浅谈ELISA试剂使用前的确认

颜秀娟 邱昌文 袁 婷 林丹英

（南宁中心血站，广西 南宁 530003）

实验室对经血感染性指标进行有效检测，是确保临床输血安全的重要手段。酶联免疫检测（ELISA）是目前我国采供血机构用于献血者血液病毒筛查的法定方法[1]。因此，ELISA试剂得到有效控制，是保证实验室测检结果准确的关键环节。而检测试剂有效性的确认是一项不可忽视的环节，在试剂使用前、中、后期都要对试剂的灵敏度、特异性进行严格监控，确保检测试剂的有效性[2]。现将我们对ELISA试剂在使用前进行确认的一些粗浅认识介绍如下。

1 试剂确认的涵义理解

“确认”的定义ISO 9001：2000标准3.8.5条将“确认”定义为：“通过提供客观证据对特定的预期使用或应用要求已得到满足的认定”[3]，在ISO/IEC17025：2005中“确认”的定义为“通过检查并提供客观证据，以证实某一特定预期用途的特定要求得到满足”[4]，显然两者对“确认”的表述是一致的。由此可见，“确认”的目的是检查预期使用要求或应用要求是否得到满足，“确认”的范围是针对特定的预期用途的特定要求，“确认”的要求是按照一定的程序和方法，通过试验、核查认可、验证等检查方式，收集和提供客观证据，以判定其最终是否符合预期要求或应用要求。ELISA试剂盒热稳定性差，遇热后灵敏度、特异性都将降低[5]。如果试剂盒在长途运输过程中保证不了规定的温度要求，其质量将会受到影响。为了避免试剂盒和质控品在运输过程中可能发生变质、泄露给检验工作带来的影响，以及对新批号的试剂和质控品在本实验室的“表现”进行预判，确定试剂批间差异和可接受性，应对新进货的试剂盒和质控品进行确认[6]。另外，我国对体外免疫诊断试剂的注册、批准、生产、监控等环节都有严格控制。用于血液筛查的检测试剂属于药品和三类医疗器械监督管理范畴，质量必须符合《中华人民共和国药品管理法》和《中华人民共和国医疗器械监督管理条例》的有关规定[7]。《血站实验室质量管理规范》中明确规定：每批试剂投入使用前应进行确认[8]。因此，试剂确认的目的是对新的或者有变化的ELISA试剂的系统检查与评价进行策划和控制，保证其在正式使用前符合预期的使用要求。

2 试剂确认依据

ELISA血液检测试剂的确认方法和验收标准，依据《中国输血技术操作规程（血站部分）》《中国生物制品规程》、《ELISA试剂盒操作说明书》和《参考品使用说明书》。

3 制定试剂确认计划

按照本站确认管理程序文件的要求，由质量管理科制定确认计划，确认计划包括：确认目的、确认项目、确认原因、确认时间、确认部门、确认方法和确认标准。质量管理科将确认计划发至相关科室后，由相关科室组织参与确认的人员，以便做好确认前的准备工作。

4 试剂确认的内容和步骤

ELISA试剂盒的确认包括查验、质量抽检和资质验证3部分内容。原则上应查验合格、入待检库后，才进行质量抽检活动。ELISA试剂盒的确认按到货批次执行，即不同时间进货的同供方、同一批号的试剂每次均需要进行确认。对于首次抽检不合格的项目应加倍抽样进行复检。

4.1 试剂查验和入库

试剂采购回血站后，由设备科首先对每批试剂进行初步查验确认。查验的内容及标准：应首先确认新到货的试剂是经过对试剂生产商的评估批准采用的试剂；然后是检查试剂包装：必须按照规定贴有批批检防伪标签、有使用说明书，在包装上注明有效期、品名、规格、批准文号、生产日期、产品批号、储存温度，并附有质量合格的标志，如供方资质（供方已向本站提供了有效的企业法人营业执照副本、药品注册证书、药品生产或经营许可证、进口药品注册证等证件复印件）、中标情况（供方已通过了本站的物料供方评审，并列入了“合格供方清单”）、试剂资质（有说明书和批批检报告）、规格型号（与订购规格相符）、采购数量（与订购数量相符）、采购价格（不高于政府集中采购招标时中标价格）、试剂盒外观（外观完整，无破损，无变形，无渗漏，无污染，每盒都贴有中国药品与生物制品检定所的激光防伪标签）、有效期限（可使用3个月以上）、包装情况（有专用箱进行外包装，并有封口胶封箱）、运输条件（运输过程符合试剂盒保存要求）。查验合格后将试剂放入标识“待检”区域内，并在库存卡详细记录实际进货日期、数量、批号、有效期及现有库存量并签字。试剂进货确认完毕，库存管理员填写“试剂送检单”，连同“物料查验入库单”和随机抽取的试剂盒样品及相关资料（试剂的批批检证书和关键原辅材料的出厂检定合格证书）一起递交试剂确认部门（由质量管理科负责）。

4.2 试剂质量抽检

质量管理科委托检验科协助试剂质量确认检测，并对检测过程进行现场监控。试剂确认时，应包括试剂盒阴性和阳性对照品，弱阳性室内质控品，任意挑选的常规检验标本。应在与常规检验相同的环境和仪器状态下，按照试剂盒说明书进行操作。判断标准包括试剂的阴性和阳性对照品必须符合试剂盒要求；低值质控品（浓度以该试剂盒临界值（cut off值）的2～3倍为宜）必须达到cut off值，并与试剂批批检报告数据进行比较，及与以往实验室检测质控数据进行回顾性比较，差异在规定范围内；常规标本试验结果未出现本底异常。HBsAg检测试剂盒国家规定最低检出限为0.5ng/ml，因此需用该浓度质控品进行试剂确认[9]。具体方法如下：

①试剂组份外观检查：于光线明亮处以肉眼进行检查，外包装严密、无漏气；酶标板洁净无异物、无缺损；液体组份无沉淀或絮状物；冻干组份呈白色或棕色疏松体。②试剂盒对照品检测：按照试剂使用说明书要求检测试剂盒内的阳性对照品、阴性对照品，依据试剂盒要求进行检测结果判定，试剂盒的阳性对照品、阴性对照品的检测结果符合试剂说明书规定的要求。③阳性符合率检测：测定已知阳性标本8份，每份1孔，阳性符合率应为8/8。④阴性符合率检测：测定已知阴性标本16份，每份1孔，，阴性符合率应大于14/16，且无花板现象。⑤批内重复性检测：对同一弱阳性质控血清检测16孔，计算S/CO值的平均值内x`、及标准差S，变异系数（CV=S/X×100%）值应小于15%。⑥敏感度检测：最低程度应能检出血站所选择的卫生部临检中心提供的临界质控血清，酶免试剂盒的OD/CO值≥1.0。

4.3 试剂资质验证

质量管理科核对送检的酶联免疫试剂盒生产批号与《材料质控单》、《中国食品药品检定研究院检验报告》或厂家检验报告是否一致；送检产品是否在有效期内，并进行资质验证。资质验证主要是进一步核查酶联免疫试剂盒的生产厂家是否具有相应的资质，所具有的证件是否在有效期内（进口试剂必须具有国务院药品监督管理部门核发的《进口药品注册证》），并根据以上检查结果填写“检验质量检查报告”。

5 出据确认报告

质量确认检测完成后，质量管理科收集、整理、分析和解析ELISA试剂盒的查验结果和质量抽检结果，并与验收标准进行比对分析，做出是否通过验收的结论，编制“ELISA试剂盒确认报告”，附相关记录和说明书，报质量主管审批。质量主管或其受权人负责对确认实施过程、确认结果和结论进行全面审核，并做出确认是否完毕、是否符合既定验收标准、是否允许投入使用的决定。

6 试剂确认后的处置

试剂确认合格后，发出放行报告并在试剂盒上进行标识，放置于标识“合格区”位置，准许领用。对于质量抽检不合格的试剂，在外包装箱/盒上粘贴“不合格物料标识，存放于“不合格区”，防止误用。对于最终的确认结论为不合格的试剂，质量管理科须书面反馈给设备科，并报告质量主管审批，由采购负责人与供应商联系进行退换处理。

7 结 语

试剂确认的目的是对新的或者有变化的ELISA试剂的系统检查与评价进行策划和控制，保证其在正式使用前符合预期的使用要求。只有使用符合质量要求的检测试剂才能确保血液筛查试验的精密度和准确度，是确保血液质量的有力保障。

[1]中华人民共和国.GB 18467-2001,献血者健康检查要求[S].2001.

[2]罗建勇.血站开展全面质量管理的体会[J].中国输血杂志,2006,6(19):509-510.

[3]国际标准化组织.ISO 9001:2000质量管理体系要求[S].2000.

[4]国际标准化组织和国际电工委员会.ISO/IEC17025:2005检测和校准实验室能力的通用要求[S].2005.

[5]徐志峰,李惠,王淑艳,等.ELISA检测影响因素分析[J].中国误诊学杂志,2001,1(4):584-585.

[6]江伟梅,葛红卫,郭永建.浅谈采供血机构实验室检验试剂的管理[J].中国输血杂志,2006,19(4):343-345.

[7]张文周.中华人民共和国药品管理法实施条例[M].北京:人民出版社,2002.

[8]中华人民共和国卫生部.血站实验室质量管理规范[S].2006.

[9]吕进明.浅谈体外诊断试剂的管理[J].医学动物防制,2004,20(6):338.