递增负荷运动对大鼠抑郁症模型行为学功能及孤啡肽水平的影响

冯英凯，杨庆华

（1.解放军第一医院呼吸内科，兰州730030；2.重庆市卫生信息中心 400014）

运动通常被认为是治疗抑郁症的有效辅助方法，但对疗效的观察迄今仅停留于患者主观感觉层面。运动是否确有疗效？或是一种心理暗示或运动时患者注意力转移导致的病情好转的错觉？均缺乏必要的客观实验依据支持。本组通过复制大鼠抑郁症模型，观察递增负荷跑台运动后其行为学功能及孤啡肽水平的变化，以探讨运动在治疗抑郁症中的治疗价值及可能机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1动物及分组 成年Wistar大鼠40只，体质量180～220 g，雌雄不拘，Open－Field法得分相近。由第三军医大学动物实验中心提供［动物许可证号：SCXK（渝）2007－0003］。饲养环境：室内温度20～25℃，湿度50%～60%，自由饮食。实验过程中对动物的处置参照国家科学技术部《关于善待实验动物的指导性意见》。实验动物随机分为正常组、模型组、氟西汀组和运动组，每组10只。除正常组合笼饲养外，其余各组均始终分笼孤养（每笼饲养1只）。

1.2主要仪器与试剂 动物实验跑台（ZH－PT－8型，淮北正华生物仪器设备公司）；敞箱为自制，呈正方形，长、宽各100 cm，高40cm，底面由25块等边长25cm的正方形组成，白色内面。PYX－DHS 37℃恒温箱（上海市跃进医疗器械厂）；Sunrise酶标仪（奥地利Tecan公司）；盐酸氟西汀胶囊（每粒20 mg，常州华生制药有限公司）；大鼠孤啡肽酶联免疫分析试剂盒（编号：E0932r，武汉伊艾博科技有限公司）。

1.3方法 动物实验采用随机对照法，孤啡肽水平测定应用ELISA法。实验在第三军医大学新桥医院呼吸病研究所实验室完成。

1.3.1模型复制 参照文献［1－2］方法，应用慢性不可预见的中等强度应激复制大鼠抑郁症模型。模型组、氟西汀组和运动组大鼠，接受21d各种不同的应激，包括冰水游泳（4℃，5 min）、热应激（45℃，5min）、禁饮（24h）、夹尾（1min）、电击足底（50mV，每隔15s刺激1次，每次持续10s，共15次）、摇晃（1次/秒，5min）、禁食（24h）和昼夜颠倒等刺激，每种刺激各4次。正常组不接受任何应激性刺激。

1.3.2分组干预 实验第21天开始进行分组干预。正常组及模型组常规饲养。氟西汀组：以1.8mg/kg氟西汀灌胃，1次/天，连续28d。运动组：实施递增负荷训练，跑台坡度10°。第1～2周，每天20m/min运动10min，25m/min运动10 min，30m/min运动10min，35m/min运动10min；第3～4周，每天20m/min运动10min，25m/min运动10min，30m/min运动20min，35m/min运动20min，共训练4周。

1.3.3血浆和下丘脑样品制备［3］于实验第49天各组大鼠10%水合氯醛麻醉后，经主颈动脉采血，加入预冷的含抑肽酶（500IU/L）和乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Na2，10g/L）的塑料EP管中，充分混匀后，离心（4 ℃，3 000r/min，10min），留取血浆，置于－70℃冰箱待测；同时迅速分离、取出下丘脑，置100℃生理盐水中煮5min，称重后置于含1mL（0.1mol/L）盐酸的匀浆管中充分匀浆，室温放置2h后再加入1mL（0.1 mol/L）氢氧化钠，离心（3 000r/min，10min），留取上清液，置于－70℃冰箱待测。

表1 各组Open－Field法行为学测定结果比较（s）

表1 各组Open－Field法行为学测定结果比较（s）

＊：P＜0.05，与正常组比较；＃：P＜0.05，与模型组比较。

水平运动评分垂直运动评分组别D21 D28 D35 D42 D49正常组 50.32±3.25 48.74±2.16 46.96±5.29 48.41±3.32 42.55±4.12 15.63±1.42 12.34±1.45 10.76±2.D21 D28 D35 D42 D49 02 11.38±1.24 10.56±1.45模型组 16.64±1.27＊ 18.55±2.30＊ 20.42±2.13＊ 19.22±2.98＊ 23.71±3.35＊ 5.25±0.88＊ 4.36±0.32＊ 6.37±1.68＊ 5.96±1.12＊ 7.32±1.26＊氟西汀组 15.43±1.15＊ 21.36±2.14＊ 30.26±3.32＊＃37.12±4.53＃ 35.45±2.16＃ 4.58±0.39＊ 6.15±1.25＊ 7.14±1.08＊ 8.43±1.27＊＃ 8.18±2.62＊运动组 12.28±1.57＊ 18.96±2.08＊ 28.63±2.17＊＃35.42±4.12＃ 36.26±2.36＃ 5.37±1.02＊ 6.22±0.78＊ 7.56±1.32＊ 8.76±1.38＊＃ 8.25±1.33＊

1.4指标测定

1.4.1行为学指标 于实验第21（D21）、28（D28）、35（D35）、42（D42）、49（D49）天应用 Open－Field法测定各组行为学指标。以动物穿越敞箱底面格数为水平得分，以直立次数为垂直得分，每次测定3min。

1.4.2血浆和下丘脑孤啡肽水平测定 应用ELISA法。具体操作参照大鼠孤啡肽酶联免疫分析试剂盒使用说明书。

1.5统计学处理 采用SPSS11.0软件进行统计学处理，数据以s表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1实验对象分析 40只纳入大鼠完成全部实验，实验期间无1只死亡。所有结果均列入数据分析。

2.2行为学测定结果 各组Open－Field法行为学测定包括大鼠水平运动、垂直运动评分（表1，图1、2）。结果显示，实验第21天（D21），造模完成时，模型组、氟西汀组及运动组水平运动、垂直运动评分均显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。干预1周后（D28），氟西汀组及运动组评分变化不明显；干预2周后（D35），氟西汀组及运动组水平运动评分显著低于正常组而高于模型组（P＜0.05），垂直运动评分与模型组比较差异无统计学意义；干预3周后（D42），氟西汀组及运动组水平运动评分显著高于模型组，垂直运动评分显著低于正常组而高于模型组（P＜0.05）；干预4周后（D49），氟西汀组及运动组水平运动评分显著高于模型组，与正常组间差异无统计学意义。

图1 各组Open－Field法水平运动评分比较

2.3下丘脑及外周血孤啡肽含量测定结果 模型组下丘脑及外周血孤啡肽含量显著高于正常组相应指标，差异有统计学意义（P＜0.01）；而氟西汀组及运动组上述指标均显著高于正常组，而低于模型组，差异均有统计学意义（P＜0.05），各组大鼠下丘脑及外周血孤啡肽含量比较，见表2。

图2 各组Open－Field法垂直运动评分比较

表2 各组大鼠下丘脑及外周血孤啡肽含量比较（s，ng/L）

表2 各组大鼠下丘脑及外周血孤啡肽含量比较（s，ng/L）

＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01，与正常组比较；＃：P＜0.05，与模型组比较。

组别 n 下丘脑孤啡肽 外周血孤啡肽正常组10 43.36±6.32 15.24±2.45模型组 10 118.21±10.58＊＊ 32.65±4.86＊＊氟西汀组 10 75.48±7.37＊＃ 21.36±4.35＊＃运动组 10 73.58±8.21＊＃ 24.48±3.28＊＃

3 讨 论

抑郁症是一种严重影响患者身心健康的医学紊乱，成为现代文明社会的隐形杀手之一。随着生活节奏的加快，其发病率呈上升趋势［4－5］。患者常感情绪低落，甚至以自杀解除痛苦。抑郁症的治疗方法包括药物疗法、心理疗法、运动疗法等。运动疗法近年来备受推崇，但缺乏必要的证据支持。本研究通过复制大鼠抑郁症模型，观察递增负荷运动对其行为学改变及孤啡肽水平的影响，并与氟西汀治疗平行对比，了解运动在抑郁症治疗中的潜在价值。

表1、图1～2结果显示，实验第21天，除正常组以外的3个实验组大鼠水平运动、垂直运动评分均显著降低，提示模型复制成功。干预1周后，氟西汀组及运动组评分变化不明显，提示短时间药物或运动干预无明显疗效。干预2周后，氟西汀组及运动组水平运动评分显著低于正常组而高于模型组（P＜0.05），显示用药或运动后2周，实验动物行为学功能改善。干预3、4周后，氟西汀组及运动组水平运动评分显著高于模型组，与正常组间差异无统计学意义，显示了药物及运动对抑郁症模型的良性效应。

孤啡肽又称“痛敏素”，是阿片样孤儿受体的内源性配体，其主要分布于中枢神经系统。研究认为它与心理和生理均密切关联［6］，对痛觉、离子通道、免疫功能、学习与记忆、心血管系统、消化系统、呼吸系统、行为与运动等均产生影响。有报道孤啡肽可能通过抑制5－羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺等神经递质的释放及转运而导致抑郁症的发生［7－8］。国内亦有多项研究证实内啡肽与抑郁症的发生可能存在关联［9－10］。内啡肽及其受体可能作为治疗抑郁症的靶点［11－13］。

本组研究发现，与正常组比较，模型组、氟西汀组及运动组下丘脑及外周血孤啡肽水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，氟西汀组及运动组下丘脑及外周血孤啡肽水平显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05），提示药物或运动干预均有部分改善抑郁症作用。氟西汀组及运动组比较，下丘脑及外周血孤啡肽水平差异无统计学意义，显示运动与药物疗法疗效相似。

综上所述，本研究提示，运动疗法疗效与氟西汀类似，对抑郁症有显著的改善效果，其机制可能与降低孤啡肽水平有关。相比于药物［14］，运动强度可控、实施简单、无毒副作用，值得推广应用。但应注意到，并非所有的抑郁症患者都适合运动治疗，某些躁狂型患者运动后病情可能反而加重；另外，超负荷的力竭运动同样可能带来各种身体损害［15－18］，所以运动并非治疗抑郁症的万能灵药，应在医生指导下选择使用。

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