER，Boissonnet CP，Pizarro R，et al. Bazzino OO (1999)Independent prognostic value of elevated C-reactive protein in unstable angina[J].Circulation1999，100:1958-1963.

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