饲料中添加不同油脂对奥尼罗非鱼生长发育、体内抗氧化能力和血液生化指标的影响

韩春艳 郑清梅 冯丽娜

众所周知，脂肪除了作为生命活动的重要能量来源外，还可为动物提供必需的脂肪酸和磷脂，参与细胞膜构成，促进脂溶性维生素的吸收和运输等。研究表明，饲料中的不同脂肪来源不仅直接影响鱼类的生长发育及体内脂肪酸的组成[1－3]，还会影响鱼类体内的免疫机能，包括特异性免疫和非特异性免疫[4－5]。但目前不同脂肪源对鱼类的抗氧化机能影响的研究鲜有报道。

本研究以目前我国广泛养殖的奥尼罗非鱼为养殖对象，研究富含高不饱和脂肪酸的鱼油、富含饱和脂肪酸的猪油、富含亚油酸（n－6）的豆油以及富含油酸（n－9）的茶油对其体内抗氧化酶的活性以及对血液相关指标的影响，以期为深入研究罗非鱼的营养生理、生化的理论基础研究，研制优质饲料配方，进一步提高罗非鱼的产量和质量提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

试验选用的奥尼罗非鱼幼鱼，从广东省梅州市水产研究所购得，试验前暂养于水泥池中。用商品配合饲料驯食14 d，然后选择体重基本一致的健康鱼180尾，随机分为4组，每组设3个重复，每个重复15尾分养于长×宽×高为1.5 m×1 m×1 m的水族箱中。各处理组的初始体重无显著差异，平均体重约(4.60±0.5)g。

1.2 试验饲料

饲料的蛋白水平设计约为30%，能量11 kJ/g左右。饲料中分别添加4.5%猪油、鱼油、豆油和茶油（设为猪油组、鱼油组、豆油组和茶油组）。对所需饲料一次性配合好，并对饲料进行制粒，自然风干后置于4℃下进行保存。试验饲料配方及营养水平见表1。

表1 试验饲料配方及营养水平

1.3 饲养管理

饲养试验在广东省嘉应学院生命科学学院实验室进行。饲料每日饲喂量按鱼体重的3%～5%进行饲喂，以鱼饱食为准。每天分2次(9:00、16:00投喂)，每次投料60 min后，将每个水族箱中没有被采食的饲料用尼龙网捞出，晒干后称重。正式试验期为70 d，试验开始及结束时称重，测定增重率（WGR）。每天记录水温、pH值以及鱼的尾数，并观察鱼体活动是否正常。

1.4 样品采集与分析

70 d的养殖试验结束后，称取各水族箱内鱼体总重，每箱取3尾，每个试验组共取9尾，小心取其肝脏样品，并迅速置于液氮中保存。之后转移至－80℃冰箱中以待分析。

肝脏的抗氧化指标测定：肝脏组织样品在4℃下解冻，剪碎，按质量体积比1：9(w/v)加入预冷的生理盐水，玻璃匀浆器匀浆，匀浆经3500 r/min离心10 min取上清备用。总抗氧化能力(T－AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH－Px)和丙二醛(MDA),均用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。

组织匀浆蛋白质含量用蛋白质测定试剂盒（考马斯亮蓝法）测定。

血清样品的制备：采用尾动脉采血法，将鱼固定在冰盘上，将注射器在臀鳍后部插入椎体回血即可采血，血样于4℃冰箱静置24 h，3000 r/min、4℃离心10 min得血清样品。每个水族箱中取4～6尾鱼血清样品合并，保存于－20℃冰箱中以待分析。

血液生化指标：血清总甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)含量均使用梅州市中医院自动生化测定仪测定。

1.5 统计分析

采用SPSS 16.0软件对所得相关数据进行单因素方差分析(One－Way ANOVA)，并进行 Duncan's法多重比较，P＜0.05表示具有显著性差异。所有结果以平均值±标准差(Mean±SD.)表示。

2 结果与分析

2.1 饲料中不同的油脂来源对奥尼罗非鱼生长发育的影响(见表2)

由表2可知，豆油组、鱼油组及茶油组的增重率均显著高于猪油组（P＜0.05），且豆油组、鱼油组及茶油组之间差异不显著（P＞0.05）。

表2 饲料中不同的油脂来源对奥尼罗非鱼生长发育的影响

2.2 饲料中不同的油脂来源对奥尼罗非鱼抗氧化性能的影响(见表3)

由表3可知，豆油组、鱼油组和茶油组鱼体肝脏超氧化物歧化酶(SOD)的活性无明显差异，但均显著高于猪油组(P＜0.05)；各组鱼体肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)活性依次为：鱼油组＞猪油组＞茶油组＞豆油组，鱼油组显著高于茶油组、豆油组(P＜0.05)，猪油组分别与茶油组和鱼油组之间差异不显著(P＞0.05)；各组鱼体肝脏总抗氧化力(T－AOC)依次为：茶油组＞鱼油组＞猪油组＞豆油组，茶油组显著高于猪油组和豆油组；鱼体肝脏内丙二醛(MDA)含量依次为：猪油组＞豆油组＞鱼油组＞茶油组，猪油组显著高于其它各组(P＜0.05)。

2.3 饲料中不同的油脂来源对奥尼罗非鱼血清生化指标的影响(见表4)

表3 饲料中不同的油脂来源对奥尼罗非鱼抗氧化能力的影响

表4 饲料中不同的油脂来源对奥尼罗非鱼血清生化指标的影响

由表4可知，饲料中不同的油脂来源对各血清生化指标除血清总胆固醇（TC）外均会产生明显影响。其中，血清中总甘油三酯（TG）的含量依次为：豆油组＞猪油组＞鱼油组＞茶油组，鱼油组与茶油组之间差异不显著(P＞0.05)；鱼油组、茶油组血清中高密度脂蛋白胆固醇（HDL）明显高于豆油组和猪油组（P＜0.05），鱼油组与茶油组之间，豆油组与猪油组之间差异不显著；血清中低密度脂蛋白胆固醇（LDL）浓度依次为：茶油组＞鱼油组＞豆油组＞猪油组，鱼油组、豆油组和茶油组之间差异不显著(P＞0.05)。鱼油组和茶油组的高、低密度脂蛋白浓度比值(HDL/LDL)显著高于猪油组和豆油组(P＜0.05)，其中鱼油组和茶油组、猪油组和豆油组之间差异不显著(P＞0.05)。

3 讨论

3.1 不同油脂对奥尼罗非鱼生长及抗氧化能力的影响

一般来说，鱼类对鱼油的利用率较高，对猪油和植物油的利用率较低[6－8]。研究表明[8]，在奥尼罗非鱼的饲料中添加亚麻籽油、亚麻籽油与棕榈油混合的油脂（2：1、3：2）、鱼油以及谷物油对其生长发育不会产生明显的影响。在对其它淡水鱼的研究中也有类似结果。Noffs等[9]研究发现，猪油、豆油代替饲料中的鱼油对鸭嘴鲶的存活率、终末体重、特定生长率及饲料转化效率均无明显影响。本研究经过10周的养殖试验，各组试验鱼生长状况良好，均未出现明显的脂肪酸缺乏的症状。本研究发现鱼油组、豆油组及茶油组试验鱼的终体重及增重率均无明显差异，说明奥尼罗非鱼能可以充分利用以上油脂作为其生长的能量来源，但猪油组的相关生长指标却显著降低说明其在一定程度上对猪油的利用有限制。

动物细胞生存要求适当的氧化与抗氧化平衡。鱼体内抗氧化酶的缺乏会导致体内原有的自由基代谢平衡遭到破坏[10]。自由基可与细胞膜、细胞器膜上的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，产生醛、酮、醇和环氧化物（如典型代表产物MDA），从而影响机体的物质代谢，危及正常的生命活动[11]。正常情况下，体内产生的自由基即活性氧可被非酶性或酶性抗氧化系统清除掉。其中SOD和GSH－Px是鱼体内的主要抗氧化酶，SOD能催化超氧阴离子(O2－·)产生歧化反应，清除超氧阴离子(O2－·)，保护细胞免受损伤。GSH－Px能特异的催化还原型谷胱甘肽(GSH)对H2O2的还原反应，保护细胞膜结构和功能的完整性。

王朝明等[12]研究表明，饲料的脂肪水平直接影响胭脂鱼幼鱼的抗氧化能力。同时n－3 PUFA可明显改善体内的脂质过氧化作用[13－14]。杨小军等[15]研究发现，多不饱和脂肪酸对肉仔鸡抗氧化指标有一定影响，日粮中添加鱼油和玉米油后均使21日龄肉仔鸡脾脏中SOD活性得到提高，但在42日龄时均未表现显著影响。尹彩娜等[16]对小鼠的研究发现，在饲料中添加茶油与猪油比较，茶油组明显提高小鼠肝脏的抗氧化能力（T－AOC、SOD 和 GSH－Px），并降低 MDA 的含量。

本研究表明，饲料中不同的油脂来源对鱼类的抗氧化性能产生明显的影响。茶油组、鱼油组及豆油组鱼体肝脏内SOD的活力均显著高于猪油组，而鱼油组GSH－Px活力显著高于豆油组和茶油组，豆油组GSH－Px活力最低，说明不同油脂对抗氧化酶的作用具有特异性。从T－AOC及MDA指标看，茶油和鱼油更适合奥尼罗非鱼的健康。

3.2 不同油脂对奥尼罗非鱼血液指标的影响

鱼类的血液生理和生化指标被广泛地用来反映鱼类机体的新陈代谢水平和生理状况，一定程度上可以更准确地反映鱼类营养状况的好坏。血清中脂类只占全身的脂肪含量极少的一部分，但代谢上却非常活跃。肠道吸收的外源性食物脂类、肝脏合成的内源性脂类及脂肪组织的动用都须先经血液再到其它组织，而且鱼类脂肪的运输，主要借助于血清。因此，血脂水平可以反映全身脂类代谢状况，血液中70%～80%的胆固醇来自肝脏，其余来自消化道，如肝细胞功能障碍和结构损害，则血清胆固醇可迅速升高[17]。低密度脂蛋白和高密度脂蛋白在动物体内都有重要作用：低密度脂蛋白把胆固醇从肝脏运送到全身组织，高密度脂蛋白将各组织的胆固醇送回肝脏代谢。当低密度脂蛋白过量时，它携带的胆固醇便积存在动脉壁上，久了容易引起动脉硬化。高密度脂蛋白与低密度脂蛋白的比值在一定程度上能够反映机体的脂类代谢情况。

饲料中不同的脂肪来源会直接影响动物血液相关的生化指标[16]。其主要原因是不同的脂肪酸可直接或间接作用于与脂类代谢相关酶从而调节脂类的代谢[18]。特别是n－3 PUFA对降低血液中TG含量有明显作用，但对TC的作用程度不一，总体是效果没有对TG的降低明显[19]。本研究发现，饲料中不同的油脂来源对各血清中除TC浓度无明显影响外，对TG、HDL、LDL以及二者比值均产生明显影响。

饲料中不同的油脂来源以及不同种类的鱼有不同的结果。高露姣等[20]在自配的基础饲料中分别添加猪油、葵花籽油、鱼油、豆油、混合油(鱼油：豆油：猪油=1：1.2：0.8)和氧化鱼油饲喂施氏鲟幼鱼。试验结果显示：各组间幼鱼的血液几项指标均有较大差异。从该试验看来，猪油组、葵花籽油组和氧化鱼油组幼鱼的血清TG和TC都高于鱼油组、混合油组，而其高密度脂蛋白胆固醇含量显著低于鱼油组。吉红等[21]通过在鲫鱼饲料中分别添加豆油、菜油及混合油（二者1：1的比例）发现对鲫鱼血清中的TC和TG均无明显影响。本研究表明，鱼油和茶油可明显提高罗非鱼血液中HDL的浓度，同时茶油也可提高血液中LDL的浓度，但从二者比值看，鱼油和茶油更有利于奥尼罗非鱼体内的脂类代谢。

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