不同厂家阿莫西林胶囊体外溶出度考察

欧阳百发，刘春平，，全向阳，王 超

(1.康美药业股份有限公司，广东普宁515300;2.广东康美药物研究院有限公司，广东广州510006)

阿莫西林(Amoxicillin)为青霉素类广谱β－内酰胺类抗生素，由于具有服用方便、安全性高、疗效显著、不良反应少等优势，已为众多消费者接受。口服的阿莫西林制剂有胶囊剂、片剂、颗粒剂、干混悬剂、分散片、咀嚼片等多种剂型，其中，胶囊剂占了70%以上的市场份额，但本品胶囊剂生产厂家众多，据临床观察，其疗效并不一致，产品质量存在差别。在多种pH溶出介质中溶出曲线的测定是先进国家药物审评机构评价口服固体制剂内在质量的一种重要手段［1，2］。因此，笔者参考有关文献［1～5］，采用《中国药典》相关方法对4个不同厂家阿莫西林胶囊在多介质及不同转速条件下进行体外溶出度比较研究，以评价阿莫西林胶囊的内在质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV－2550型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)，D－800LS型智能溶出仪(天津大学无线电厂)，BS224S型电子天平(德国赛多利斯股份有限公司)。

1.2 试药 阿莫西林对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:130409－201011，含量86.6%);阿莫西林胶囊(A厂，规格:0.25 g，批号:18773;B厂，规格:0.25 g，批号: 4110243;C厂，规格:0.25 g，批号:111214;D厂，康美药业提供;规格:0.25 g，批号:120218－1)。

2 方法与结果

2.1 溶出介质的选择

2.1.1 溶解性试验 在(37±1)℃温度下，以pH值分别为1、3.7、4.7、5.7、7.5的12.5%磷酸二氢钾缓冲溶液为溶剂(pH值为1、3.7、4.7的磷酸二氢钾缓冲溶液用盐酸调节pH至规定值;pH值为5.7、7.5的磷酸二氢钾缓冲溶液用NaOH调节pH至规定值)，配制阿莫西林饱和溶液，各饱和溶液再经pH值为1的磷酸二氢钾缓冲溶液适当稀释后，用紫外－可见分光光度法［6］在272 nm波长处测定其吸光度，计算各pH溶剂中阿莫西林的溶解度(见表1)。结果表明，在pH 1～7.5范围内，阿莫西林单次最大给药剂量(1.0 g)不能够完全溶解于不多于250 mL的水中。

表1 阿莫西林pH值－溶解度表

2.1.2 生物药剂学(BCS)分类判断及介质选择 上述溶解性试验时阿莫西林是低溶解性的，与文献［7］报道一致，且阿莫西林通透性低，属于生物药剂学分类Ⅳ，即低溶解低通透性药物。因此，阿莫西林胶囊溶出度比较研究选择pH 1.2、4.0、6.8和水4个介质条件进行。

2.2 测定方法的选择

2.2.1 检测波长的选择 取阿莫西林对照品适量，以水溶解稀释成130 μg·mL－1的溶液，采用紫外－可见分光光度法，于210～350 nm范围内分别进行扫描，结果在272 nm处有最大吸收，与阿莫西林标准［4］规定一致，因此确定以272 nm为检测波长。

2.2.2 测定方法的选择 水介质条件下，按照阿莫西林胶囊［6］溶出度检查方法，转速为100 r·min－1，每批样品采用12粒进行测定。pH 1.2、4.0及6.8条件下，除介质外，其他与水介质条件下一致。考虑到特殊病人可能肠胃功能较差，另在水介质下，转速按50 r·min－1，其他条件与上述水介质一致进行考察。

2.2.3 pH 1.2、4.0及6.8溶液配制［1］pH 1.2盐酸溶液配制:取氯化钠2.0 g，加水适量溶解后，加盐酸7 mL，再加水稀释至1 000 mL，摇匀，即得。

pH 4.0醋酸盐缓冲液配制:取乙酸钠(CH3COONa· 3H2O)54.4 g，加水适量溶解后，加冰醋酸92 mL，再加水稀释至1 000 mL，摇匀，即得。

pH 6.8磷酸盐缓冲液配制:取磷酸二氢钾1.7 g和无水磷酸氢二钠1.775 g，加水溶解并定容至1 000 mL，摇匀，即得。

2.3 方法学验证

2.3.1 空胶囊壳干扰试验 取空胶囊壳6粒，照溶出度测定法，依法操作，在272 nm波长处测定吸光度，计算空胶囊壳溶出度校正值分别为1.1%、1.2%、0.9%、1.0%、1.3%及1.1%，平均溶出度校正值为1.1%(＜2%)，因此空胶囊壳对溶出度测定的干扰可忽略不计。

2.3.2 不同介质下样品稳定性考察 取阿莫西林胶囊(批号120218－1)内容物适量(约相当平均装量)，分别以水、pH 1.2盐酸盐溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液及pH 6.8磷酸盐缓冲液溶解并定容至1 000 mL量瓶中，过滤，精密移取续滤液5 mL置20 mL量瓶中，并以各介质溶液定容至刻度，摇匀，在272 nm处于各放置时间点测定其吸收度，检测结果见表2及表3。结果表明样品溶液在水、pH 4.0及6.8介质溶中8 h内稳定;在pH 1.2溶液中很不稳定，60 min内含量降解11%，120 min内降解23%。

2.3.3 标准曲线绘制 精密称取阿莫西林对照品23.3 mg，置50 mL容量瓶，加水溶解并稀释至刻度，分别量取上述溶液2.5、5、7.5、10、15 mL置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，采用紫外分光光度计于272 nm波长处测定吸收度。以水为空白，所得数据进行一元线性回归，得回归方程:A= 0.003 4C+0.010 9，r=0.999 8。结果表明阿莫西林在46.6～279.6 μg·mL－1浓度范围内在272 nm波长处的吸收度A值与浓度C呈良好的线性关系。

表2 阿莫西林稳定性考察(水、pH 4.0及pH 6.8介质)

表3 阿莫西林稳定性考察(pH 1.2介质)

2.3.4 回收率试验 称量已知含量的阿莫西林原料(约相当于标示量的70%、100%、130%)各三份，分别按比例加入处方量辅料，模拟制剂，用水稀释成每1 mL约含130 μg的溶液。照紫外分光光度法测定在272 nm处的吸收度，计算回收率(表4)，结果平均回收率为99.5%，RSD为0.39%(n =9)。

表4 溶出回收率实验结果

2.3.5 重复性试验 取上述溶液(稳定性试验配制)，在272 nm处重复测定6次，其吸收度分别为0.435 8、0.440 1、0.438 9、0.436 6、0.439 2、0.438 5，平均值为0.438 6，RSD为0.26%(n=6)。结果表明本测定方法重复性良好。

2.4 判定方法选择 采用相似因子法f2［1～3］的值来判断，当f2数值在50～100范围认为两条溶出曲线是相似的。

上述公式中n为时间点(n≥3)，Rt是对照样品溶出平均百分数，Tt是测试样品溶出平均百分数。如果药物在15 min内溶出达到85%以上，可以认为两批产品溶出行为是相似的，不需要通过统计学方法对数据分析判定。

2.5 不同介质及转速条件下溶出度测定

2.5.1 水介质条件下溶出度测定 正常转速条件测定:分别取每批阿莫西林胶囊12粒，照溶出度测定法(《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第一法)，以水900 mL为溶出介质，转速为100 r·min－1，依法操作，分别在5、15、30及45 min时，取溶液约10 mL(取样后立即补充等量同温度的溶出介质)，滤过，精密量取续滤液6 mL，置25 mL量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，照紫外－可见分光光度法(《中国药典》2010年版二部附录Ⅳ A)在272 nm的波长处测定吸光度;另取阿莫西林胶囊10粒，取内容物，混合均匀，精密称定适量(约相当于平均装量)，按标示量加溶出介质溶解并稀释成每1 mL中约含130 μg的溶液，滤过，取续滤液作为对照溶液，同法测定，测定结果见表5。

低转速条件测定:除转速为50 r·min 外，其他与正常转速条件一致，测定结果见表5。

2.5.2 其他介质条件下溶出度测定 介质分别选择配制的pH 1.2、4.0及6.8的溶液，其他条件与水介质条件(100 r· min－1)下一致，分别对样品进行测定，测定结果见表5。

表5 阿莫西林胶囊累积溶出百分率测定结果()

表5 阿莫西林胶囊累积溶出百分率测定结果()

介质条件 样品及批号 累积溶出百分率(%) 5 min 15 min 30 min 45 min相似因子f2 A 厂18773 61.7±9.6 84.1±2.5 96.8±1.4 99.8±2.8 /水(100 r·min－1) A厂B厂 4110243 62.9±14.7 82.9±2.4 97.0±1.6 102.9±1.7 92.6 C厂 111214 54.4±19.2 76.0±11.3 94.6±4.6 99.7±2.5 59.4 D厂 120218－1 63.0±10.1 84.2±1.7 98.0±1.1 101.1±1.3 92.2 A厂 18773 49.2±11.5 77.3±3.1 94.4±1.8 99.8±1.8 /水(50 r·min－1) B厂 4110243 53.7±9.7 75.8±2.5 93.5±1.9 99.6±1.6 76.4 C厂 111214 44.4±21.2 70.5±13.8 90.4±3.7 98.5±2.3 63.3 D厂 120218－1 53.3±13.5 79.5±2.2 93.1±1.6 100.0±1.4 76.4 pH 1.2盐酸盐溶液A厂 18773 60.3±10.4 82.5±3.5 96.5±0.7 100.5±2.2 / B厂 4110243 62.7±12.3 83.9±2.8 97.0±1.8 98.9±2.2 85.9 C厂 111214 57.4±21.2 76.7±12.4 93.2±1.4 99.0±2.5 68.2 D厂 120218－1 60.5±15.5 85.9±1.8 97.2±0.9 101.0±2.3 82.5 pH 6.8磷酸盐缓冲液A厂 18773 84.3±7.6 98.6±2.6 93.5±1.2 89.8±1.9 / B厂 4110243 81.7±6.9 102.7±1.9 91.2±1.5 88.7±1.3 / C厂 111214 83.9±9.3 100.2±3.0 93.8±1.8 89.0±1.5 / D厂 120218－1 85.1±7.6 99.5±2.3 92.9±1.1 88.8±1.3 / pH 4.0醋酸盐缓冲液A厂 18773 59.3±16.7 84.3±2.5 99.4±2.4 100.6±1.8 / B厂 4110243 60.8±11.4 82.8±1.9 98.2±1.7 101.9±2.2 88.1 C厂 111214 53.6±18.4 77.2±7.6 99.5±3.2 99.1±1.9 63.6 D厂 120218－1 64.9±12.6 88.9±2.3 100.5±1.6 99.4±1.8 68.1

2.6 数据分析及结果 经市场调查本品种国内无原研进口或其他ICH成员国市售样品，未获得合适的参比制剂，故挑选依据中国药典法测定溶出曲线良好的A厂样品为参比样品，其他3个厂家为试验样品，进行相似因子f2计算及评价，结果见表5。在pH 1.2条件下，测得样品在15 min内累积溶出度均达到85%以上，其他介质下的相似因子f2值均在50～100的范围内，可以判定4厂家样品在该条件下的溶出曲线具有相似性。但C厂家产品的溶出行为慢于其他3个厂家，且变异系数明显比其他厂家的高。

3 讨论

同一药物在不同的pH条件下的稳定性可能是不一样的，采用多介质对产品进行溶出度考察时应该对每个介质下样品的溶液进行稳定性考察。本实验表明阿莫西林胶囊样品溶液在水、pH 4.0醋酸盐缓冲液及pH 6.8磷酸盐缓冲液中8 h内稳定;在pH 1.2盐酸盐溶液中很不稳定，60 min内含量降解11%，120 min内降解23%。因此，对本品在pH 1.2盐酸盐溶液介质条件下溶出度检测时，应及时处理样品及上机检测，尽量避免因样品处理时间过长导致的检测误差。

考虑到某些患者身体机能虚弱、胃肠蠕动功能较差等因素影响，在体外多介质溶出度考察的同时还应该进行低转速(比标准转速低)条件下的溶出行为比较，以评价该药物在特殊人群中可以存在的释放差异。

虽然上述研究表明不同厂家的溶出行为具有相似性，但临床观察反应，不同厂家的阿莫西林胶囊疗效不一致，质量存在差别。可能是本产品生产厂家众多，且有0.125、0.25及0.5 g三个规格，而本试验仅对4个厂家的0.25 g规格进行试验，样品代表性有限。且阿莫西林生物通透性低［7］，属于生物药剂学分类Ⅳ的药物，这类药物的体内、外释放相关性较差，因此，体外溶出行为相似，但体内吸收行为可能会有很大差别，需进一步的生物等效性(BE)试验研究才能确定。

［1］ 丁盛，陈文，赵海涛，等.采用不同介质中的溶出曲线评价硫酸氢氯吡格雷片的内在质量［J］.中国现代应用药学，2011，28(S1):1341－1342.

［2］ 张启明，谢沐风，宁保明，等.采用多条溶出曲线评价口服固体制剂的内在质量［J］.中国医药工业杂志，2009，40(12):946－955.

［3］ 卢丽琨，刘园，张琪，等.不同厂家苯磺酸氨氯地平分散片体外溶出度比较［J］.安徽医药，2012，16(1):16－18.

［4］ 刘红，张关敏，张艳华.不同厂家枸橼酸他莫昔芬片的体外溶出度考察［J］.中国医院药学杂志，2012，32 (6):436－438.

［5］ 赵霓.不同厂家卡托普利片在四种溶出介质中的溶出曲线比较研究［J］.中国药师，2012，15(6):845－847.

［6］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录23.

［7］ Biopharmaceutics Classification System(BCS)Results［DB/ OL］.Therapeutic systems research laboratories，［2012－10－26］.http://69.20.123.154/services/bcs/results.cfm.