RP－HPLC法测定刺五加片中绿原酸的含量

赵陶钧，于风平，代秀梅

(1.山东侨联医院，山东淄博255086;2.淄博市药品检验所，山东淄博255086)

刺五加片由刺五加浸膏加辅料适量压制成片，其临床上主要用于益气健脾，补肾安神，在治疗黄褐斑、低血压等疾病及缓解海洛因成瘾［1］方面疗效显著。《中国药典》2010年版通过测定刺五加片中紫丁香苷的含量控制其质量，但紫丁香苷的含量与生产过程有关［2］，因此其含量并不能很好地反映原料的投料量。有文献对刺五加片中的总黄酮［3］、异嗪皮啶［4］的含量进行测定，但是刺五加片中的总黄酮的测定方法准确度低，而刺五加片中的异嗪皮啶的含量较低，这些方法都不能较好的控制刺五加片中刺五加浸膏的投料量。本文建立了刺五加片中绿原酸测定的高效液相色谱方法，为刺五加片的质量控制提供了科学依据。

1 仪器与试药

Agilent Technologies 1200 Series;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110753－200413);刺五加片(20070801、20080401、20071105，市售样品);乙腈为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相:0.2%甲酸 －乙腈(94∶6)，流速:1.0 mL· min－1，检测波长:327 nm，柱温:30℃，进样量:20 μL，色谱图见图1。

图1 对照品(A)与样品(B)色谱图 1.绿原酸

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液 精密称取绿原酸对照品(五氧化二磷减压干燥12 h)13.75 mg，置200 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液 取本品研匀，精密称取细粉适量(相当于原药品10片量)，置25 mL量瓶中，加流动相适量，超声30 min，加流动相至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 对照品溶液 精密量取对照品储备液4 mL，置25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.3 线性关系考察 取对照品储备液，用流动相分别稀释成68.75、34.38、17.19、8.594、4.297 μg·mL－1的溶液，按照“2.1色谱条件”进行实验，记录绿原酸的峰面积。绿原酸的浓度C(μg·mL－1)为横坐标，绿原酸的峰面积A为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=55.13C－3.521(R2= 0.999 9)。试验结果表明，绿原酸浓度在4.297～68.75 μg ·mL－1范围内，峰面积与进样量线性关系良好。

2.4 精密度试验 取对照品溶液连续进样5次，测定，计算。结果绿原酸峰面积RSD为0.2%。表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8 h各进样1次，结果峰面积RSD为0.8%，说明供试品溶液在8 h内稳定。

2.6 加样回收率试验 取本品(批号20080401，平均片重: 0.512 8 g，绿原酸含量为0.185 mg/片)研匀，精密称取细粉适量(相当于原药品1片量)，置25 mL量瓶中，加流动相适量，分别加对照品储备液3、4、5 mL超声30 min，加流动相至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液进行测定。记录色谱图，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.7 样品测定 取样品3批，按照上述方法制备供试品溶液进行测定，结果见表2。

表2 三批样品含量测定结果

3 讨论

3.1 波长的选择 通过二极管阵列检测器对绿原酸对照品溶液在190～400 nm之间进行光谱扫描，选择327 nm最大吸收波长处作为检测波长(图2)。

图2 绿原酸对照品溶液的紫外光谱图

3.2 流动相的选择 作者经试验发现绿原酸与紫丁香苷的保留行为较为接近，不易完全分离，本文流动相中的有机相比例较小，主要是为了样品中的绿原酸与紫丁香苷实现完全分离。同时在流动相中加入0.2%的甲酸，能够明显改善绿原酸的峰形。

［1］ 黄德彬，刘希林，余昭芬，等.藿香正气口服液合用刺五加片缓解海洛因成瘾戒断症状的疗效观察［J］.中成药，2004，26(5):382－385.

［2］ 刘建娣，梁琼麟，罗国安，等.刺五加注射液指纹图谱的建立及其在质量控制中的应用［J］.中成药，2006，28 (1):3－5.

［3］ 张正康.分光光度法测定刺五加片中总黄酮含量［J］.时珍国医国药，2001，12(1):41－42.

［4］ 张涛.刺五加片质量考察［J］.中药材，2001，24(8):597－598.