趋化因子受体CXCR4/CXCL12在结肠癌中的表达及其与结肠癌肝转移的关系研究

胡达水 胡 海 陈义华 罗伟昌 万志刚

南昌市第三医院普外科，江西南昌 330009

结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，影响其远期疗效及预后的主要瓶颈是结肠癌的远处转移。肝脏是结肠癌主要远处转移的主要靶器官，也是影响结肠癌疗效的主要因素之一。近来研究证实趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在肿瘤的器官特异性转移中发挥着重要作用，但其在结肠癌向肝脏特异转移研究未见报道。本研究检测了84例结肠癌标本中趋化因子受体CXCR4/CXCL12的表达，探讨CXCR4/CXCL12与结肠癌肝脏转移的关系及意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集笔者所在医院普通外科2008年1月～2012年1月84例结肠癌组织标本，男49例，女35例，其中高分化腺癌26例，中分化腺癌34例，低分化腺癌24例。有肝脏转移者43例，无肝转移者41例。年龄38～73岁，中位年龄54岁。

1.2 实验试剂

鼠抗人试剂CXCR4（深圳晶美生物工程有限公司，fusin，CD184），SP试剂（深圳晶美生物工程有限公司）。兔抗人CXCL12抗体试剂（深圳晶美生物工程有限公司）。

1.3 方法与结果判断

84例结肠癌组织标本常规石蜡包埋，分别连续切片，每片5μm厚备用，采用SP法对标本切片进行免疫组织化学染色，阴性对照使用PBS代替一抗。

阳性判断：阳性染色以细胞质内出现淡黄色至棕褐色颗粒为准，显微观察选择400倍光镜下随机选取5个视野进行数量统计，以定位明确、染色明显，平均20%以上细胞染色的组织切片视为表达阳性。

1.4 统计学处理

采用SPSS11.0软件对结果数据进行统计学分析，计数资料采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

通过免疫组化检查发现，在肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中可见CXCR4阳性表达，呈淡黄色至棕黄色，弱染色基本出现在癌组织及周围的基质内，而在细胞核不染色（图1）。癌细胞的细胞质中可观察到CXCL12的阳性表达率，局灶性或弥散性分布呈淡黄色至棕黄色，细胞膜和细胞核均不染色，可在强阳性染色的癌组织附近观察到淋巴管内皮着色（图2）。

图1 结肠癌CXCR4阳性染色（SP×400）

图2 结肠癌CXCL12阳性染色（SP×400）

通过免疫组化检查发现，在84例CXCL12的阳性表达标本中，阳性率56%（47/84）；伴肝脏转移组CXCL12的阳性表达率62.3%（27/43），无肝脏转移组阳性表达率25.8%（11/41），两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在84例标本中CXCR4表达结果可见，阳性率53.6%（45/84）；伴有肝脏转移组CXCR4的阳性表达率58.7%（25/43），无肝脏转移组阳性染色率22.1%（9/41），两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 84例患者CXCR4/CXCL12在结肠癌中及伴有结肠癌肝转移的阳性表达[n（%）]

3 讨论

恶性肿瘤的转移是一个非随机性过程，特定的肿瘤的转移有其器官转移的特异性。目前认为导致肿瘤转移的嗜器官性与某些器官表达的趋化因子与肿瘤原发灶肿瘤细胞表面的趋化因子受体相关。其机制主要为表达于肿瘤细胞的趋化因子与特定器官表达的受体特异性结合，研究认为趋化因子还通过提高基质蛋白酶-9来提高肿瘤的转移能力[1]。Murakami T等[2]通过敲除趋化因子CXCR3和CXCR4基因的表达来抑制结肠癌肝脏和肺部的转移取得理想较高。Kim J[3]对有肝转移的结直肠癌患者的肿瘤细胞用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学方法进行分析显示，趋化因子受体CXCR4在这些患者的结直肠癌细胞呈高表达，阳性率高达97%。而在结直肠癌最常见的转移部位，如淋巴结、肝脏、肺则高表达其配体CXCL12。所以也就不难理解为何结直肠癌的转移绝大多数发生在肝脏等部位。在其他消化道肿瘤转移过程中CXCR4/CXCL12发挥着重要作用。Yan C等[4]对132例行胃癌根治术和30例内镜活检的胃癌组织标本检测发现，CXCR4在伴有淋巴结转移病例中的表达显著高于无淋巴结转移者，并且与肿瘤大小、浸润深度、淋巴管浸润和分期密切相关。

本研究显示CXCR4/CXCLl2在结肠癌中有较高表达，且伴有肝脏转移的结肠癌组织CXCR4阳性表达显著高于无肝转移患者。Cho等[5]通过运用PCR技术检查多个趋化因子受体在结肠癌患者肝脏中具有显著表达，且与结肠癌的肝转移有相关性，并认为趋化因子可以作为结肠癌转移复发的一项指标，这与我们报道相一致，仅与笔者的研究趋化因子及其受种类不同而于。另外在结肠癌肝脏的转移中，微转移灶往往不能早期发现，所以通过CXCR4/CXCLl2检测，有望作为预测结肠癌潜在转移复发和预后的有效指标。

[1] Müller-Edenborn B，Roth-Z graggen B，Bartnicka K，et al.Volatile anesthetics reduce invasion of colorectal cancer cells through down-regulation of matrix metalloproteinase-9[J].Anesthesiology，2012，26（1）：94-97.

[2] Murakami T，Kawada K，Iwamoto M，et al.The role of CXCR3 and CXCR4 in colorectal cancer metastasis[J]. Int J Cancer，2012，12（1）：100-103.

[3] Kim J.Chemokine receptor CXCR4 expression in patients with melanoma and colorectal cancer liver metastases and the association with disease outcome[J].Annal Surg，2006，244（1）：113-120.

[4] Yan C，Zhu ZG，Yu YY，et al.Expresion of vascular endothelial growth factor C and chemokine receptor CCR7 in gastric carcinoma and their values in predicting lymph node metastasis[J].World J Gastrenterol，2004，10：783-790.

[5] Cho YB，Lee WY，Choi SJ，et al.CC chemokine ligand 7 expression in liver metastasis of colorectal cancer[J]. Oncol Rep，2012，28（2）：689-694.