通络益气汤和曲马多对糖尿病痛敏大鼠行为学的影响

高 涛，耿立成，李 丽，王 媛

通络益气汤和曲马多对糖尿病痛敏大鼠行为学的影响

高 涛，耿立成，李 丽，王 媛

目的：评价通络益气汤和曲马多对糖尿病痛敏大鼠的疗效。方法：腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，4周后筛选痛阈降低的大鼠随机分为对照组、中药组和联合组，分别给于生理盐水10 mL/(kg·d)、通络益气汤10 mL/(kg·d)、通络益气汤10 mL/(kg·d)和曲马多0.8 mg/kg灌胃。观察治疗6周内大鼠血糖、体重及痛觉行为学指标的变化。结果：对照组大鼠的体重与血糖与中药组、联合组比较有明显的差异（P＜0.01）；与对照组比较，在灌胃2周后中药组和联合组的痛阈值显著提高（P＜0.01）；联合组大鼠的各种指标优于单纯中药组（P＜0.05）。结论：通络益气汤能够明显改善糖尿病大鼠的血糖、体重，联合应用曲马多镇痛疗效更佳。

通络益气汤；曲马多；糖尿病；神经病理性疼痛；大鼠

周围神经病理性疼痛（diabetic peripheral neuropathy pain,DPNP）是糖尿病最常见的慢性并发症之一，严重影响患者的生存质量，是目前疼痛治疗领域的难题。中医认为，DPNP属于络病范畴，络脉瘀阻是病机，多采用“络以通为用”的治疗原则。本研究采用通络益气方剂联合曲马多的方法，观察糖尿病痛觉过敏大鼠疼痛行为学的变化，评估镇痛疗效。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康清洁级雄性Wister大鼠8～9周龄80只，体质量（116±8）g,由天津市放射研究所实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK(津)2005-0001。

1.1.2 药物 通络益气汤：黄芪30 g，黄精20 g，葛根18 g，锁阳10 g，钻地风12 g，丹参20 g，鸡血藤30 g，制马钱子1 g。减压浓缩至浓度为含生药1 g/mL液体。由天津市中医药研究所制剂室按水煎醇沉工艺制备成煎剂浓缩，真空灌装后4℃保存。曲马多由德国格兰泰有限公司生产，产品批号：567K。

1.1.3 试剂及仪器 链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）美国Sigma公司产品。罗氏（Roche）血糖仪及罗氏罗康全活力型血糖试纸。鼠尾光照测痛仪（YLS-12A），电子压痛仪（YLS-3E）及智能热板仪（YLS-6B），均为山东省医学科学院设备站产品。

1.2 方法

1.2.1 模型制备 大鼠适应性喂养1周后禁食12 h。腹腔内注射55 mg/kg 1%链脲佐菌素溶液。3 d后动物血糖浓度大于16.7 mmol/L、尿糖为++++时，即成糖尿病鼠模型。我们采用智能热板实验、鼠尾光照实验和鼠尾压力实验，对糖尿病大鼠每周2次，连续4周监测其痛阈变化，发现糖尿病大鼠的痛阈与造模初期相比有显著性下降，疼痛阈值改变超过2倍标准差者，为痛敏组大鼠[1]。

1.2.2 分组与给药 50只糖尿病痛敏大鼠随机分为3组，对照组16只，生理盐水10 mL/(kg·d)灌胃；中药组18只，通络益气汤10 mL/(kg·d)灌胃；联合组16只，通络益气汤10 mL/(kg·d)灌胃，同时尾静脉注射曲马多0.8 mg/kg。造模成功后即开始给药，1次/d，连续6周。

1.2.3 观察指标 观察大鼠的毛色、精神状态、摄食、体质量、尿量及日常活动情况。治疗后1、2、4、6周用罗氏血糖仪测定鼠尾静脉血糖情况、体质量及采用鼠尾光照法，智能热板法及鼠尾压力实验评估大鼠痛觉行为学的变化。于灌胃后60 min每只大鼠实验3次，每次间隔15 min，取3次的平均值。

1.2.4 坐骨神经病理学检查 实验后将大鼠腹腔内注射水合氯醛2 mL，俯卧位固定，取右侧梨状肌下缘坐骨神经1 cm，置于固定液中，送至北京天坛医院电镜室。

1.3 统计学方法 所有数据应用spss 13.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用One-way ANOVA方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠血糖和体重比较 3组大鼠均出现多饮、多尿、多食，竖毛枯黄无光泽，蜷卧弓背，活动少，体重增长缓慢。与对照组比较，中药组、联合组在治疗第2周后血糖下降（P＜0.01）；体质量增加（P＜0.01）。见表1，表2。

表1 3种治疗方案对大鼠血糖的影响（mmol/L±s）

表1 3种治疗方案对大鼠血糖的影响（mmol/L±s）

注：与对照组相比，aP＜0.01

组别对照组中药组联合组n给药后16 18 16给药前25.2±3.4 24.8±3.2 25.2±3.3 1周27.4±5.7 26.8±3.6 26.7±4.1 2周26.7±3.6 22.5±4.1a22.5±3.7a4周28.6±3.3 24.7±3.3a25.0±3.1a6周32.3±3.1 24.0±4.6a24.6±4.2a

表2 3种治疗方案对大鼠体重的影响（g,±s）

表2 3种治疗方案对大鼠体重的影响（g,±s）

注：与对照组相比，aP＜0.01；与中药组相比，bP＜0.05

组别对照组中药组联合组n给药后16 18 16给药前175.62±11.4 178.30±9.18 177.20±8.67 1周202.50±9.26 196.41±9.77 198.22±12.12 2周218.37±8.65 225.50±9.34a227.45±9.21a4周233.62±8.04 249.00±9.18a250.63±7.12a6周255.50±6.4 271.50±7.34a280.42±6a、b

2.2 鼠尾光照实验 与对照组比较，中药组、联合组大鼠治疗后痛阈明显提高（P＜0.01）。与中药组比较，联合组在治疗第4周鼠后尾光照时间延长(P＜0.01)。见表3。

2.3 大鼠热板实验 与对照组比较，中药组、联合组大鼠治疗后痛阈明显提高，舔足时间延长（P＜0.01）。与中药组比较，联合组在治疗2周后大鼠舔足时间延长(P＜0.01)。见表4。

2.4 鼠尾压力实验 与对照组比较，中药组、联合组大鼠治疗后痛阈明显提高（P＜0.01）。与中药组比较，联合组在治疗后第1周后鼠尾压力时间延长(P＜0.01)。见表5。

2.5 坐骨神经形态学观察 3组大鼠发生痛觉过敏后大鼠坐骨神经部分髓鞘板层结构融合，模糊不清，有分层现象；线粒体大部分嵴膜融合、消失，微丝、微管数量显著减少。但中药组和联合组大鼠坐骨神经髓鞘的破坏程度轻于对照组。见图1。

3 讨论

DPNP发病机制至今尚未阐明，高血糖造成的微循环障碍可以引起血管内皮损伤，基底膜增厚，管腔狭窄，甚至神经纤维血流减少，神经缺血、缺氧，继而出现神经纤维轴突变性，脱髓鞘改变。DPNP常表现为自发性疼痛，感觉异常性疼痛和痛觉过敏，严重影响患者的生存质量。往往单一的镇痛药物不能缓解疼痛，是目前疼痛治疗上的难题之一。

表3 3组大鼠鼠尾光照实验结果比较（s,±s）

表3 3组大鼠鼠尾光照实验结果比较（s,±s）

注：与对照组相比，aP＜0.01；与中药组相比，bP＜0.05

组别对照组中药组联合组n给药后给药前2.71±0.56 2.62±0.54 2.68±0.60 16 18 16 1周2.73±0.48 2.81±0.56 2.72±0.54 2周2.53±0.30 2.74±0.40 2.87±0.30a4周2.36±0.31 2.87±0.35a3.18±0.36a、b6周2.22±0.27 3.13±0.39 3.28±0.37a

表4 3组大鼠热板实验结果的比较（s,±s）

表4 3组大鼠热板实验结果的比较（s,±s）

注：与对照组相比，aP＜0.01；与中药组相比，bP＜0.05

组别对照组中药组联合组n给药后给药前24.9±4.3 24.3±5.3 25.1±6.6 16 18 16 1周23.6±3.4 29.5±4.6a32.3±6.7a2周22.6±2.5 34.5±5.9a39.3±4.2a、b 4周18.2±3.7 33.2±4.6a39.2±4.0a、b 6周16.5±3.2 30.9±4.8a41.7±4.9a、b

表5 3组大鼠鼠尾压力实验结果比较（g,±s）

表5 3组大鼠鼠尾压力实验结果比较（g,±s）

注：与对照组相比，aP＜0.01；与中药组相比，bP＜0.05

组别对照组中药组联合组n给药后给药前105.0±9.4 116.8±13.9 107.6±13.3 16 18 16 1周114.4±9.9 130.3±8.7a147.3±13.7a、b2周121.9±8.7 135.3±11.2a159.8±14.6a、b4周129.4±7.4 142.5±11.7a164.8±11.8a、b6周133.2±7.6 161.9±15.8a189.2±15.7a、b

图1 各组大鼠坐骨神经病理学变化比较（电子显微镜×8000）

中医学认为，DPNP属于“痹症”、“萎症”、“脉痹”、“血痹”、“麻木”、“不仁”、“痿襞”等，因痹于经脉而成瘀，瘀阻四肢脉络，肌肤失荣，而出现肢体麻木、疼痛等症，与“久、瘀、顽、杂”的中医络病特点相符。目前中医络病理论提出“瘀损伤络”的机制，日益受到关注。通过辨证施治，从“通络”入手，以虫类药、藤类药和辛味药等活血化瘀通络治疗DPNP取得共识[2]。通络药具有显著的抗凝、溶栓、扩血管、降低血小板黏滞性及纤维蛋白原、改善血液流变性及微循环、软化血管等作用，可改善糖尿病微血管病变，增加四肢周围神经的供血和营养，促进损伤的周围神经的恢复，提高运动神经的传导速度[3]。曾雨辉等[4]报导，使用活血通脉汤后DPNP患者肌电图明显改善。叶春玲等[5]发现，消渴通络颗粒可降低DPNP大鼠坐骨神经AR活性，升高NA-K-ATP酶活性，改善传导，提高热痛阈，同时减轻髓鞘的水肿，改善神经病变。

通络益气汤由黄芪、黄精、葛根、锁阳、钻地风、丹参、鸡血藤、制马钱子等药物组成，其中黄芪多糖具有降血糖降血脂的作用，参芪复方能够抑制GK大鼠胰岛细胞凋亡[6]；黄精甘润滋补，补脾润肺；葛根生发脾胃清阳之气而生精液；锁阳补肾助阳，润燥养筋，善治肾虚筋骨痿弱；钻地风强筋骨，通筋络，善治筋肌痿软麻木；鸡血藤养血活血通络；制马钱子通筋络，至疼痛。诸药合用，振奋元气，升发津液，通经活络，可治气虚津亏，脉络瘀阻之神经病变。本实验结果显示，中药灌胃大鼠的血糖和体重与对照组相比明显改善，痛阈明显提高，坐骨神经的髓鞘板层结构的损伤程度明显减轻。说明通络益气汤注重整体调节，具有降低血糖，改善营养状况，改善神经传导功能的作用，纠正糖尿病气阴不足，痰浊闭阻，瘀血阻滞，络脉不通所致的痛敏状态，具有多靶点多途径的作用优势。

我们在结果中发现，联合组在治疗后1～2周，可以显著提高糖尿病痛敏大鼠的机械痛阈和热痛阈。这是因为曲马多选择性激动阿片μ受体也与κ和δ受体结合，并影响中枢神经递质抑制去甲肾上腺素重吸收和5-羟色胺的释放，两种机制协同作用显著增加糖尿病痛敏组大鼠的痛阈。Freeman R等[7]报道，曲马多可以明显降低糖尿病神经病变患者的疼痛强度、改善睡眠和情绪,提高生活质量。传统药物(如甲钴胺、前列地尔、阿米替林)疗效不佳者,曲马多可以获得满意疗效[8-9]。

本研究证实，通络益气汤可以降低糖尿病痛敏大鼠血糖，增加体重，改善痛敏状态，联合应用曲马多效果更佳[10]。中西医结合的治疗方法，为改善糖尿病神经病理性疼痛开拓了新的临床思路。

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[3]王红梅，王琳樊，李松岩.降糖通络汤治疗糖尿病周围神经病变临床观察[J].中医临床研究，2011,3(1):102-103.

[4]曾雨辉.活血通脉汤治疗糖尿病周围神经病变40例临床观察[J].中医药导报，2008,14(7):35-36.

[5]叶春玲，魏明，严超群.消渴通络颗粒对糖尿病大鼠周围神经病变的作用研究[J].中国新药杂志，2009,18（23）：2245-2249.

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（收稿：2011-12-20 修回：2012-06-16）

（责任编辑 刘洪斌）

The Effect of Tongluo Yiqi Decoction Combined with Tramadol on the Behavior in Mouse Model of Dia⁃betic Peripheral Neuropathy Pain

GAO Tao,GENG Li-cheng,LI Li,et al. Tianjin People Hospital,Tianjin(300121)China.

Objective To explore the effect of tongluoyiqi decoction combined with tramadol on mouse mod⁃el of diabetic peripheral neuropathy pain. Methods Diabetic rats were induced by intra-peritoneal injection of streptozotocin.After 4 weeks the rats with lower pain threshold than normal were randomly divided into 3 groups:Group I was given physiological saline 10 mL/kg/d,Group II was given tongluoyiqi decoction 10 mL/kg/d and Group III was given tongluoyiqi decoction 10 mL/kg/d and tramadol by intra-gastric administration 0.8 mL/ kg respectively.Plasma glucose,weight and pain threshold detected by pain behavior test were measured in six weeks. Results (1)The plasma glucose was lower but the weight increased more in group II and III than in group I.(2)The withdrawal latency was significantly increased in both treated groups.(3)The times of hind paw licking reflex was increased in hotplate test compared with control group.All the differences were significant. Conclusion The Effect of Tongluo Yiqi Decoction Combined with Tramadol on the Behavior in Mouse Model of Diabetic Peripheral Neuropathy Pain.administration 2 weeks.Tongluoyiqi decoction can decreased the hyper⁃algesia in Diabetic rats and improve the condition of nutrition.It combined with tramadol could relieve the dia⁃betic peripheral neuropathy pain.

Tongluo yiqi decotion；tramadol；diabetes mellitus；diabetic peripheral neuropathy pain；rats

Q95-33；R587.1

A

1007-6948(2012)05-0480-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2012.05.014

天津市人民医院麻醉科（天津 300121）

高 涛，E-mail:gaotao2755@163.com