HPLC法测定氨茶碱氯化钠注射液中无水茶碱的含量

康建党，刘 浩，卢鹏伟，李建勋

（1.河南省健康伟业医药科技有限公司，河南 郑州 450000；2.河南省医药技师学院，河南 开封 475003）

氨茶碱氯化钠注射液主要治疗支气管哮喘、喘息型支气管炎、阻塞性肺气肿等，用于缓解喘息症状，也可用于急性心功能不全和心源性哮喘，并且具有支气管扩张作用和利尿作用［1-2］。该品为化学药品，已在新药转正标准33册收载。原标准中采用分光光度法测定其中无水茶碱的含量。参考相关的文献［3-5］，我们采用了HPLC法对该品种进行了无水茶碱的含量测定，结果方法可靠、重现性好、简单易行。

1 仪器与试药

美国 Waters 515型高效液相色谱仪、Waters－486检测器；上海天美UV－2300型紫外分光光度计；92SM－202A型电子天平（Precisa公司）。

茶碱对照品（中国药品生物制品检定研究院批号：100121－201104），供含量测定用；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂为分析纯；氨茶碱氯化钠注射液（四川奇力制药有限公司，批号：20100901、20100902、20100903）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：美国 Waters C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈－体积分数为0.1%磷酸水溶液（20∶80）；流速为1.0mL／min；检测波长275nm；进样量20μL；柱温30℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的茶碱对照品适量，置棕色量瓶中，加流动相制成每1mL含100μg的溶液，摇匀，即得茶碱对照品储备液。吸取25mL置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品1mL，置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液。

2.2.3 空白溶液的制备 按处方比例配成不含氨茶碱的阴性对照样品；按照供试品溶液的制备方法，制成不含茶碱的空白溶液。

2.3 空白干扰实验

按照“2.1”项下的色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液各20μL，分别注入液相色谱仪进行测定。结果，在供试品色谱图与对照品色谱图相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而空白溶液在此保留时间无干扰。见图1。

图1 氨茶碱氯化钠注射液HPLC色谱图

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品储备液0.5、1、2、3、4mL分别置10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，各进样20μL，按“2.1”项下的色谱条件测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标，进行回归分析，得回归方程为Y ＝9.87×102 X －3.27（r＝0.9999），茶 碱 检 测 浓 度 的 线 性 范 围 为 5.1～40.9mg／L。

2.5 精密度实验

取同一份对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，其RSD＝0.26%。

2.6 稳定性实验

在试验条件下，取同一份供试品溶液分别在室温放置 0、2、4、6、8h 后各进样 1 次，其 RSD ＝0.58%，表明供试品溶液在8h内稳定。

2.7 重复性实验

取同一批号氯茶碱氯化钠注射液（20100901）6份，按供试品溶液制备方法制备，测定，结果无水茶碱的平均含量为77.9%，RSD ＝0.63%。

2.8 回收率实验

取质量分数为0.9%氯化钠溶液，加无水茶碱对照品适量，分别制成每100mL含0.20、0.25、0.30g样品各2份，按“2.1”项下的色谱条件测定，见表1。平均回收率为99.06%（n＝6），RSD 为0.28%。

表1 回收率实验结果

2.9 样品含量测定

取3批样品，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，依“2.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积，并计算含量。3批样品中无水茶碱的含量分别为79.1%、78.2%、78.9%。

3 讨论

在实验中，经过紫外扫描，发现茶碱在275nm波长处有最大吸收，因此，我们选择了275nm为检测波长。我们的研究曾采用流动相为乙腈－水、甲醇－醋酸钠溶液、甲醇－水进行测定，结果均发现主峰峰形较差，理论板数不高。但将流动相改变为乙腈－体积分数为0.1%磷酸水溶液后，分别以二者比例为20∶80、30∶70、35∶65、40∶60进行了试验。结果表明，乙腈－体积分数为0.1%磷酸水溶液的比例为20∶80时，主峰出峰时间为7.2min，理论板数最高，拖尾因子最小。并且精密度实验、重复性实验、稳定性实验、回收率实验均符合中国药典2010年版二部有关规定，故最终选用乙腈－体积分数为0.1%磷酸水溶液（20∶80）为流动相进行氨茶碱氯化钠注射液中无水茶碱含量的测定。

［1］杨淑霞.氨茶碱联用硫酸镁治疗喘憋性肺炎60例［J］.陕西医学杂志，2011，40（6）：754－755.

［2］贾红慧，李代英，蔡晓.氨茶碱氯化钠注射液的支气管扩张作用和利尿作用［J］.职业卫生与病伤，2002，17（4）：273－274.

［3］吴素玲，黄晗.高效液相色谱法测定血浆茶碱浓度及其应用［J］.医学信息，2010，24（8）：277－278.

［4］汪秀月.HPLC法测定氨茶碱片中无水茶碱的含量［J］.海峡药学，2010，22（9）：39－41.

［5］李立，丁刚.HPLC法测定茶碱葡萄糖注射液中茶碱的含量［J］.安徽医科大学学报，2000，35（1）：82－83