高效液相色谱法同时测定复方氨氯地平片中苯磺酸氨氯地平和赖诺普利的含量

相文杰 ，叶 靖 ，田志杰 ，韩 洁 ，姚 静

1南京瑞尔医药有限公司，南京 210061；2南京泽恒医药技术开发有限公司，南京 210028；3中国药科大学药剂教研室，南京 210009

苯磺酸氨氯地平是二氢吡啶类钙拮抗剂（钙离子拮抗剂或慢通道阻滞剂），对血管平滑肌具有明显的舒张作用，且具有抗动脉粥样硬化作用。赖诺普利是新一代血管紧张素转换酶抑制剂，主要通过抑制肾素－血管紧张素－醛固酮系统降低血压，同时亦对低肾素性高血压有降压作用。复方氨氯地平片是结合氨氯地平和赖诺普利降压优势的新型治疗高血压复方药物。本文采用高效液相色谱法同时测定两组分含量，具有快速、准确的优点。

1 材 料

1.1 仪器

戴安Ultimate3000高效液相（包含：Ultimate3000 Pump，Ultimate3000 Autosampler，Ultimate3000 column compartment，Ultimate3000 Various Wavelength Dectector）， 变色龙工作站；pH 计 （Sartorius，PB-10）；电子天平（Sartorius，BSA2245）。

1.2 试药

复方氨氯地平片（赖诺普利10 mg/片，氨氯地平 5 mg/片，批号：110905、110906、110907，南京瑞尔医药有限公司）；苯磺酸氨氯地平对照品（批号：171215－201109，中国药品生物制品检定所）；盐酸赖诺普利对照品（批号：100113－201103，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸二氢钠为分析纯；水为重蒸水（自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：赛分 C18柱（6 mm×250 mm，5 μm）；柱温:50℃；检测波长:210 nm；流速:1.8 mL·min-1；进样量：20 μL。 流动相:A 相:乙腈-0.05 mol·L－1磷酸二氢钠（pH 5.0）=3∶97；B 相：乙腈-0.05 mol·L－1磷酸二氢钠（pH 5.0）=40∶60；进行梯度洗脱:A 相 1～17.5 min从 100%～85%，17.5～20 min从 85%～100%。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液取赖诺普利对照品21.76 mg，苯磺酸氨氯地平对照品13.86 mg，用流动相B溶解稀释、定容至100 mL，制备成含赖诺普利0.2 mg·mL－1和氨氯地平 0.1 mg·mL－1的溶液， 作为对照品储备溶液[1]。

2.2.2 供试品溶液取样品20片，研细，精密称取200 mg（相当于赖诺普利无水物10 mg、氨氯地平5 mg），置50 mL量瓶中，用流动相B定容至刻度，振摇5 min，摇匀滤过，取续滤液，即得。

2.3 系统适用性

分别取空白溶剂，氨氯地平和赖诺普利对照品溶液，样品溶液注入高效液相色谱仪，绘制色谱图，结果见图1。空白溶剂不干扰氨氯地平和赖诺普利的测定。

图1 空白溶剂、样品和对照品的色谱图

2.4 耐用性考察

取同一份供试品溶液分别考察柱温变化（±5℃）、检测波长变化（±5 nm）、流速变化（±0.1 mL·min-1）、流动相pH变化（±0.2），计算苯磺酸氨氯地平和赖诺普利含量的变化。结果见图2～5，可见流速和柱温对赖诺普利的色谱行为有较大影响，在各条件下的苯磺酸氨氯地平和赖诺普利的含量为100.3%±2.31%和99.5%±1.72%，这说明本方法具有一定的耐用性。

图2 柱温对色谱行为的影响

图3 检测波长对色谱行为的影响

图4 流速对色谱行为的影响

图5 流动相pH对色谱行为的影响

2.5 标准曲线制备

精密取苯磺酸氨氯地平和赖诺普利对照品储备液 0.2、0.4、0.8、1.2、2、3、4 mL 分别置 10 mL 量瓶中，用流动相B稀释至刻度。分别进样20 μL测定，以浓度（X，mg·mL-1）为横坐标，相应的峰面积（Y）为纵坐标，苯磺酸氨氯地平和赖诺普利回归方程分别为：Y=20.40X-0.1036 （r2=0.9999）；Y=38.17X+4.470（r2=0.9996）；两种药物的线性均良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品的细粉适量，依法测定6次，考察方法重复性。结果苯磺酸氨氯地平和赖诺普利的含量分别为106.6%±0.6%和99.6%±0.17%，表明重复性良好。

2.7 精密度试验

分别精密量取苯磺酸氨氯地平、赖诺普利的对照品储备液1 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，连续进样6次，每次进样20 μL。记录峰面积，苯磺酸氨氯地平和赖诺普利的RSD分别为0.87%和0.23%。表明进样体积与仪器检测精密度良好。

2.8 回收率试验

在一定量的空白辅料的样品中，精密加入对照品适量，混匀，制成低、中、高3个浓度的供试溶液，进样测定，计算回收率。苯磺酸氨氯地平和赖诺普利平均回收率分别为100.8%±0.7%和 101.4%±0.6%（n=9）。

2.9 供试液的稳定性

供试品溶液置室温放置 10 h， 在 0、2、4、6、8、10 h时分别测定含量，记录峰面积，供试品溶液在10 h内基本稳定，苯磺酸氨氯地平的RSD为0.83%，盐酸赖诺普利的RSD为1.48%，均小于2.0%。

2.10 含量测定

取3批复方苯磺酸氨氯地平片，依法测定，记录色谱图，按外标法计算3批不同产品的2个组分的含量。结果见表1。3批样品氨氯地平和赖诺普利的含量均符合要求。

表1 3批复方苯磺酸氨氯地平片的含量测定结果

3 讨 论

3.1 氨氯地平为水难溶性药物，赖诺普利为易溶于水的药物，两者在大多数流动相中的色谱行为差异很大，一般都采用分别测定含量的方法[2-3]。等度洗脱很难在较短时间内对其分离测定，本方采用梯度洗脱对其同时测定。

3.2 通过改变柱温、检测波长、流速和流动相pH，对本方法的耐用性进行验证，可以看出流速和柱温对赖诺普利的色谱行为有较大影响；氨氯地平在色谱条件有微小的变化，其峰形和保留时间无明显变化。通过在不同条件下外标法计算含量，苯磺酸氨氯地平和赖诺普利的含量测定的RSD均小于2%。表明本方法具有一定的耐用性。

3.3 采用甲醇、流动相A和B对样品中的药物进行提取试验，结果显示，以流动相B为溶剂对两种药物的提取回收率均大于98%，且处理方法简单，明显优于甲醇和流动相A。

[1] 赖 可，晁若冰，李 楠，等.测定复方苯磺酸氨氯地平胶囊的含量[J]. 华西药学杂志，2010，25（6）：748-9.

[2] 丁逸梅，杜 云.RP－HPLC法控制复方赖诺普利片质量方法研究[J]. 江苏药学与临床研究，2004，12（4）：9-11.

[3] Beasley CA,Shaw J,Zhao Z,et al.Development and validation of a stability indicating HPLC method for determination of lisinopril,lisinopril degradation product and parabens in the lisinopril extemporaneous formulation[J].J Pharm Biomed Anal,2005,37(3):559-67.