CA-1500全自动血凝仪的分析性能评价

王茜

(四川省彭州市人民医院检验科，四川 彭州 611930)

国家医学实验室认可委员会及美国病理学家协会(CAP)要求，实验室在引入新的检测系统时，必须对检测系统的分析性能进行评价。因此本研究对我院新购置的SYSMEX公司的CA-1500全自动血凝仪进行了较全面的性能评价。该仪器在进行不同凝血项目检测时，有凝固法、发色底物法、免疫比浊法等原理。故在对此进行评价时，覆盖了应用不同的分析原理进行检测的项目。在应用凝固法的分析项目中，除了评价其测定凝血常规项目血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)含量、凝血酶时间(TT)等的分析性能外，还以凝血因子FⅧ活性作为代表对其它测定凝血因子的性能进行了评价。又分别以抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)及D-二聚体(D-dimer)为代表，评价了该仪器在应用发色底物法及免疫比浊法等原理时的分析性能。

1 材料与方法

1.1 试剂 由DADE BEHRING公司生产。包括正常水平定值质控物(Control Plasma N)，批号: 502796;异常水平定值质控(Control Plasma P)，批号:512622;标准人类血浆(SHP)，批号:502504;DDimer定标血浆(D-Dimer Standard Plasma)，批号: 535815;PT测定试剂:(Thtomborel S)，批号: 545148;APTT测定试剂(ACTIN)，批号:537154; Cacl2，批号:536887;FIB测定试剂:Thrombin Reagent，批号:540261;TT测定试剂:Test Thrombin和配套缓冲液，批号:544256;D-Dimer PLUS和配套缓冲液，批号:37261;测定试剂Antithrombin III(A)，批号:37216。

1.2 检测方法 应用CA-1500全自动血凝仪进行PT、APTT、FIB、TT及血浆凝血因子测定。原理为凝固法(散射光比浊法加百分比终点法)，即将血液凝固过程中的混浊度变化转换成散射光的变化后进行检测;进行AT-Ⅲ测定的原理为发色底物法;进行DDimer、vWF测定的原理为免疫比浊法。

1.3 分析性能的评价

1.3.1 精密度 根据NCCLS EP15-A文件要求，用二个水平的质控血浆分别进行批内和日间重复性试验，重复测定20次以及每天测定1次，连续测定20天。分别计算批内和日间的均值()、标准差(SD)和变异系数(CV)［1，2］。

1.3.2 准确度 使用两个水平的定值质控品分别测定各项目，测得结果必须符合试剂厂家提供的定值范围。

1.3.3 线性评价 根据NCCLS EP6-P要求，选取一份接近预期上限的高值样本(H)，分别按100%、80%、60%、40%、20%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定3次，计算均值(偏离应小于10%)，将测定均值与理论值作比较，计算y=ax+b，验证线性范围［2］。要求:α值在1±0.05范围内，相关系数 r≥0.99。

1.3.4 检测下限 连续测定蒸馏水样本(0水平) 10次，计算CV。

1.3.5 携带污染率 ①异常样本对正常样本的污染:将正常样本置样本架1和3位置，异常样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果:N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。异常样本对正常样本的污染率(K1)=［N4-Mean(N1，N2，N3)］/Mean (N1，N2，N3)。②正常样本对异常样本的污染:将异常样本置样本架1和3位置，正常样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果:A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。正常样本对异常样本的污染率(K2)=［A4-Mean(A1，A2，A3)］/Mean(A1，A2，A3)。

1.3.6 干扰试验 将干扰物质(血红蛋白、甘油三酯和直接胆红素)加入正常或异常血浆中作为实验样本，而将标本稀释液(OVB)加入正常或异常血浆中作为对照样本。所有样本均重复测定两次，两次测定结果偏差在10%以内的数据可以用于计算影响度(%)=(实验样本检测值均值-对照样本检测值均值)/对照样本检测值均值×100。

2 结果

2.1 精密度 各项检测的批内精密度均小于1/ 4TEa，日间精密度均小于1/3TEa。符合美国临床实验室改进修改法案'88(CLIA'88)可接受范围，结果见表1。

表1 CA-1500全自动血凝仪精密度评价结果

2.2 准确度 实验的各项检测的准确度均符合 CLIA'88可接受范围，结果见表2。

表2 CA-1500全自动血凝仪准确度

2.3 线性评价 FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer的线性范围分别在(0.60～5.96)g/L、22.5%～225.4%、15. 9%～158.8%及(241～2405)μg/L，线性良好，符合CLIA'88可接受范围，结果见表3及图1。

表3 CA-1500全自动血凝仪的线性

图1 CA-1500全自动血凝仪的线性评价a:FIB;b:FⅧ:C;c:AT-Ⅲ;d:D-Dimer

2.4 变异系数及检测下限 FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、DDimer的 CV 分 别 为 6.45%、6.79%、0.44%、4.04%，均小于20%，以上项目的检测下限均为0，符合CLIA'88可接受范围。

2.5 携带污染率 PT、APTT、FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ的k1均小于仪器标定的范围10%。PT、APTT、FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ的k2均小于仪器标定的范围10%。异常样本对正常样本的污染及正常样本对异常样本的污染结果见表4。

表4 CA-1500全自动血凝仪的携带污染率

2.6 干扰试验 结果见表5～表7。在血红蛋白浓度小于6.0 g/L、甘油三酯浓度小于5.640 mmol/L或直接胆红素浓度小于374.0 μmol/L时，对PT、APTT、FIB三项测定的干扰均小于 10%，符合CLIA'88可接受范围

表5 血红蛋白对CA-1500全自动血凝仪测定结果的干扰

表6 甘油三酯对CA-1500全自动血凝仪测定结果的干扰

表7 直接胆红素对CA-1500全自动血凝仪测定结果的干扰

2 讨论

本研究中，PT、APTT、TT、Fib、FⅧ:C、AT-Ⅲ及D-dimer检测的批内和日间精密度均满足CLIA'88要求，即批内精密度小于1/4TEa，而日间精密度小于1/3TEa。受质控品的限制，未进行异常水平TT的日间精密度评价，而异常水平TT的批内精密度评价选用的样本为混合血浆，而非质控品。

由于受凝血检测缺乏参考血浆的限制，无法用参考血浆评价本仪器的准确度。而PT、APTT和TT等项目是对时间进行测定，也无法应用回收试验来评价仪器的准确度。故本研究中选择定值质控品来评价其准确度，只能反映本仪器的检测结果是否符合在SYSMEX CA系列仪器上使用DADE BEHRING试剂进行检测的要求。

因PT、APTT、TT等项目的测定结果为时间，不能进行线性评价。本研究仅对FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer做了线性评价。FIB、FⅧ:C、AT-Ⅲ、D-Dimer分别在(0.60～5.96)g/L，22.5% ～225.4%、15.9%～158.8%及(241～2405)μg/L的线性良好。同时，因该仪器具有自动稀释功能，在进行FIB的检测时，可以增加或减少稀释倍数，因此可认为FIB的线性范围可达到0.3～11.92 g/L，覆盖了有临床意义的浓度范围。

因为高浓度样本对低浓度样本的污染更大，所以很多研究在分析携带污染率时，只分析高值标本对低值标本的污染。而考虑到凝血检测异常可能是因为参与凝血物质浓度低或者抗凝物质的存在，本研究设计了两个方面的污染率，即异常标本对正常标本的污染和正常标本对异常标本的污染。

本研究中，在血红蛋白浓度小于6.0 g/L、甘油三酯浓度小于5.640mmol/L或直接胆红素浓度小于374μmol/L时，对PT、APTT、FIB的干扰均小于10%。可认为这些浓度的干扰物质对测定结果无影响，该仪器具有一定的抗干扰能力。但本仪器测定时采用的是散射光比浊法，由于方法学本身的局限性，更高浓度的干扰物存在时，会对结果有较大影响。对于严重溶血标本，除了考虑血红蛋白对测定结果影响之外，还应考虑到凝血因子的激活或消耗对结果的影响，应重新采血;直接胆红素浓度大于374μmol/L的标本在我院临床标本中所占比例＜0.1%，其抗直接胆红素干扰的能力可满足临床需求;甘油三酯浓度大于5.640 mmol/L的标本在我院临床标本中所占比例约为1%，对高甘油三酯标本应采用高速离心后分离血浆的方法，以期消除干扰。

综上所述，SYSMEX公司的CA-1500全自动血凝仪具备良好的分析性能，符合临床要求，可以应用于患者标本的检测。

［1］National committee for clinical laboratory standards.Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices:Tentative guideline［S］.2nd edition.Document EP 52A.Wayne，Pa NCCLS，1999.

［2］Clinical laboratory improvements amendments of 1988 final rule.Laboratory requirements［J］.Federal Register Februaty，1992，57: 7002-7288.

［3］National committee for clinical laboratory standards.Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods:Proposed guideline［S］.Document EP 6-P.Wayne，Pa NCCLS，1986.