重症肺炎支原体肺炎患儿CD14+单核细胞人类白细胞抗原-DR表达的观察

孙海英，邵晓丽，刘淑梅，郭 平，周国忠，陈 溢

（1.浙江省绍兴县妇幼保健所儿童保健科，浙江绍兴 312030；2.浙江省绍兴市人民医院，浙江大学绍兴医院儿科，浙江绍兴 312000；3.浙江省绍兴市人民医院，浙江大学绍兴医院检验科，浙江绍兴 312000）

·论 著·

重症肺炎支原体肺炎患儿CD14+单核细胞人类白细胞抗原-DR表达的观察

孙海英1，邵晓丽2*，刘淑梅2，郭 平2，周国忠3，陈 溢2

（1.浙江省绍兴县妇幼保健所儿童保健科，浙江绍兴 312030；2.浙江省绍兴市人民医院，浙江大学绍兴医院儿科，浙江绍兴 312000；3.浙江省绍兴市人民医院，浙江大学绍兴医院检验科，浙江绍兴 312000）

目的通过研究重症肺炎支原体肺炎患儿静脉血CD14+单核细胞人类白细胞抗原-DR（human leukocyte antigen DR，HLA-DR）表达百分率的变化，评价患儿的免疫状态及与疾病的严重程度和预后的关系。方法选择重症肺炎支原体肺炎患儿共65例，以临床肺部感染评分（clinical pulmonary infection score，CPIS）≥6分为CPIS高分组共21例，CPIS＜6分为CPIS低分组共44例；正常对照组30例。重症MPP患儿入院后第1天及出院当日抽取静脉血，应用流式细胞仪测定CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率，并记录入院当天的CPIS。结果重症肺炎支原体肺炎患儿CD14+单核细胞HLA-DR表达CPIS高分组和CPIS低分组均明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；且CPIS高分组低于CPIS低分组，差异有统计学意义（P＜0.01）；2组治疗后恢复期CD14+单核细胞HLA-DR表达均明显升高（P＜0.01）。结论重症肺炎支原体肺炎患儿CD14+单核细胞HLA-DR表达持续低下提示患儿处于免疫抑制状态。检测CD14+单核细胞HLA-DR表达可用于判断肺炎支原体肺炎患儿病情的严重程度和评估预后。

肺炎，支原体；抗原，CD14；儿童

肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是由肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）感染导致的肺炎，已成为学龄期儿童社区获得性肺炎的常见原因。目前重症患儿增多，导致多脏器功能损害，引起国内外学者的重视。近年来的研究证实，免疫功能紊乱在MPP的发生发展中起重要作用［1］。CD14+单核细胞人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）表达百分率是用于免疫功能抑制的指标之一［2］。本研究通过观察MPP患儿CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率及临床肺部感染评分（clinical pulmonary infection score，CPIS），评价CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率与疾病严重程度及预后的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象：2008年1月—2011年10月我院收治的MPP患儿共65例，男性42例，女性23例，年龄3～8岁，平均（5.8±1.1）岁。根据《诸福棠实用儿科学》第7版 MPP诊断标准［3］，病程早期采用PCR法检测患儿咽拭子标本中MP-DNA阳性，且发病1周后血清MP-IgM阳性，急性期抗体滴度≥1∶80，或恢复期较急性期抗体滴度升高4倍及以上为阳性；临床符合MPP，无其他病原感染的临床及实验室证据。因目前重症MPP尚无统一的诊断标准，本文参考一般的表现及重症支气管肺炎的诊断，将病情重或出现严重肺外并发症，或单用大环内酯类抗生素治疗1周无反应，或病程超过6周仍迁延不愈的，视为重症［4］。排除标准如下。①患有肺结核等其他传染病患儿；②近期有糖皮质激素及免疫抑制剂使用史；③有使用糖皮质激素的禁忌证；④合并细菌、病毒、衣原体等其他病原体感染；⑤病程中需要用激素或其他免疫调节剂者。其中CPIS≥6分为CPIS高分组（21例），CPIS＜6分为CPIS低分组（44例）。选择年龄相匹配在我院体检的健康儿童30例为正常对照组，均无近期感染，无个人及家族过敏及其他变态反应性疾患史，其中男性17例，女性13例，年龄3～7岁，平均（5.1±1.7）岁。CPIS高分组、低分组及正常对照组3组间性别、年龄差异无统计学意义。

1.2 治疗原则：常规抗感染，吸痰叩背、脏器功能支持、雾化吸入、营养代谢支持及维持水、电解质、酸碱平衡等对症支持治疗，避免使用皮质激素等影响免疫功能的药物。

1.3 检测方法：上述重症MPP患儿入院后24h内抽取外周静脉血，应用流式细胞仪测定CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率。静脉血用乙二胺四乙酸抗凝。取实验管加入 10μL异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）标记小鼠抗人CD14抗体、10μL LPE标记小鼠抗人HLA-DR抗体。对照管加入等体积FITC、PE标记同型小鼠IgG（FITC标记小鼠抗人CD14抗体、PE标记小鼠抗人HLA-DR抗体及相应的同型小鼠免疫球蛋白均为美国BeckmanCoulter公司产品）。再向试管加50μL抗凝静脉血，混匀，室温下避光孵育15min，应用Coulter Q-PREP溶血仪溶血后，避光储存待测。检验标本前应用Coulter公司标准液校准流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司Coulter EPICSXL型）使流量系数（volume cofficient，CV）值在2%以内。检测时每管收集100 000个细胞，分别记录CD14+单核细胞中HLA-DR的阳性率。与此同时，计算出并记录当天的CPIS。

1.4 统计学方法：应用SPSS11.5软件进行数据处理。计量资料以±s表示，各指标变化的组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

入院当天CPIS高分组与低分组CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率均低于正常对照组，且CPIS高分组低于低分组（P＜0.05）。治疗后，CPIS高分组和低分组CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率均升高，与治疗前比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 重症MPP患儿CD14+单核细胞HLA-DR表达变化Table 1 PeriPheral blood CD14+mononuclera cells HLA-DR exPression in severe MPP children（±s，%）

表1 重症MPP患儿CD14+单核细胞HLA-DR表达变化Table 1 PeriPheral blood CD14+mononuclera cells HLA-DR exPression in severe MPP children（±s，%）

*P＜0.01 vs normal control group #P＜0.01 vs CPIS high group△P＜0.01 vs before treatment by q testHLA-DR：human leukocyte antigen DR；CPIS：clinical pulmonary infection score

HLA-DR Before treatment Recovery phase CPIS high 21 35.09±8.97* 68.20±6.03 Groups n△CPIS low 44 52.42±9.67*# 68.89±11.51△Normal control 30 75.13±11.43 75.13±11.43 F＜0.01 ＜0.05 101.20 3.85 P

3 讨 论

MPP是儿童的常见病和多发病，重症MPP表现为起病急，以剧烈咳嗽、气喘起病，并很快出现发热和呼吸困难，肺外并发症多见，肺部病变严重，可合并肺脓肿、大量胸腔积液、坏死性肺炎以及闭塞性支气管炎或闭塞性毛细支气管炎等［5］。迄今MPP发病机制还不十分清楚。1996年Bone等［6］针对感染或创伤时导致机体免疫功能的内源性抗炎反应，提出了代偿性抗炎症反应综合征。重症MPP可能并不像以往所认为的是“过度炎症反应”，更多的可能是由于“过度抑制”导致机体“免疫系统发生故障”，不能清除病原体所致［7］。

单核细胞作为机体重要的免疫细胞之一，参与其中每个过程，有着不可或缺的作用。它的功能变化在一定程度上反映机体的免疫功能状态。CD14+单核细胞HLA-DR是单核吞噬细胞表面的抗原表达，其功能是把经单核吞噬细胞吞噬并处理后的抗原提呈给T辅助细胞，继而激活包括T细胞、B细胞和吞噬细胞在内的所有免疫细胞，所以，足够的HLA-DR表达对于特异性免疫和非特异性免疫功能都十分重要。

当前，检测免疫功能的方法很多，但能够作为定量的诊断免疫抑制的检查，目前首推CD14+单核细胞的HLA-DR。Venet等［8］证明，以CD14+单核细胞HLA-DR＜30%为阈值能够可靠地筛选出脓毒症免疫抑制的患者。他们发现，烧伤后发生脓毒症患者HLA-DR＜30%或持续降低超过5d患者病死率及脓毒血症发生率远高于对照组。本研究结果显示，重症 MPP患儿的外周血 CD14+单核细胞的HLA-DR表达率明显低于正常对照组，临床表现为病情重或出现严重肺外并发症，或单用大环内酯类抗生素治疗1周无反应等。提示CD14+单核细胞HLA-DR表达持续低下的患儿处于免疫抑制状态，易发生持续且严重的感染。

CPIS最早由Pugin提出，它将胸部X线片以及实验室检验结果和临床相结合，用于评估肺部感染严重程度，分值越高提示肺部感染越重［9］。本研究结果显示，重症 MPP中外周血 CD14+单核细胞HLA-DR表达水平可反映重症MPP患者肺部感染程度，CD14+单核细胞HLA-DR表达水平越低，肺部感染程度越重。与Gogos等［10］的研究结果一致。

本研究结果显示，治疗后患儿CD14+单核细胞HLA-DR表达百分率均明显升高，与治疗前相比差异有统计学意义（P＜0.01）。与文献报道一致［11］。说明CD14+单核细胞HLA-DR表达可用于判断MPP患儿病情的严重程度，并在重症MPP的发生发展和疾病转归中起重要作用。

［1］ CHUNG HL，SHIN JY，JU M，et al.Decrased interleukin-18 response in asthmatic children with severe mycoplasma pneumoniae pneumonia［J］.Cytokine，2011，54（2）：218-221.

［2］ POSCHKE I，MOUGIAKAKOS D，HANSSON J，et al.Immature immunosuppressive CD14+HLA-DR-/low cells in melanoma patients are Stat3hi and overexpress CD80，CD83，and DC-sign［J］.Cancer Res，2010，70（11）：4335-4345.

［3］ 胡亚美，江载芳.诸福棠实用儿科学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1204-1205.

［4］ 赵顺英，马云，张桂芳，等.儿童重症肺炎支原体肺炎11例临床分析［J］.中国实用儿科杂志，2003，7（18）：414-416.

［5］ YOUN YS，LEE KY.Mycoplasma pneumoniae pneumonia in childeren［J］.Korean J Pediatr，2012，55（2）：42-47.

［6］ BONE RC.Immunologic dissonance：a continuing evolution in our understanding of the systemic inflammatory response syndrome（SIRS）and the multiple organ dysfunction syndrome（MODS）［J］.Ann Intern Med，1996，125（8）：680-687.

［7］ MUNETA Y，MINAGAWA Y，SHIMOJI Y，et al.Immune response of gnotobiotic piglets against Mycoplasma hyopneumoniae［J］.J Vet Med Sci，2008，70（10）：1065-1070.

［8］ VENET F，TISSOT S，DEBARD AL，et al.Decreased monocyte human leukocyte antigen-Drexpression after severe burn injury：Correlation with severity and secondary septic shock［J］.Crit Care Med，2007，35（8）：1910-1917.

［9］ BHADADE RR，DE SOUZA RA，HARDE MJ，et al.Clinical characteristices and outcomes of patients with acute lung injury and ARDS［J］.J Postgrad Med，2011，57（4）：286-290.

［10］ GOGOS C，KOTSAKI A，PELEKANOU A，et al.Early alterations of the innate and adaptive statuses in sepsis according to the type of underlying infection［J］.Crit Care，2010，14（3）：R96.

［11］ HUANG SW，CHEN J，OUYANG B，et al.Immunotherapy improves immune homeostasis and increases survial rate of septic patients［J］.Chin J Traumatol，2009，12（6）：344-349.

（本文编辑：刘斯静）

OBSERVATION OF THE EXPRESSION OF CD14+MONOCYTE HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN DR IN SEVERE MYCOPLASMA PNEUMONIAE PNEUMONIA

SUN Haiying1，SHAO Xiaoli2*，LIU Shumei2，GUO Ping2，ZHOU Guozhong3，CHEN Yi2
（1.Department of Pediatrics，Shaoxing County Maternity and Child Care Centers，Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China；2.Department of Pediatrics，Shaoxing People′s Hospital&Zhejiang University Shaoxing Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China；3.Department of Medical Molecular Biology，Shaoxing People′s Hospital&Zhejiang University Shaoxing Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

ObjectiveTo monitor the change of the expression of CD14+monocyte human leukocyte antigen DR（HLA-DR）in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia children and evaluate their immunological condition，relationship between severity of illness，prognosis and CD14+monocyte HLA-DR.MethodsSixth-five cases of severe mycoplasma pneumoniae pneumonia children were collected and divided into the following groups，total 44 cases with clinical pulmonary infection score（CPIS）≥6 were CPIS high grade；total 21 cases with CPIS＜6 were CPIS low grade，and 30 normal cases were selected as control group.The levels of venous blood CD14+monocyte HLA-DR were detected at the first day after admission and discharge.The CPIS grade of the patients was recorded at the first day after admission.ResultsThe levels of CD14+monocyte HLA-DR in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia were obviously lower no matter in CPIS high grade and in CPIS low grade than normal cases with statistically significant differences（P＜0.01），and the level in CPIS high grade waslower than the CPIS low grade（P＜0.01）.The levels of CD14+monocyte HLA-DR in the 2 groups were increased significantly after treatment（P＜0.01）.ConclusionPersistent low level of the expression of CD14+monocyte HLA-DR in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia indicate the patients are in the states of immunosuppression.Detection of the expression of CD14+monocyte HLADR can be used to evaluate the severity of disease and predict prognosis in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia.

pneumonia，mycoplasma；antigens，CD14；child

R563.1

A

1007-3205（2012）09-1021-04

2012-01-30；

2012-04-28

孙海英（1977-），女，浙江绍兴人，浙江省绍兴县妇幼保健所主治医师，医学学士，从事小儿呼吸内科疾病诊治研究。

*通讯作者。E-mail：nuannuan717@126.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.011