5971例抗核抗体阴性病例的抗核抗体谱分析

蒋小燕

(四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川 成都 610072)

自身免疫性疾病是由遗传、环境等多种因素引起的机体免疫功能紊乱，临床表现多样，多器官受累明显。抗核抗体(Antinuclear antibody，ANA)是具有多种细胞核成分的自身抗体，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，可用于多种自身免疫性疾病的筛查，但其对各种疾病诊断的特异性［1］和敏感性不高［2］。而ANA谱采用免疫印迹技术是将凝胶电泳、抗原抗体反应的固相免疫和免疫标记方法结合，把多种纯化的生化性质明确的抗原包被到膜条上作为固相，然后让膜条固定到合成的薄膜上，其特异性较ANA有较大的提高。本研究通过对5971例ANA阴性标本进行ANA谱检测，探讨两者联合检测的意义及价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源 5971例标本均来源于2010年1月至2011年6月四川省人民医院疑似自身免疫性疾病的门诊和住院病例，年龄0～91岁［(45.83±18.65)岁］。其中男2515例，女3456例。

1.2 方法 ①标本处理:采集受检者非抗凝静脉血3 ml，3000 r/min离心10 min并分离血清。②实验方法:ANA采用间接免疫荧光法检测，用Garlzeiss荧光显微镜观察结果，滴度＜1∶100判断为阴性。ANA谱用免疫印迹法，采用EUROLineScan仪器软件判断结果。实验操作严格按照说明书进行。试剂均来自于欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司。

1.3 统计学方法 采用SPSS 10.0软件处理检测数据。率的比较采用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ANA谱阳性率 在5971例样本中，ANA谱阳性的标本为422例，占7.07%。共有524个阳性项目。其中抗SSB抗体、抗Scl-70抗体、抗PM-Scl抗体、抗JO-1抗体(抗PCNA)、抗细胞周期蛋白抗体、抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体(抗tis)、抗核糖体P蛋白抗体(抗RPA)和抗AMA-M2型(抗AMAM2)阳性率分别为0.33%、0.35%、0.35%、0.28%、 0.32%、0.83%、0.63%、0.60%和0.75%。其中抗Ro-52抗体阳性率最高，为2.04%;抗SSA阳性率次之，为1.46%，见表1。

2.2 ANA谱阳性抗体阳性率及性别比 ANA阴性但ANA谱阳性共422例，其中男161例，年龄(49.82±20.18)岁;女261例，年龄(45.53±16.85)岁。单项抗体阳性346例，二联抗体阳性66例，三联及以上抗体阳性10例。单项抗体阳性病例中，男女阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)，其中抗dsDNA＆抗组蛋白阳性10例，抗SSA＆抗SSB阳性4例，抗dsDNA＆抗核糖体P蛋白阳性11例，抗Ro-52＆抗线粒体M2型阳性3例，抗SSA＆抗组蛋白阳性3例，见表2。

表1 5971例ANA阴性标本的ANA谱阳性率

表2 422例ANA谱阳性抗体阳性率及性别比 ［%(n/n)］

2.3 不同年龄组ANA谱阳性率比较 抗PCNA≤20岁组最高，≥50组次之，21～49岁组最低(P＜0.05)。不同年龄组抗Ro-52、抗nRNP、抗SSA、抗Sm、抗Jo-1、抗ScL-1、抗AMA-M2和抗dsDNA阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 不同年龄组ANA谱阳性率比较

3 讨论

自身免疫性疾病的诊断标准之一是检测出特异性或相关性的自身抗体［3］。ANA是一组具有多种细胞核成分的自身抗体，理论上考虑若ANA阴性，其他自身抗体不应为阳性，但是在临床中仍然发现不少ANA阴性而ANA谱的病例。

本次研究结果显示，在5971例ANA阴性的病例中，筛查 ANA谱有422例阳性病例，阳性率达7.07%，与文献报道［4］相比阳性率略低，可能与样本量多少有关。Manousaakis等［5］也报道，这种现象的临床意义需在大样本范围内进行探讨。邓学新等［6］报道，显示即使抗ENA抗体阳性ANA也存在阴性的现象。在422例ANA谱阳性的病例中，女性占61.8%，以20岁以上年龄段为主，说明自身免疫性疾病在女性中年人群中多发［7］。

在422例ANA阴性但ANA谱阳性的病例中，以抗Ro-52阳性率最高，为28.9%;抗SSA抗体次之，为20.7%，与文献报道［3］一致。在ANA谱阳性病例中，单项抗体阳性病例346例，占82.0%;二联抗体阳性病例66，比例为15.64%;三联及三联以上抗体阳性者10例，比例为2.37%。单项抗体阳性病例中男女阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。说明ANA谱能够检测出很多自身抗体较弱者，尤其是女性疑似自身免疫疾病患者，结合临床表现更能使医生诊断疾病或者决定定期随访提供有益的参考依据。

对于ANA检测阴性而ANA谱阳性的原因大多不明。陈宝萍等［8］认为有可能在疾病初期，ANA含量较少难以被检出或者因临床治疗有效病情得到缓解，总ANA转阴。也有观点［9］认为在ANA检测中采用的二抗均是IgG，而ANA主要有IgG、IgE和IgD 3种类型，对后两种抗体的忽略也是ANA漏检的原因之一。因此其原因还需做进一步探讨。

综上所述，对疑似自身免疫性疾病患者，当ANA阴性时，仍有必要进行ANA谱检测，特别是对中年以上的女性患者更有必要进行两者联合检测以提高对自身免疫疾病的检出率，有利于早期治疗。

［1］刘兰，陈娟.抗核抗体在5种自身免疫疾病诊断中的应用［J］.检验医学与临床，2010，7(20):2263-2264.

［2］Hilaro MO，Len CA，Roia SC，et al.Frequency of antinuclear antibodies in healthy children and adolescents［J］.Clin Pediatr(Phila)，2004，43(7):637-642.

［3］邓安梅，仲人前，施笑梅，等.自身免疫病患者可提取核抗体谱与体液免疫的关系［J］.中华医学检验杂志，1999，22(5):299-300.

［4］孙家祥，李艳.625例抗核抗体阴性病例的抗核抗体谱的检测分析［J］.海南医学，2011，22(7):113-114.

［5］Manoussaki MN，Caralea KL，Tzioufas AG，et al.Testing for antibodies to ENA and to dsDNA is not indicated in FANA-negative sera［J］.Clin Rheumatol，1988，7:465-469.

［6］邓学新，曲昌华.818例自身免疫病抗ENA抗体与抗核抗体的对照分析［J］.临床检验杂志，2005，23(4):302-303.

［7］张毅，储以微.Th17与自身免疫疾病［J］.复旦学报(医学版)，2008，35(1):145-147.

［8］陈宝萍，任绪义，程新定.抗核抗体阴性标本的抗可提取核抗原谱分析［J］.浙江临床医学，2010，12(1):75-76.

［9］邢艳，唐中.抗核抗体的研究进展［J］.国外医学科学分册，2006，33(5):218-219.