河北进境种用动物衣原体血清学检测

王建昌，付 琦，王金凤，田振祥

（河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心，河北 石家庄 050051）

衣原体（Chlamydia）是一种专一性细胞内病原，具有非常广谱的宿主，并能在人和动物等宿主中引起肠炎、肺炎、流产等多种疾病[1-3]；而其中的鹦鹉热衣原体主要引起动物的流产、肺炎、腹泻以及人类的肺炎、结膜炎、尿道炎等。世界动物卫生组织（OIE）将此病列为必须通报疾病[4]，我国列为二类传染病[5]。禽衣原体病是由鹦鹉热嗜性衣原体引起的一种传染病，其中不同禽种易感性不同，临床症状的差异取决于鸟的品种、年龄以及衣原体菌株，以鹦鹉和鸽子易感。而鸡对鹦鹉热嗜性衣原体的抵抗力较强，鸡衣原体病只有幼年鸡发生急性感染时出现死亡，真正发生流行的很少。大多数自然感染的鸡，症状不明显，主要表现沉郁、拉稀、呼吸困难、结膜炎、渐进性消瘦、衰竭死亡。病理剖检以纤维素性心包炎、气囊炎、肝肿大、肝周炎和脾肿大等特征[6]。猪衣原体病是由鹦鹉热嗜性衣原体和流产嗜性衣原体引起的一种慢性、接触性人畜共患传染病，临床上以妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔，各年龄段猪发生肺炎、肠炎、多发性关节炎、心包炎、结膜炎，公猪发生睾丸炎等为主要特征。

目前研究表明国内规模化养殖场中动物的衣原体抗体阳性率较高，造成了极大地经济损失。近几年来我国从国外引进了大量的优良动物品种，极大地促进我国畜牧业的发展和提高了人民生活水平。为了探明引进种用动物中衣原体感染情况，本研究针对河北省2011—2012年间引进的2批进境种鸡、2批进境种鸭及2批进境种猪血清样品，通过间接血凝试验对衣原体抗体水平进行了检测。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 待检材料

随机抽取实验室-20℃冷藏保存的进境种猪血清90份，种鸭血清48份，种鸡血清72份。样品无菌采集，且未溶血、未腐败。

1.2 诊断试剂盒和试剂

衣原体间接血凝抗原、阴、阳性血清（批号均为120215）、稀释液（批号为120320），购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.3 主要仪器设备和器材

96孔V型微量反应板，25 µL、100 µL微量移液器，微量振荡器，超净工作台，恒温培养箱，高压消毒器，台式离心机，1.5 µL离心管。

1.4 操作方法与结果判定

IHA操作方法：用定量加样器每孔加稀释液75µL。取25 µL 待检血清以4 倍递增稀释，从第一孔稀释至第三孔，即1:4、1:16、1:64，第三孔弃去25 µL，孔内液体量为75 µL。同一板上同时设阳性、阴性和空白对照各2 孔。向每孔加抗原各25 µL，置微型振荡器上振荡2 min，在37 ℃下作用2 h后判定结果。

IHA结果判定：“++++”表示100%凝集红细胞全部凝集，形成一层均匀的膜，布满整个孔底；“+++”表示75%凝集红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者稍小；“++”表示50%凝集红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状；“+”表示25%凝集红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点；“-”表示红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。对照各孔均成立即：阳性血清孔呈“+ + + +”；阴性血清孔呈“-”；空白对照孔呈“-”。被检血清判定标准：被检血清1:16孔出现“++”以上者为阳性；1:4孔出现“+”以下者为阴性；1:4孔“++”至1:16孔“+”以下者为可疑。

2 结果与分析

2.1 IHA检测结果

对210份抽检血清采用IHA检测衣原体抗体，结果表明阳性样品为33份，抗体阳性率为15.7%（表1）。

表1 血清IHA检验结果

2.2 不同动物IHA检测结果

由表1 可知，不同动物血清样品中均可检出衣原体抗体。其中猪抗体阳性率最高，为20%，而鸭抗体阳性率最低，为4.2%。

3 讨论

3.1 目前检测衣原体抗体的方法主要有间接血凝试验（IHA）、补体结合试验（CFT）、间接免疫荧光试验（IFA）和ELISA方法。目前国内动物衣原体抗体检测主要依赖间接血凝试验（IHA），该方法操作简单，不需要专门的仪器设备，在基层有着广泛的应用。但是该方法重复性较差，存在一定的假阳性。补体结合试验（CFT）繁琐费时的操作、结果重复性不高、具有极高的技术要求，该方法非常不利于推广应用。间接免疫荧光试验（IFA）试剂昂贵，同时需要荧光显微镜和操作人员的丰富经验，很难推广使用。目前ELISA方法要比上述几种方法更加稳定、敏感、特异性更强，但是均为国外生产，价格昂贵。如以色列Biogal公司的ImmunoComb诊断试剂卡，操作方便，但是每份样品成本为120元，十分不利于大规模的检测。目前急需国内的衣原体ELISA检测试剂盒的商品化。

3.2 国内邱昌庆等通过间接血凝试验（IHA）对动物群中衣原体感染情况进行了检测。结果表明家禽血清阳性率为24.9%，猪血清阳性率为46.8%，奶牛为21.4%，水牛为14.0%～20.0%，黄牛为15.2%～32.6%，牦牛为18.7%，并且不同地区衣原体抗体阳性率有着明显的差异。对于我国不同地区进境动物的衣原体感染情况，目前的报道还较少。本研究中我们共检测了6批3种不同动物共210份血清。结果表明3种动物血清样品中均有阳性检出，提示目前引入的种用动物携带该病的机率很大。由于检测的范围和数量有限，本研究结果尚不能真正反映出引入种用动物感染本病的全貌。本研究涉及的检测对象没有包括目前引进量较大的奶牛，为了更加真实、全面的反映引进动物衣原体感染情况，我们下一步将进一步扩大检测范围及数量。

[1]杨宜生，姜天童，方雨铃，等. 衣原体和衣原体病[M]. 武汉：湖北科技出版社，1994.

[2]Kauffold J，Melzer F，Henning K，et al. Prevalence of chla⁃mydiae in boars and semen used for artif i cial insemination[J].Theriogenology，2006，65（9）：1750-1758.

[3]Zhong G. Killing me softly：Chlamydial use of proteolysisfor evading host defenses[J]. Trends Microbiol，2009，17（10）：467-474.

[4]陆承平，陈杖榴. 兽医法规导论[M]. 北京：中国农业出版社，2006：232.

[5]林颖，曹庆炎，孟祥勇. 禽衣原体病综述[J]. 辽宁畜牧兽医，2004（5）：40-42.

[6]邱昌庆.衣原体分类研究进展[J]，中国兽医科技，2000，30（12）：19-21.