肺腺癌中S100A2蛋白的表达

李军峰，孙明飞，张双林＊，宋言峥，张冠男

（河南大学第一附属医院 胸心血管外科，河南 开封 475000；2.复旦大学 附属公共卫生临床中心，上海 200540）

支气管肺癌是发病率、病死率最高的恶性肿瘤之一，即便能够较早诊断，Ⅰ期肺癌患者术后5a生存率也只有70%［1］。临床上诊断为早期肺癌的患者，手术后大多数仍死于肿瘤的复发和转移。这可能与肺癌早期阶段在某些蛋白的调节下，癌细胞已循血液、淋巴结播散到原发灶以外的远处部位有关。在一些直径＜2cm的肺癌患者中，术后5a生存率并没有明显提高［2］。S100蛋白主要存在于脊椎动物中，具备细胞内和细胞外调节活性，参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程［3］。研究表明［4］，S100A2在肺腺癌中呈上调表达，因其在肺腺癌中表达具有差异性，S100A2在肺癌中的作用日益受到关注。我们以正常肺组织为对照，检测高分化肺腺癌组织及低分化肺腺癌组织中S100A2的表达水平，探讨其与肺腺癌分化程度的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

研究对象是正常肺组织及肺腺癌组织的新鲜手术标本，来自河南大学第一附属医院胸外科2010年6月至2011年8月接受手术治疗的部分肺良性病变16例及肺腺癌患者45例。16例正常肺组织作为对照，45例肺腺癌组织中男性41例，女性4例，年龄39～82岁，平均59.86岁；高分化肺腺癌26例、低分化肺腺癌19例。所有肺腺癌标本均以体积分数为10%甲醛固定，石蜡包埋，经HE染色病理确诊。

1.2 主要试剂

S100A2兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德（BOSTER）公司。

生物素化羊抗兔抗体（二抗），以及过氧化物酶－链亲和素复合物购自北京中山公司。

1.3 免疫组化实验过程及操作方法

1抗以1∶200稀释，采用预实验反复多次证实均呈阳性的正常肺组织切片为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。具体实验步骤参照试剂盒说明。

1.4 结果评定

细胞核或核与胞质内出现棕黄色颗粒或弥漫的棕黄色为阳性细胞。每张切片在光学显微镜下选取5个高倍视野，每个视野按下述标准进行评判：

A＝阳性细胞百分比：无，O分；＜10%，1分；10%～50%，2分；＞50%，3分。

B＝阳性细胞染色程度：无显色，0分；浅黄色，1分；黄色或浅棕色，2分；棕褐色，3分。每个视野积分＝A×B，求每张切片5个高倍视野积分平均值，按照积分高低分为：＜3分，阴性（－），3～9分，阳性（＋）

1.5 统计学处理

所得数据为计量资料，采用SPSS 10.0统计软件包统计分析，采用卡方检验以及Spearman等级相关分析，P＜0.05，认为有差异。

2 结果

S100A2在肺腺癌组织与正常组织中有显著性表达差异，其中在16例正常肺组织中不表达，而在45例肺腺癌组织中阳性表达率为62.2%，此差异有统计学意义（P＜0.05）。S100A2在不同分化程度的肺腺癌组织中均有不同程度的表达，其中在26例高分化肺腺癌组织和低分化肺腺癌组织中阳性表达率分别为46.2%、84.2%，此差异有统计学意义（P＜0.05）。S100A2阳性表达与患者的年龄及性别无著性表达差异，见表1。

表1 S100A2的表达与分析

3 讨论

近三十年来，我国肺癌的发病率和死亡率呈现持续上升的趋势，预计到2025年，我国年肺癌发病人数将超过100万，成为世界第一肺癌大国［5］。近几年，国内外已经鉴定出许多与NSCLC形成和转移潜能有关的蛋白，S100蛋白是一个多基因的钙结合蛋白家族，包括20种由不同基因编码的蛋白质组成，其中有16种基因定位于染色体的1q21位点上［4］。该蛋白参与多种细胞功能，包括细胞增殖、分化、代谢、运动及信号传导［6］。已发现某些S100基因在NSCLC中表达水平增高。有报道［7］在食管癌组织中，S100A2蛋白阳性表达率明显低于正常食管黏膜组，同时S100A2蛋白表达减少和食管癌分化程度相关。由于它在某些肿瘤细胞中表达水平降低或缺失，故被认为是抑癌基因。S100A2的组织学特征表达可能成为NSCLC诊断和分期的指标。肿瘤分期明显影响S100A2的表达程度，肿瘤进展过程中启动区的超甲基化是一个重要特征，而S100A2的表达高度依赖于甲基化状态。国内李明娜等［8］研究显示：S100A2在NSCLC中表达增高，而且，随着肿瘤分期的升高而增高，尤其是发生在淋巴结转移的病例，肿瘤组织中S100A2表达高于无淋巴结转移的病例，提示S100A2的表达与肿瘤的发展相关。然而在有和无静脉癌栓的TNM2期癌组织中的表达水平却没有显著性差异。实验中得出的结论与其一致。鳞癌与腺癌组织S100A2表达并未发现明显差异，可能与病例数有限、病例的选择性偏倚等多种因素有关。因此，S100A2在不同类型的NSCLC生成方面的作用仍有待研究。此外，对于接受新辅助化疗的NSCLC患者不适合用S100A2检测进行组织病理学分级，Bartling et al［9］曾报道辅助化疗后的NSCLC患者样本中，S100A2处于一种低表达状态，这反映了化疗过程中，肿瘤基因的多重修饰作用，在化疗过程中，S100A2基因比未经化疗的样本更易受到损伤。实验中选择的样本均不包括经过放、化疗的患者，有效地避免了辅助治疗对于检测的干扰。患者的存活率有赖于肿瘤的早期诊断，S100A2在早期肺癌中的表达上调显示，两者在早期肺癌诊断中可能成为重要的靶基因，并有利于判断预后。

［1］Naruke T，Tsuchiya R，Kondo H，et al.Implications of staging in lung cancer［J］.Chest，1997，11（2）：242－248.

［2］MoriyaY，NikiT，Yamada T，et al.Increased express ion of lam in in－5and its prognostic significance in lung adenocarcinom as of small size.An immunohistochemical analysis of 102cases［J］.Cancer，2001，9（1）：1129－1141.

［3］Donato R.S2100：a multigenic family of calciummodulated p ro2teins of the EF2hand type with intracellular functional roles［J］.Int J Biochem Cell Biol，2001，33（7）：637－668.

［4］Marenholz I，Heizmann C W，Fritz G.S100proteins inmouse and man：from evolution to function and pathology（including an update of the nom enclature）［J］.Bioch em Biophys R es Commun，2004，32（2）：1111－1122.

［5］李龙芸.继续深入开展肺癌的基础与临床研究［J］.中华内科杂志，2000，39（11）：725－727.

［6］Wang H，Zhang Z，LiR，et al.Overexpression of S100A2protein as a prognost－ic marker for patients［J］.Int J Cancer，2005，116（2）：285－290.

［7］尹 玉，张洪福，李 昊，等.S100A2蛋白在人食管鳞状细胞癌中的表达［J］.安徽医科大学学报，2007，41（1）：21－23.

［8］李明娜，范钦和.非小细胞肺癌中S100A2、S100A4及S100P表达及意义［J］.临床与实验病理学杂志，2009，25（5）：503－507.

［9］Bartling B，Rehbein G，S chmitt W D，et al.S100A2－S100Pexpression p rofile and diagnosis of non－sm all cell lung carcinoma：Impairment by advanced tumour stages and neoadjuvant chemotherapy ［J］.E ur J C ancer，2007，43（13）：1935－1943.