休眠期中华鳖消化器官中主要消化酶活性分布＊

吴红松

（菏泽学院，山东菏泽 274015）

中华鳖（Trionyxsinensis）隶属于龟鳖目（Testudinata）、鳖科（Trionychidae）、鳖属（Trionyx），是我国重要的特种经济动物，有较高的食用价值和药用价值。作为变温动物，中华鳖对外界温度变化十分敏感，温度的高低会直接影响其运动与摄食。每年10月底至翌年4月初，当水温低于约15℃时，中华鳖潜入水底泥沙中冬眠，在此期间动物不摄食，代谢率降低，仅靠体内积累的营养物质维持较低的代谢过程［1］。体重损失10%～15% 。

近年来，对于中华鳖的研究，在免疫功能方面较多［2－4］，在鳖的疾病防治［5］、系统发育［6］及分子生物学［7］、组织学［8］方面也都有报道，但对中华鳖冬眠期消化道生理生化方面的研究少见报道。本文对中华鳖冬眠期消化酶的活性进行了初步探讨，旨在丰富其消化道生理生化的研究内容并为中华鳖人工饲料研制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

2010年1月底，自菏泽黄河养殖场购买6只4龄中华鳖，平均体重为672.25g。试验过程中将中华鳖置于2.0m×1.5m×1.5m的饲养箱中饲养。

1.2 方法

1.2.1 样品处理及测定 试验用中华鳖在室内水族箱中休眠2d后取样，断头杀死，取出胃、肝脏和肠道，测量胃、肝脏和肠pH。肠道从第1个回折点以前为前肠，最后1个回折点以后为后肠，其间为中肠。剔除肝脏和肠道周围的脂肪和肠系膜等附着物，用去离子水冲洗肠道内容物，用滤纸吸干。样品称重，加9倍体积的蒸馏水匀浆，4 000r／min离心15min，取上清液作为粗酶液，4℃保存、待测。在24h内测定完毕。

胃蛋白酶活性的测定：胃蛋白酶采用福林－酚法测定。酶活力单位定义为：每毫克组织蛋白37℃每分钟分解蛋白生成1μg氨基酸定义为1个胃蛋白酶活力单位。

淀粉酶活性的测定：淀粉酶采用碘－淀粉比色法测定。酶活力单位定义为：组织中每毫克蛋白在30℃与底物作用30min，水解10mg淀粉定义为1个淀粉酶活力单位。

脂肪酶活性的测定：脂肪酶采用甘油三酯乳化液水解法测定，酶活力单位定义为：在37℃条件下，每克组织蛋白与底物作用1min，每消耗1μmol底物定义为一个脂肪酶活力单位。

酶粗提取液中蛋白质含量的测定：采用考马斯亮蓝法。

胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和蛋白质含量的测定均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒，严格按照试剂盒测定方法进行。

1.2.2 数据处理 试验所得数据采用SPSS10.0软件进行单因素方差分析，用Duncan多重比较分析组间差异显著性，所得数据用平均值±标准差（±SD）表示，P＜0.05为差异显著。

2 结果

2.1 胃蛋白酶

由表1可知，中华鳖胃蛋白酶活性在肠中最高，胃次之，肝脏中最低，且各器官中差异显著（P＜0.05）。肠中以中肠最高，前肠次之，后肠最低，但没有显著差异。蛋白酶在中华鳖不同消化器官中的分布，有利于增强消化、吸收各种蛋白质的能力。

2.2 脂肪酶

由表1可知，肠道中脂肪酶的活性较胃、肝脏中高，但差异不显著。肠中以中肠最高，后肠次之，前肠最低，且著差异显著（P＜0.05），由此可以推测中华鳖肠道是消化、吸收脂类物质的主要器官。

2.3 淀粉酶

从表1中可知，肠道中淀粉酶的活性较胃、肝脏中高，且差异显著（P＜0.05）。在肠中以中肠最高，后肠次之，前肠最低，但差异不显著。可见淀粉酶在肠内的消化作用较强，在胃中较弱。

表1 中华鳖不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±标准误）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

表1 中华鳖不同消化器官中蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性（平均值±标准误）The activities of protease，lipase，amylase in different parts of digestive organs of Trionyx sinensis（±SD） U／min·g

注：＊代表组间差异显著（P＜0.05）。Note：＊shows significant difference among groups（P＜0.05）.

活性酶Enzyme activity胃Stomach肝脏Liver前肠Foregut中肠Midgut后肠Hindgut胃蛋白酶活性Protease activity 490.353±70.920＊ 296.672±72.356＊ 774.407±99.733 822.075±210.614 691.751±165.902脂肪酶活性Lipase activity 166.409±31.627 184.867±41.910 452.507±33.742＊ 614.923±46.446＊ 481.786±44.379＊淀粉酶活性Amylase activity 0.125±0.022＊ 0.050±0.020＊0.140±0.021 0.178±0.024 0.146±0.033

3 讨论

中华鳖脂肪酶活性在休眠期呈现，中肠＞后肠＞前肠＞胃，而非休眠期［6］呈现前肠＞ 中肠＞ 后肠＞胃，这可能因为低温抑制休眠期中华鳖脂肪酶活性，而前肠酶活性受温度影响较大。中华鳖蛋白酶活性在休眠期，中肠＞ 前肠＞后肠＞胃，非休眠期蛋白酶活性胃＞前肠＞中肠＞后肠［9］，休眠期淀粉酶中肠＞后肠＞前肠＞胃，而非休眠期幼鳖中淀粉酶活性前肠＞胃＞中肠＞后肠［10］。这可能由于低温抑制休眠期中华鳖消化酶活性，其中胃中酶活性受温度影响最大，而前肠次之。可见，环境温度的改变将影响中华鳖消化酶的活力。天然水域中，中华鳖属于典型的肉食性动物，其蛋白酶活性明显高于其他肉食性鱼类（如鳜鱼、乌鳢）［11］，因而要求人工养殖时饲料有较高的蛋白质含量。中华鳖消化系统中淀粉酶活性的存在，说明中华鳖依然具有消化吸收淀粉的能力。添加淀粉对中华鳖生长的影响值得进一步试验研究。肝脏是消化酶生成的中心器官，它分泌机能的强弱直接影响中华鳖对食物的消化能力，但消化酶活性低。由试验中可以看出，中华鳖的胃、肝、肠中含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等消化酶。且不同的消化酶在不同的消化部位，其活性不完全相同。

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［4］温安祥，周定刚.内毒素诱导中华鳖免疫应激的研究［J］.动物营养学报，2008，20（6）：657－661.

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［11］谭北平.太湖沿岸区几种肉食性鱼类蛋白酶活性的比较研究［J］.湖北农学院学报，1995，2（3）：97－98.