三峡库区规模猪场仔猪黄痢病原体分离鉴定及药敏试验

王敬 廖勤丰 吴有华 程文超 向邦全 李文娟

摘要：从三峡库区规模化猪场采集典型黃痢症状的病猪粪便１２０份，进行细菌培养，从中分离纯化获得９０株致病性大肠杆菌菌株。对９０株菌株进行了３０种抗生素敏感性试验，结果表明，氟苯尼考、头孢噻肟／棒酸、红霉素、丁胺卡那霉素等１１种抗生素药物为高敏；头孢氨噻肟、磺胺异恶唑、四环素等９种抗生素药物为中敏；恩诺沙星、青霉素、阿莫西林等１０种抗生素药物为耐药。

关键词：猪大肠杆菌；细菌分离纯化；生化鉴定；药敏试验

中图分类号：Ｓ８５８．２８文献标识码：A文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０12）07-0010-02

仔猪黄痢是由致病性大肠杆菌引起初生仔猪发生的一种急性、高度致死性肠道传染病［１］，临床上以剧烈腹泻、排黄色稀粪为主要特征，多见于１～３日龄的仔猪，７日龄以上的仔猪很少发病，没有明显的季节性，规模化养猪场发病较多。该病的发病率高，病死率可达７０％～９０％。仔猪黄痢目前仍然是西南地区养猪场危害严重的主要疾病之一，给养猪业造成了一定的经济损失。因此，要控制仔猪黄痢病在当地猪群中的传播、减少损失，及时进行病原分离鉴定及药物敏感性试验，筛选出防治猪大肠杆菌病的有效药物，对临床合理选择用药、有效防治猪大肠杆菌病就显得尤为重要。

１材料与方法

１．１试剂

麦康凯培养基、ＭＨ琼脂培养基、血琼脂培养基、生化鉴定管、甲基红（ＭＲ）试验试剂、伏普（ＶＰ）试验用甲液和乙液、靛基质（吲哚试验）试验试剂、缓冲葡萄糖蛋白胨水、蛋白胨水、抗菌药物药敏纸片购于杭州微生物制剂有限公司。

１．２培养基配制

麦康凯培养基、肉汤培养基、蛋白胨水、普通琼脂培养基按常规方法配制［２－４］。

１．３病原分离

从三峡库区内云阳、奉节、万州、梁平、忠县、开县、巫山等区县规模化养猪场采集仔猪黄痢直肠拭子１２０份。将病料接种于麦康凯琼脂平板培养基上，置于３７℃培养箱中培养１８～２４ｈ，观察菌落生长情况，挑取典型菌落进行染色、镜检，然后进行纯培养并做生化鉴定。

１．４药敏试验

按照美国临床实验室标准委员会ＣＬＳＩ［５］推荐的Ｋｉｒｂｙ－Ｂａｕｅｒ法进行。

２结果与分析

２．１细菌纯化、培养特性及形态结构观察结果

将收集的１２０份病料在麦康凯琼脂平板培养基上培养，其菌落为中等大小、红色圆形隆起、光滑、湿润、边缘整齐；在普通琼脂培养基上出现灰白色、圆形、稍隆起、光滑、湿润、边缘整齐的中等大小菌落。挑取线上的单个菌落涂片，革兰氏染色镜检为阴性、中等大小的杆菌，初步判断为大肠杆菌。

２．２生化试验鉴定结果

对分离出的９０株菌株进行生化鉴定，结果分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇；吲哚试验阳性，ＭＲ试验阳性；Ｈ２Ｓ、ＶＰ、枸橼酸盐试验阴性（表1）。根据生化试验鉴定结果，结合菌落形态特征，确定该致病菌为大肠杆菌［６］。

２．３药敏试验结果

试验选用氟苯尼考、头孢噻肟／棒酸、庆大霉素、丁胺卡那霉素、头孢曲松钠、先锋必素、四环素、氟哌酸等３０种抗生素药敏纸片对大肠杆菌进行了药敏试验，结果表明，氟苯尼考、头孢噻肟／棒酸、红霉素、丁胺卡那霉素等１１种抗生素药物为高敏；头孢氨噻肟、磺胺异恶唑、四环素等９种抗生素药物为中敏；恩诺沙星、青霉素、阿莫西林等１０种抗生素药物为耐药（表２）。

３小结与讨论

仔猪黄痢目前仍然是西南地区养猪场危害严重的主要疾病之一，给养猪业造成了较大的经济损失。由于不同地区的仔猪黄痢的致病性、抗药性和抗原性不同［７］，及时进行病原分离鉴定及药物敏感性试验，筛选出高敏感性药物和制备自家疫苗进行针对性治疗尤为重要。

此次从三峡库区规模化猪场采集典型黄痢症状的病猪粪便进行细菌分离培养，从中分离纯化获得９０株疑似大肠杆菌的菌株。通过菌落形态学观察、生化试验确定该病原菌为致病性大肠杆菌。药敏试验发现该菌株对常用抗生素都有不同程度的耐药性，其对阿莫西林、洁霉素、先锋霉素ＶＩ、氟哌酸、氨苄青霉素、强力霉素、青霉素、丙氟哌酸、复方新诺明、恩诺沙星等１０种药物耐药最为普遍。通过调查发现，由于青霉素类抗菌药物价格低廉、抗菌谱广，猪场几乎不做任何药敏试验，长期大量使用这些药物进行治疗和预防，从而造成了对这些药物的广泛耐药，这与药敏试验结果相符，也与肖国生等［８］对三峡库区猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验结果相似。分离菌对氟苯尼考、卡那霉素、红霉素、头孢噻肟／棒酸、丁胺卡那霉素、头孢曲松钠、庆大霉素、乙基西梭霉素、先锋必素、痢特灵、氨苄青/舒巴坦等11种药物有较高的敏感性，其中痢特灵属国家禁用药物，而头孢噻肟／棒酸、头孢曲松钠、氟苯尼考这几种药物经调查发现因成本稍高而很少被养猪场使用。

参考文献：

［１］王红宁，刘书亮．规模化猪场仔猪黄白痢的防治研究［Ｊ］．中国预防兽医学报，１９９９，２１（４）：２６４－２６７．

［２］马兴树，郭玉璞．禽传染病实验诊断技术［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００６．

［３］郭万柱，吴彤，陈瑶先．动物微生物学［Ｍ］．成都：四川科学技术出版社，１９９７．

［４］白文彬，于康震，等．动物传染病诊断学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００２．

［５］ＣＬＳＩＤｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ３１－Ｓ１，Ｃｌｉｎｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［Ｓ］．

［６］布坎南Ｒ Ｅ，吉本斯Ｎ Ｅ．伯杰氏细菌鉴定手册（第八版）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８４．３８５-３８９．

［７］张珍珍，吴俊伟，唐建华，等．重庆市猪源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性监测［Ｊ］．中国兽医杂志，２００９，45（４）：85-87.

［８］肖国生，况守龙，胡廷章，等．三峡库区猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验［Ｊ］．安徽农业科技，２００８，３６（１）：２０７－２０９．