IFABP、LFABP检测技术在小儿肠缺血中的应用

李 立梁海峰

IFABP、LFABP检测技术在小儿肠缺血中的应用

李 立1梁海峰2

IFABP；LFABP；小儿肠缺血

2009年2月至2011年4月，我们通过对临床肠缺血患儿血清中肝、肠脂肪酸结合蛋白变化的研究，来探讨其临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

按入院时间收集2009年2月 2011年4月间在我院住院的机械性肠梗阻患儿92例，年龄为5月～9岁，男58例，女34例。嵌顿病32例，男22例，女10例，全部I期行病修补术，因肠坏死行肠切除、肠吻合术者8例；肠套叠24例，男16例，女8例，全部开腹手术，因肠坏死行肠切除、肠吻合术者10例；粘连性肠梗阻36例，男20例，女16例，保守治疗（胃肠减压，3：2：1液灌肠，中药鼻饲）24例，12例开腹手术松解粘连，其中4例因肠坏死行肠切除、肠吻合术。

对于92例机械性肠梗阻患儿，分为实验组1（肠坏死手术切除肠管组）22例；实验组2（手术未切除肠管组）46例；实验组3（未手术组）24例，取阑尾炎患儿20例作为实验组4，对照组为正常儿童20例。

1.2 标本采集

对照组采外周静脉血1次，实验组患儿分别于入院时、术后（有效治疗）第1天、术后（有效治疗）第3天采外周静脉血3次，分别检测血标本中I-FABP、L-FABP水平。

1.3 IFABP与LFABP的检测方法

IFABP与LFABP的测定采用美国RD公司提供的ELISA试剂盒进行，具体方法如下：①按照说明将标准品在酶标包被板上梯度稀释，稀释后各孔加样量均为50uL，浓度分别为900ng/m L，600ng/m L，300ng/m L，150ng/m L，75ng/m L。②加样。分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔先加样品稀释液40uL，然后再加待测样品l0uL。将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。③温育。用封板膜封板后置37℃温育30m in。④配液。将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。⑤洗涤。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此反复5次，拍干。⑥加酶。每孔加入酶标试剂50uL。⑦温育、洗涤。操作同③、⑤。⑧显色。每孔先加入显色剂ASOuL，再加入显色剂BSOuL，轻轻震动混匀，37℃避光显色15m in。⑨终止。每孔加终止液50uL，终止反应。⑩测定。以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。

1.4 统计学处理

利用SPSS15.0进行资料的输入和统计分析，进行计量资料的t检验及方差分析。P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 血清IFABP的变化

入院时，实验组1、实验组2、实验组3血清IFABP水平明显高于对照组，以实验组1最高，其次为实验组2，实验组1与实验组2、实验组3之间均有显著差异，说明血清IFABP水平与肠坏死、肠缺血的程度呈正相关；术后（有效治疗）第1天实验组1、实验组2、实验组3与对照组无差异，表明肠坏死、肠缺血纠正后，血清IFABP水平恢复正常。术后（有效治疗）第3天所有肠梗阻组较前无变化。入院时实验组4血清IFABP水平与对照组无差别，且术前与术后无差别，证明单纯肠道炎症并不能引起血清IFABP水平的升高，手术对血清IFABP亦无影响。

2.2 血清LFABP的变化

入院时，实验组1、实验组2、实验组3血清LFABP水平明显高于对照组（P均＜0.001），实验组1与实验组2较实验组3之间均有显著差异（P ＜0.001），实验组1与实验组2之间无差异（P＞0.05）；术后（有效治疗）第1天实验组1、实验组2、实验组3与对照组无差异，表明肠坏死、肠缺血纠正后，血清LFABP水平恢复正常。术后（有效治疗）第3天所有肠梗阻组较前无变化。入院时实验组4血清LFABP水平与对照组无差别，且术前与术后无差别，证明单纯肠道炎症并不能引起血清IFABP水平的升高，手术对血清LFABP亦无影响。

3 讨论

肠梗阻所致的肠缺血可损伤肠道粘膜上皮机械屏障和免疫屏障，致多种介质释放，如血小板活化因子（PAF）、肿瘤坏死因子（TNF）、心脏抑制因子、IL-2、IL-6等，可并发全身炎症反应综合症（SIRS）。缺血的肠管不能有效阻止肠道内细菌和内毒素向肠道外移位而引起菌血症和内毒素血症。肠缺血还可使血流缓慢和粘附分子表达的增加致肠管内白细胞、内皮细胞和血小板聚集，从而进一步损害灌注，加重酸中毒和有利于DIC的发生。肠道缺氧导致大量氧自由基产生及肠勃膜细胞的钙超载，致细胞死亡。本试验证明所有肠梗阻患儿入院时血清IFABP水平均明显高于正常对照组，且与肠缺血程度呈正相关，以肠坏死组升高最明显。如果肠梗阻患儿血清IFABP值超过800ng/m L，有绞窄性肠梗阻可能，建议考虑剖腹探查；如果超过1000ng/m L，建议早期剖腹探查，因为可能已经发生肠坏死。术前血清IFABP水平与病变肠管长度呈正相关。肠缺血纠正后，IFABP在术后（有效治疗）第1天马上恢复到正常水平，证明其提示预后的敏感性也较好。阑尾炎组无论术前术后，血清IFABP水平均与对照组无明显差异，证明单纯肠道炎症及开腹手术对IFABP无影响。IFABP是早期诊断肠缺血、敏感性和特异性均较高的生物学指标，且随病变肠管程度的加重而增高。本试验显示所有肠梗阻患儿入院时血清LFABP较对照组明显升高，其中实验组1、实验组2较实验组3升高明显（P＜0.01），但实验组1与实验组2之间无显著差异（P＞0.05），证明LFABP水平与肠缺血程度有一定相关，而三组之间的差异，作者认为实验组2血清LFABP的升高是肠缺血与肠道干细胞再生分化共同作用的结果；实验组1因为发生肠坏死影响了肠道干细胞分化，其血清LFABP的升高主要是由肠坏死引起；实验组3血清LFABP升高可能只是对肠道勃膜轻度损伤，尚未或轻微激发肠道干细胞的分化所致。

[1] 沈涤华，施诚仁，吴燕，徐远飞. 肠脂肪酸结合蛋白变化在肠道疾病的临床意义[J].实用医学杂志，2009,21(22):2535-2536.

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2山东省东营市东营区人民医院 山东东营 257085