双硫腙比色法测定海鱼中的汞含量

张铁涛，周宁海

(琼州学院理工学院，海南三亚572022)

随着工业发展，从生产废料中释放出来的汞，被土壤吸附后经过微生物过渡性吸收进入食物链，汞作为持续性污染物难以在自然界中降解、消失。水中汞的污染来自大气及工农业生产，大量的汞和氯化汞从废水中排出，沉积于水底，而沉积于水底的汞离子，在厌氧细菌和甲基维生素B12的作用下形成甲基汞和乙基汞，这些汞的化合物在海产品体内富集，形成高浓度，人或动物食用后会引起汞中毒，闻名遐迩的日本公害水俣病就是长期饮用含汞水和含汞产品所致［1］。

三亚作为以生态农渔业和旅游业为主的滨海城市，其红沙港渔排一直是三亚游客享受本地渔村文化最爱的去处之一。为了解三亚红沙海域海洋生物体受重金属汞污染状况，2011年12月初，采集红沙地区游客喜欢食用的鱼类(金枪鱼、海鲳鱼)等海洋生物，双硫腙法测定生物体中汞(Hg)含量，根据无公害食品水产品有毒有害物质标准限量对海产品食用安全性进行评价，探讨该地区海产品的安全性。为合理开发三亚沿海海洋资源、保护海洋生态环境及水产品资源可持续发展提供科学依据［2］。

1 材料和方法

1.1 仪器和试剂

7200型可见分光光度计(上海仪托环保仪器有限公司)、真空恒温干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)、磁力搅拌机(广州市恒跃家用电器有限公司)、DK－98－Ⅱ万用电炉(天津市泰斯特仪器有限公司)、BS224S电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)、QE－04A高速中药粉碎机(武义县屹立工具有限公司)、汞标准溶液(CHg2+=1.000 mg/mL，天津市光复精细化工研究所)、硝酸(GR)、实验用水均为蒸馏水，其它试剂为分析纯。

1.2 分析方法

1.2.1 样品采集及前处理

2011年12月，在三亚市红沙海域由西向东在游客较集中区域布设采样点，10个采样点均为渔港渔排，重要的海产品供应基地。采集游客喜欢食用的鱼类(金枪鱼、海鲳鱼)。对每一地点的同一物种，尽量采集个体大小接近的样品。样品采回实验室后，进行预处理。鱼类洗净，去鳞、内脏。分为鱼头、鱼肌肉、鱼尾三部分。用蒸馏水将样品洗净，烘干、用组织粉碎机粉碎，过22目筛后装入封口袋子，密封低温保存，做好标签备用［3］。

1.2.2 样品消化

称取20.00 g样品，置于消化装置圆底烧瓶中，放数粒玻璃珠，加45 mL硝酸和15 mL硫酸，转动圆底烧瓶，防止局部炭化。装上冷凝管后，小火加热，待开始发泡即停止加热，发泡停止后加热回流2 h。如加热过程中溶液变棕色，再加5 mL硝酸，继续回流2 h，放冷，用适量水洗涤冷凝管，洗液并入消化液中，取下圆底烧瓶，加水至总体积为150 mL。按同一方法做试剂空白试验。

1.2.3 双硫腙使用液配制

吸取1.0 mL二硫腙溶液，加三氯甲烷至10 mL，混匀。用1 cm比色杯，以三氯甲烷调节零点，于波长510 nm处测吸光度(A)，用下面公式算出配制100 mL二硫腙使用液(70%透光率)所需二硫腙溶液的毫升数(V)［3］。

通过计算配置100 mL二硫腙使用液需二硫腙溶液2 mL。

1.2.4 汞标准溶液配制

分别稀释成每毫升含 0 ug、0.5 ug、1.0 ug、2.0 ug、3.0 ug、4.0 ug、5.0 ug、6.0 ug 汞标准使用液。分别置于125 mL分液漏斗中，加10 mL硫酸(1+19)，再加水至40 mL，混匀。再各加1 mL盐酸羟胺溶液(200 g/L)，放置 20 min，并时时振摇［3］。

1.2.5 标准曲线绘制及样品测定

取消化液(全量)，加20 mL水，在电炉上煮沸10 min，除去二氧化氮等，放冷。于样品消化液及试剂空白液中各加高锰酸钾溶液(50 g/L)至溶液呈紫色，再加盐酸羟胺溶液(200 g/L)使紫色褪去，加2滴麝香草酚蓝指示液，用氨水调节pH，使橙红色变为橙黄色，定量转移至125 mL分液漏斗中。

样品消化液、试剂空白液及标准液振摇放冷后的分液漏斗中加5.0 mL二硫腙使用液，剧烈振摇2 min，静置分层，经脱脂棉将三氯甲烷层滤入1 cm比色杯中，以三氯甲烷调节零点，在波长490 nm处测吸光度，标准管吸光度减去零管吸光度，绘制标准曲线［3］。样品中汞的含量按下式计算:

式中:X—试样中汞的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)

A1—试样消化液中汞的质量，单位为微克(ug)

A2—试剂空白液中汞的质量，单位为微克(ug)

m—试样质量，单位为克(g)。

计算结果保留两位有效数字

1.2.6 样品评价

按国家农业行业标准NY5073－2006《无公害食品:水产品中有毒有害物质限量》做卫生质量评价［4］。

2 结果与分析

2.1 汞标准曲线绘制

分别测定配制汞标准系列溶液 0 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、3.0 μg/mL、4.0 μg/mL、5.0 μg/mL、6.0 μg/mL 吸光值。最小二乘法进行线性回归，得吸光度(A)与汞浓度(C)关系为:A=0.0453 C －0.0003相关系数R2=0.9983，表明汞浓度标准工作曲线在测定范围内线性关系良好。

2.2 样品测定

吸取样液和试剂空白溶液，分别测其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程，求得样品中汞的含量如表1。

表1 海鱼中汞含量的测定结果

2.3 海产品中重金属水平的评价

本次评价标准采用NY5073－2006《中华人民共和国农业行业标准无公害食品:水产品中有毒有害物质限量》衡量，所有水产品汞的含量小于 0.30 mg/kg［5］。

测定两种鱼的鱼头、鱼肉、鱼尾重金属汞的含量，金枪鱼为0.12 mg/kg左右，海鲳鱼0.06 mg/kg左右，均低于0.30 mg/kg，表明水质汞污染在低风险范围内。同一种鱼，鱼头汞含量略高于鱼尾、鱼肉。肉食性鱼体(金枪鱼)中汞含量比海鲳鱼汞含量要高，这主要是由于肉食性鱼类处在食物链的高端，鱼龄越大，体内富集的汞就越多，游客要限量摄入鱼头，多摄食味道鲜美的鱼肉。

3 讨论

双硫腙比色法操作工作量大，耗用试剂、溶剂较多，但设备简单，在酸性条件下，汞与双硫腙的络合能力很强，其它金属离子都不产生干扰，盐酸羟胺是一种掩蔽剂，可消除铁、锌离子的干扰。同时，盐酸羟胺还是一种还原剂，可除去氧化物，测定金属元素的含量具有较高的灵敏度和选择性，至今仍被列为国标的分析方法。在其它条件有利的情况下，用双硫腙萃取金属是否完全，与振荡时间和强度有关。必须有足够的振荡强度，以产生所需的界面，促使金属－双硫腙螯合物尽快地进入有机相，还要有足够的振荡时间(1 min)才能使萃取完全。若不按规定振荡时间操作，会使回收率降低。测吸光度时，应快速进行，在3 min内吸光度比较稳定，过这段时间后吸光度及浓度就有很大的变化。随着时间的推移，吸光度呈上升趋势。浓度升高，所测试结果不准确，所以，比色时间要严格控制。

研究结果显示，三亚红沙地区两种海鱼组织含汞量未超出NY5073－2006限量标准，均低于中国国家食品卫生标准规定的动物性水产品(汞的含量小于0.5 mg/kg)［5］。明显低于姜杰报道广东海域同种鱼类汞的含量［6］，说明本地区水质汞污染在低风险范围内。有关部门应严格控制重金属对食品的污染。首先要从源头上把关，严格控制工业“三废”和城市生活垃圾对农业环境的污染。其次，加快推行标准化生产，加强农产品质量安全关键控制技术研究与推广，加大无公害农产品生产技术标准和规范的实施力度。第三，加强食品安全监督与检验，强化质量管理，完善食品安全检验检测体系。另外，还要加强食品安全教育，提高公众环保意识，加强群众监督，共同保护自然生态环境，维护人体健康。积极利用蓬勃发展的旅游业，以创建国际旅游岛为契机，尽快建立起从环境监测、产品生产、运输、加工、销售一整套合理、完善的质量管理体系，为提高三亚水产品质量水平，开创出一个崭新的局面。

［1］樊祥海，庞昉，张继东.产品中汞的快速检测研究［J］.检验检疫学刊，2011，21(1):24－27.

［2］李春强，刘志昕，朱白婢.三亚红沙港环境特征及赤潮生物调查［J］.热带作物学报，2009，30(4):467－469.

［3］GB/T 5009.17－2003，食品中汞的测定［S］.北京:中国标准出版社，2003.

［4］NY 5073－2006，无公害食品:水产品中有毒有害物质限量标准［S］.北京:中国标准出版社.2006.

［5］GB2733－2005，鲜、冻动物性水产品卫生标准［S］.北京:中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会，2005.

［6］姜杰，丘红梅，张慧敏.广东沿海海域海产品中重金属的含量及评价［J］.2009，26(9):816－817.