高效液相色谱法测定格列齐特缓释片有关物质和含量探讨

北京万生药业有限责任公司（101113）赵建峰

格列齐特缓释片为第二代酰脲类降糖药，主要用于治疗II型糖尿病。质量标准（国家食品药品监督管理局标准YBH18762006)中有关物质的HPLC条件下，部分杂质不能有效分离，比如《中国药典2010年版（二部）》格列齐特原料中控制的1-（3-氮杂环〔3.3.0〕辛基）-3-邻甲苯磺酰脲（杂质Ⅰ）[1]。

1 仪器与试药

安捷伦1200高效液相色谱仪及其色谱工作站（安捷伦公司）；1-（3-氮杂环〔3.3.0〕辛基）-3-邻甲苯磺酰脲（杂质Ⅰ）对照品(中国药品生物制品检定所，批号：101191-201101)；格列齐特对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100269-200603)；格列齐特缓释片（北京万生药业有限责任公司，规格：30mg/片）；乙腈(色谱纯)；其余试剂均为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶，4.6×250mm（COSMOSIL）；流动相：水-乙腈-三乙胺-三氟乙酸（60：40：0.1：0.1）；流速：1.0ml/min；检测波长：235nm；进样量20μl。系统适用性试验，理论塔板数按格列齐特峰计算不低于3000，格列齐特峰和杂质Ⅰ峰的分离度应大于1.8。

3 有关物质研究

3.1 实验方法 取本品20片，研细，精密称取适量（约相当于格列齐特50mg），加乙腈约20ml使格列齐特溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用40%乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液 20μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的15%；再精密量取供试品溶液、对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。

3.2 干扰实验 按处方比例取辅料适量，按照供试品溶液的制备方法制成一定浓度的溶液，再按色谱条件进样，同样制备空白溶液。结果在格列齐特对照品相同保留时间处未见色谱峰，证明辅料对格列齐特的测定无干扰。

3.3 溶液稳定性考察 按要求配制供试液和对照液，于0、1、2、3、4时间分别注入液相色谱仪，证明本品溶液放置2h，有关物质明显增加，故本品应临用新配。

3.4 专属性考察 高温破坏试验（120℃放置2小时），光照破坏试验（4500lx放置10天），强酸破坏试验（加1mol/L HCl 溶液5ml，于60℃水浴放置2小时），强碱破坏试验（加1mol/L NaOH 溶液5ml，于60℃水浴放置2小时）和氧化破坏试验（加6%双氧水溶液5ml，于60℃水浴放置1小时），上述条件下均有新杂质产生，总杂质明显增大，主峰与杂质峰能够完全分离。

4 含量测定研究

4.1 标准曲线 精密称量格列齐特对照品50.08mg，置100ml量瓶中，用40ml乙腈溶解，用水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1、2、4、6、8ml置10ml量瓶中，用40%乙腈稀释至刻度，摇匀。分别精密量取各20 ul注入液相色谱仪，记录色谱图。根据浓度与格列齐特峰面积绘制标准曲线，并求得线性回归方程：A=30256C+5526.6，r=0.999（n=5)。可见格列齐特浓度在0.05008～0.40064g／ml之间呈良好的线性关系。

4.2 回收率实验 按处方量称取辅料，另取格列齐特对照品适量（约为8、10和12mg）各3份，置50ml量瓶中，三份均以按主药为10mg处方加入辅料，加20ml乙腈溶解，用水稀释至刻度摇匀，滤过，做为供试品溶液。按色谱条件进样，并按外标法以峰面积计算回收率，结果平均回收率为99.6%，RSD为0.86%(n=9)。

4.3 精密度试验 取格列齐特缓释片一批（批号：20110228），于同一日内及不同日内分别按上述方法测定含量5次，日内格列齐特的平均含量为99.5%，RSD为0.32%；日间格列齐特的平均含量为99.3%，RSD值为0.76%。