核桃叶抗氧化成分的动态分析

何丽波，高海合，尹正仙，李 花，何丽仙

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

核桃叶含有很多种营养物质，如除含有维生素B、C、D、E及胡萝卜素外，还含有丰富的核桃醌、黄酮等生物活性物质〔1-2〕，核桃叶提取物对油脂的氧化有一定的抑制作用〔3〕。现在已有许多关于提取方法的报道，大孔树脂分离提取法〔4〕、微波法〔5〕都是以水、乙醇、丙酮等为提取溶剂。提取工艺比较成熟，但其动态分析尚没人做过，本课题组拟对其进行动态分析，以更好的为其利用提供依据。

1 工作原理

食用植物油中的过氧化物在氯仿一冰乙酸介质中，与KI反应生成碘，生成的碘用纯水稀释后，与淀粉反应显蓝色。在λ=580 mn处，用分光光度计测定，由测得的吸光度，查工作曲线，算出碘含量，以测得样品的过氧化值。

2 仪器与材料

2.1仪器722型可见光分光光度计（上海菁华科技有限公司）；电子天平（北京赛多科斯仪器系统有限公司）。

2.2材料核桃叶粉末：采自大理漾濞县境内，6、7、8、9月各月份阴干后核桃叶粉碎品；氯仿-冰乙酸混合剂（2∶3）；饱和碘化钾溶液（14 g碘化钾溶于10 mL水中）；10 g/L淀粉溶液，碘标准溶液（3.936×10-3mol/L）；硫代硫酸钠溶液0.103 3 mol/L，临用时稀释10倍。

3 试验方法

3.1丙酮提取核桃叶中抗氧化物质称取6月份采摘的阴干后核桃叶粉碎样品15 g，70%丙酮为溶剂，按固液比1∶20的比例加入到500 mL圆底烧瓶中。在恒温水浴锅中稍低于溶剂的沸点温度下回流提取3 h。过滤，滤液经减压浓缩蒸发后在真空干燥箱中于60℃以下真空干燥，再用乙酸乙酯萃取多次，合并萃取液，回收溶剂，干燥，得提取物并放入干燥器中备用，其余月份的提取同此法操作〔6〕。

3.2工作曲线于一系列干燥的25 mL容量瓶中，分别加入40∶60的氯仿一冰乙酸溶液2.5 mL，再分别加入碘标准溶液0.00、0.10、0.30、0.40、0.50、0.60、0.80 mL，摇匀，各加入0.5 mL 10 g/L淀粉溶液，加水稀释至刻度，加塞轻轻摇匀，静置5 min，待分层后，取上清液在1 cm玻璃比色皿中，以零管作参比。在波长为580 nm条件下测定其吸光度，根据对应浓度，绘制工作曲线。

3.3样品测定用可见光分光光度法测定样品。精密称取油样于干燥的25 mL容量瓶中，加入2.5 mL 40∶60的氯仿一冰乙酸溶液，加入饱和碘化钾溶液0.25 mL混匀，暗处放置5 min，取出加水稀释，加入淀粉溶液0.5 mL，加水至刻度，轻轻摇匀，静置，取上清液于l cm比色皿，在波长为580 nm以空白作参比，测定吸光度。

计算公式：过氧化值（%）=样品中含碘（mg）量×100/样品量（g）/1000。

4 结果与分析

4.1标准曲线的绘制按3.2的步骤，绘制标准曲线，将吸光度-浓度进行回归，发现碘浓度在0.1～0.9 mg/L范围内符合比尔定律，吸光度与浓度呈线性关系，其回归方程为：A=0.309 9C+0.124 5，R2=0.992 8，R=0.996 4。

4.2不同月份提取物相同添加量的抗氧化性比较采用可见光分光光度法对添加有不同月份丙酮提取物的食用植物油在保存期间的过氧化值进行测定，并与相同添加量的BHA/BHT进行比较，BHA/BHT添加量采用文献值0.02%，见表1。可以看出，核桃叶的不同月份提取物均有一定的抗氧化作用，核桃叶中含有较多的鞣质类、黄酮类等化合物，其中黄酮类化合物含量可达7.26%。这些化合物分子结构中的酚羟基团，具有明显地清除氧自由基的作用〔6〕，核桃叶提取物的抗氧化作用可能与带有酚羟基有关〔7-9〕。

表1 不同月份提取物相同添加量的抗氧化性比较

5 结论

不同时间采摘核桃叶提取物均对油脂的氧化有一定的抑制作用，其中以9月份采摘的效果最好，与相同浓度BHT和BHA比较，其抗氧化作用强于BHT，比BHA稍弱。结论：不同月份采集核桃叶提取物均可作为天然抗氧化剂使用，其中以9月份采集的效果最好。

〔1〕翟梅枝，韦虹.核桃叶利用初探〔J〕.中国水土保持，1992（8）：40-41.

〔2〕高绍堂.核桃丰产栽培技术〔M〕.北京：科学技术文献出版社，1989：22-25.

〔3〕尉芹，马希汉，韩学文.核桃叶抗氧化作用的研究〔J〕.食品科学，2001，22（7）：81-83.

〔4〕郭琪，翟梅枝，贾彩霞，等.大孔树脂分离纯化核桃叶总黄酮的研究〔J〕.西北林学院学报，2008，23（3）：168-172.

〔5〕翟梅枝，张凤云，高绍棠.核桃叶总黄酮提取方法研究〔J〕.陕西林业科技，2000（1）：5-8.

〔6〕刘慎，邓煜，鲁双.核桃叶黄酮微波辅助提取及抗氧化性研究〔J〕.食品研究与开发，2009，30（6）：21-23.

〔7〕高岳芳，张丽，韩颖.核桃属植物叶的化学成分及生物活性研究进展〔J〕.西北林学院学报，2010，25（4）：165-169.

〔8〕于冬梅，盖素芬.核桃叶中主要营养元素含量的年动态变化规律〔J〕.农产品加工，2009，182（8）：53-56.

〔9〕吕玉年，柴玉霞.核桃花絮与核桃叶所含挥发性成分的对比〔J〕.中国社区医师·医学专业，2011，23（13）：7.