显色培养基在蜡样芽孢杆菌与志贺氏菌快速检测中的应用

胡杨峰 王杰伟

蜡样芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，在自然界中分布极广，其中一些菌株极易污染食品、空气和水等，从而引起食物中毒。志贺氏菌又称痢疾杆菌，引起一种以腹泻为主要症状的常见肠道传染病——细菌性痢疾。该菌最常见的感染途径是人摄入污染的食物或水而传播。

显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的种属特异性酶与相应显色底物反应使目标菌显色的新型培养基，通过观察平板上的菌落颜色可对菌种做出初步判断。显色培养基作为一种微生物快速检测技术已经得到了广泛的认可，并大量应用于各种检验标准中。

本文通过21株标准菌株比对试验及50份自然样品的比对试验，将陆桥蜡样芽孢杆菌显色培养基和志贺氏菌显色培养基分别与CHROMagar和R&F产品进行了特异性和选择性的比对。

实验方法

1.显色培养基的特异性试验

将-80℃甘油保存的标准菌株接种至脑心浸液培养基中，36±1℃培养18～24h复苏，分别挑取复苏的新鲜标准菌菌液，划线接种到制备好的陆桥蜡样芽孢杆菌显色平板，陆桥志贺氏菌显色平板，CHROMagar蜡样芽孢杆菌显色平板和R&F志贺氏菌显色平板上，置36±1℃培养18～24h，观察不同菌株在显色培养基上的颜色特征，比较4种显色培养基对各自目标菌的特异性反应。

2.实际样品检测

蜡样芽孢杆菌按照GB4789.14（征求意见稿）中的检验程序进行样品制备与稀释；志贺氏菌按照GB4789.5-2012中的检验程序进行样品制备和增菌培养，取菌液分别接种于对应的显色平板上，挑取可疑蜡样芽孢杆菌和志贺氏菌菌落进行后续生化试验。本文比较了几种选择性分离培养基的特异性和检出率。

实验结果

1.显色培养基的特异性试验结果

21株标准菌株包括3株蜡样芽孢杆菌，5株志贺氏菌，其余菌株为实际检测中常见的干扰菌。图1为陆桥显色培养基对目标菌及部分干扰菌的特异性分离效果。在陆桥蜡样芽孢杆菌显色平板上，蜡样芽孢杆菌菌落为蓝绿色，边缘扩散生长，菌落周围有白色晕圈；其他芽孢杆菌菌落为蓝绿色无晕圈或受抑制；革兰氏阴性菌基本不生长。此外，由于生长状况相似，苏云金芽孢杆菌是主要干扰菌，在陆桥蜡样芽孢杆菌显色平板上，苏云金芽孢杆菌生长受到部分抑制，菌落较小。在陆桥志贺氏菌显色平板上，志贺氏菌为白色、清晰的菌落，周围培养基紫红色；沙门氏菌和大肠埃希氏菌为黄色菌落，周围培养基变黄；产气肠杆菌为蓝绿色菌落，周围培养基变黄；革兰氏阳性菌基本被抑制。陆桥显色培养基与国外的产品相比，对于21株标准菌的检测特异性一致。

2.实际样品检测

实际样品检测结果见表1，陆桥蜡样芽孢杆菌显色培养基和陆桥志贺氏菌显色培养基对目标菌的特异性较好(准确率分别达到87.5%和100%)，克服了传统培养基受非目标菌干扰大的缺点，在准确率与检出率上与国外产品无差别。

结论

本研究的结果表明，陆桥公司自主研发的陆桥蜡样芽孢杆菌显色培养基与陆桥志贺氏菌显色培养基与国外产品特异性一致。在实际样品检测中，陆桥蜡样芽孢杆菌显色培养基与陆桥志贺氏菌显色培养基对50份样品均体现出了较高的选择特异性，能使目标菌与非目标菌产生明显的颜色及形态差异，从而实现选择性分离的目的,克服了传统培养基受非目标菌干扰较大的缺点，同时准确率较高，大大减少了后期进一步生化鉴定的工作量，提高了检测效率。与国外的同类产品相比，陆桥显色培养基无论在特异性，还是检出率上几乎没有任何区别，可以作为常规的选择性分离培养基广泛应用。