蓝莓的组织培养及快速繁殖

姜冬，张利萍

（辽宁省森林经营研究所，辽宁丹东 118002）

蓝莓（Blueberry）又名越橘，属于杜鹃花科越桔属（Vaccinium），原产北美，多年生落叶或常绿果树，分为高丛蓝莓、矮丛蓝莓、半高丛蓝莓和兔眼蓝莓。果实深蓝色，甜酸适度，富含氨基酸，抗氧化能力列所有果品之首，堪称“世界水果之王”，被国际粮农组织列为五大健康食品之一［1］。

目前，国际市场上蓝莓果实售价昂贵，处于供不应求的状态［3］。全世界有20多个国家和地区开始蓝莓产业化栽培。辽宁丹东地区起步较晚，于1997年开始引种试栽，当时引进蓝莓品种约有50多个，主要来源美国、加拿大，现已筛选出适合本地区栽培的品种有5个。由于确定主栽品种之初数量有限，我们用组织培养技术加快繁殖，为主栽品种的推广提供一条有效、快捷的途径。

1 试验材料与方法

1.1 材料来源

选取4年生蓝莓半木质化嫩茎、已木质化的老茎和冬季休眠枝水培芽作为试材，于2007年分3次采自辽宁省森林经营研究所苗圃基地，组培试验于2007年在本所组培中心实验室进行。

1.2 试验方法

1.2.1 试验程序

外植体处理→接种→增殖培养→生根培养→移栽。

1.2.2 外植体处理

切取3cm带顶芽或腋芽的幼嫩茎段去叶片留叶柄→流水冲洗60min→75%酒精浸泡30s→0.1%升汞溶液消毒3～7min→无菌水冲洗4～5次→用滤纸吸去水分→将茎段切成1～2个腋芽的小段。

1.2.3 培养基制作

以MS为基本培养基，按激素6－BA、NAA、ZT含量的不同，诱导增殖培养基设4系列处理（培养基1～4号），生根培养基设2系列处理（培养基5～6号），培养基配方见表1。

表1 增殖培养基配方 mg·L－1

表1中培养基蔗糖含量：分化和继代培养基为30g／L，生根培养基为25g／L。琼脂8.5g／L，p H值5.6～5.8，在115 MPa气压下灭菌20min。

1.2.4 培养条件

培养温度22～25℃，每天光照16h，光强2000 lx。

2 结果与分析

2.1 外植体诱导培养

接种在初代培养基上的外植体在接种4天后陆续出现污染，接种15天后污染基本结束；茎段基部膨大，叶腋处萌发出侧芽，生长状态随培养基不同而不同。

休眠枝的采集应在当年12月底至次年休眠芽萌动前为宜；水培时应将水温控制在20℃左右，每隔2～3天换水，并对枝条下部进行清洗修剪。芽长到2～3cm时就可以接种。对于工厂化育苗来说，年繁殖数达到百万株或者更多，就要求在各个季节和时间相互补充，才能不断满足生产，在用室外嫩茎和老茎做外植体时，应充分考虑污染因素，采取有效措施降低污染率。

2.2 外植体增殖培养

在培养基的选择上，我们曾试过MS、LS、N6、WPM等7种培养基，结果发现还是1／3MS培养效果最好，为此，我们选定1／3MS为试验的基本培养基。激素选择上，我们最初使用6－苄基腺嘌呤（6－BA）和糠基腺嘌呤（激动素KT），但是所示的几个常用浓度对蓝莓试管苗的增殖几乎无效，接种的外植体，有的长时间不生长，有的只长出愈伤组织，有的长出小叶逐渐色坏死。后来我们选用了价格很昂贵的玉米素6－（4羟基－3－甲基－2－反式－丁烯基氨基）嘌呤，试验使用浓度0.5～3.0mg／L。结果表明，玉米素浓度超过2.0mg／L，接种的外植体茎段萌芽迅速，但长势不正常，显示所用浓度偏高。因此玉米素浓度在1.0～2.0mg／L范围内都比较适合。

外植体培养20d左右，在A3、A4系列培养基中均有腋芽萌动并逐渐伸长生长，待组培苗长到4～5cm时，采用微枝扦插和丛芽增殖相结合的增殖方式，将长芽分切成带1～2个芽的茎段，基部丛芽剥成几块转入增殖培养基中进行继代培养，使其继续分化出芽。50 d左右腋芽基部又能形成丛生芽。组培苗在A3系列培养基中继代培养增殖分化的苗数量多且健壮，繁殖系数在8倍左右。

综上所述，用A3系列培养基中1／3MS＋BA1.5 mg／L＋NAA0.2 mg／L＋ZT1.5 mg／L进行增殖培养较为理想，一般在2个周期（40～50d）增值系数即能达到8倍以上。

2.3 生根培养

在无菌状态下，选择健壮的小苗切割成高2cm左右的茎段，转入不同生根培养基中进行生根培养，结果表明在1／4MS中的小苗生根率均明显优于全量MS培养基，所用激素以IBA 0.5 mg／L效果最好，生根率达100%且每株可生5～10条根；所需天数最少，根条数最多，并且根系生长情况最好，所以1／4MS＋IBA 0.5 mg／L培养基为最适生根培养基。

同时，在温室炼苗时，我们进行了瓶外生根试验，从常用生根药剂种选择吲哚丁酸和萘乙酸，用不同浓度浸根，处理后20天结果表明，NAA对蓝莓没有明显催根作用，而IBA5～10mg／L催根效果都很好，生根率高、发根多、根系长，20 mg／L则基部膨大，发根短，表明浓度偏高。

瓶外生根更适合于工厂化生产，可以简化程序和操作方法，显著提高工作效率，省去培养基和相应设备，降低成本，便于大量生产。在移栽作业中，我们还发现，可以将蓝莓组培苗切段，2芽一段扦插于腐苔藓中，控制好温度与湿度，生根与成活率很好，极大的增加了繁殖系数。

2.4 组培苗移栽

当苗根长到1～1.5cm时，打开瓶盖，取出小苗，洗净培养基，（幼枝上沾有培养基，常会引起幼枝发生腐烂，应注意避免）。用多菌灵500～800倍液浸泡30min左右，然后栽入0.1%高锰酸钾消毒过的苗床上。苗床基质分5个处理，分别为沙∶草炭土＝1∶1、沙∶蛭石＝1∶1、纯沙、纯蛭石、腐苔藓。试验结果表明，以腐苔藓为基质最好，成活率最高80%以上。草炭土和沙半量配置也不错，成活率50%以上。

苔藓用500倍多菌灵溶液浸泡捞出后稍沥干水分，铺到事先准备好的苗床上，压平压实，苔藓厚度5～7 cm。苗木移栽后，每天浇水一次，每周喷一次甲基托布津和营养液，每半月浇灌一次0.5%的FeSO4溶液，盖塑料拱棚，保温保湿，冬季温室内维持15～25℃，夏秋在露地搭荫棚遮挡直射阳光，棚温不超过28℃，7天后逐渐增加通风量，并逐渐减少浇水，1个月后移栽到营养钵或者直接移栽大田。移栽前在畦内撒少量草炭土，移栽后于生长季浇灌FeSO4溶液2～3次。移栽后当年生长量可达20～30cm，翌春可有部分植株开花结果。

3 结论

3.1 茎段、茎尖培养在A3系列培养基中的1／3MS＋BA1.5 mg／L＋NAA0.2 mg／L＋ZT1.5 mg／L上诱导增殖培养40～50d，繁殖系数8倍以上；

3.2 生根培养以A5系列培养基中的1／4MS＋IBA0.5 mg／L最好，生根率达100%且每株可生5～10条根；

3.3 移栽基质以腐苔藓为最好，成活率达80%以上。

4 讨论

蓝莓育苗可采用根蘖繁殖、根条繁殖、扦插繁殖［2－3］，但所需的繁殖材料增多，繁殖系数比较低，而组织培养能够迅速去除病毒和更新品种，加快繁殖速度，短时间内能迅速增加苗木数量，可以形成规模化生产，因而有更大的优势，所以引种初期一般采用组培技术进行蓝莓的生产。

图1 蓝莓在增殖培养基上的增殖情况

图2 蓝莓组培苗移栽入腐苔藓中锻炼

图3 蓝莓组培苗瓶外生根

图4 蓝莓组培苗温室锻炼

图5 蓝莓组培苗温室成活

图6 蓝莓组培苗移栽于大田第四年结果状况

对组织培养的蓝莓苗应用于生产，人们通常会怀疑：品种优良性状是否有变化，结果是否延迟，产量是否降低，据观察，由外植体诱导产生愈伤组织出苗，容易发生染色体变异，而由定芽发育成的幼枝变异少，是可以保持品种原有特性，用于生产性栽培的。因此，我们在繁育过程中通过激素调整试验，避免通过愈伤组织成苗。

蓝莓组培苗移栽后当年生长量可达20～30cm，翌春可有部分植株开花结果，品种不同有差异。盛果期在5年左右，其寿命为50年。丹东地区现有人工栽培蓝莓面积10～15hm2，主栽品种有蓝丰（高丛）、北陆（半高丛）、北蓝（半高丛）、北村（半高丛）、美登（矮丛）。其中前4个品种属鲜果销售优良品种，美登适合做加工型品种。露地栽培的蓝莓采果期在7月15日至8月15日，采收期可达1个月。温室栽培的蓝莓在5月20日结果。

［1］ 刘庆忠，赵红军.高灌蓝莓微体繁殖技术研究初报［J］.落叶果树，2001（5）：1－3.

［2］ 廖优江，聂飞，何健，等.不同药剂和基质对美国兔眼蓝浆果扦插生根影响［J］.贵州农业科学，2005（2）：53－54.

［3］ 修英涛，常凤英，姜河，等.我国蓝莓栽培研究现状及发展措施［J］.辽宁农业科学，2003（3）；21－23.