炒王不留行配方颗粒的提取工艺研究

陈 琳 胡昌江* 李文兵 周一帆 张 彤 高 源 冯 健

（1 成都中医药大学，成都 611130；2 四川新绿色科技发展股份有限公司，成都 611930）

炒王不留行配方颗粒的提取工艺研究

陈 琳1胡昌江1* 李文兵1周一帆1张 彤1高 源1冯 健2

（1 成都中医药大学，成都 611130；2 四川新绿色科技发展股份有限公司，成都 611930）

目的 确定炒王不留行配方颗粒最佳提取工艺。方法 以加水量、提取时间、提取次数为因素，采用正交设计L9（34），以王不留行黄酮苷转移率、出膏率为指标，进行提取工艺的优选。结果 最佳提取工艺条件为加25倍量水，提取3次，每次1h。结论 优选得到的工艺稳定、合理、可行。

炒王不留行；配方颗粒；提取工艺；正交设计

中药配方颗粒是用符合炮制规范的优质中药饮片为原料，经现代制药技术提取浓缩而成的单味颗粒。其性味、功效与原生药一致，供中医临床配方使用，具有质量稳定、疗效可靠、不需煎煮、直接冲服、服用量少、卫生安全、携带和储存方便等优点。近年来，中药配方颗粒作为对传统中药饮片应用形式的突破越来越受到认可。

王不留行为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria segetalis（ Neck.）Garcke的干燥成熟种子。味苦，性平。归肝、胃经。活血通经，下乳消肿，利尿通淋。用于经闭，痛经，乳汁不下，乳痈肿痛，淋证涩痛。炒王不留行的方法是取净王不留行，照清炒法炒至大多数爆开白花。炒王不留行呈类球形爆花状，表面白色，质松脆[1]。其资源丰富，主产于河北、山东、辽宁、黑龙江等地，以河北产量最大。据文献报道王不留行中含有黄酮苷、三萜皂苷、环肽、脂肪酸类等多种物质[2-4]。本实验采用正交试验设计对炒王不留行的水提取工艺进行研究，为炒王不留行配方颗粒的生产工艺提供实验依据。

1 仪器、试药和药材

1.1 仪器

安捷伦1200型高效液相色谱仪（G1312B型二元泵，G1315C型DAD检测器），KUUDOS SK250HP型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），BP211D AG电子天平（十万分之一，德国Sartorius），ZDHW调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）。

1.2 试药

王不留行黄酮苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：111853-201001），甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

1.3 药材

王不留行药材购于成都市荷花池药材市场，经成都中医药大学卢先明教授鉴定为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria segetalis（ Neck.）Garcke的干燥成熟种子。根据文献和生产的需要，本实验采用清炒法中火炮制王不留行[5]，经过高效液相色谱法测炒王不留行含量为0.34%，符合《中国药典》2010年版一部要求。

2 实验方法

2.1 提取条件选择依据

王不留行黄酮苷为黄酮类成分，有良好的水溶性。预实验取炒王不留行饮片10g加20倍量水微沸回流1h，滤渣再次微沸回流1h，共回流2次，合并滤液，用高效液相色谱法测定提取液中和原饮片中王不留行黄酮苷含量，计算出王不留行黄酮苷提取率约78%，测得出膏率约25%。试验证明在此基础上设计正交试验可达到预期效果。

2.2 试验因素水平

根据炒王不留行中主要有效成分王不留行黄酮苷的水溶性及预试验结果，确定以王不留行黄酮苷的提取率和出膏率为指标，以加水量、提取时间、提取次数进行正交试验，选择L9（34）正交表，对水提工艺的各参数进行考察，因素水平见表1。

表1 因素水平

2.3 王不留行黄酮苷转移率的考察

2.3.1 样品溶液的制备

按正交实验设计安排实验（见表1），分别称取9份炒王不留行饮片，各10g分别加入相应倍数的自来水，微沸回流提取，过滤，合并滤液，加水定容至1000mL，摇匀。吸取5mL，0.22μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备

另取炒王不留行饮片适量，粉碎，取粉末（过三号筛）约1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL.称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.3 对照品溶液的制备

取王不留行黄酮苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1mL含0.154mg王不留行黄酮苷的溶液，即得。

2.4 色谱条件

Scienhome公司kromasil C18色谱柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相甲醇-0.3%磷酸溶液按表2进行梯度洗脱；检测波长280nm；流速：1.0mL/min；柱温30℃。

表2 梯度洗脱

线性关系的考察：精密量取王不留行黄酮苷对照品溶液2、5、10、15、20μl进样，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值（Y）对进样量（X）进行回归，得标准曲线方程Y= 335.93-3.3716，r2=1。结果表明，在0.308μg～3.080μg范围内，线性关系良好。

2.5 出膏率的考察

精密吸取9次正交试验所得提取液各20mL，分别置于已经经过干燥恒重的蒸发皿中，蒸发水分至恒重得到干浸膏，计算出膏率。

2.6 实验结果分析

采用加权评分法，按照王不留行黄酮苷转移率和出膏率的权重比（7∶3）计算综合评分，并对实验结果进行分析，结果见表3，方差分析见表4。

表3 正交试验结果

表4 方差分析

2.7 最佳提取工艺的确定

从上述结果分析可以看出，3个因素的影响大小依次为C＞A＞B，且A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，且因素A和因素C有显著性差异，因素B无显著性差异。从节约能耗和降低成本考虑，在保证提取充分的前提下，综合分析各因素对王不留行黄酮苷转移率和出膏率的影响，确定提取工艺为加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。

2.8 三批验证试验

以上实验证明最佳提取工艺为加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。为了验证所选条件的正确性与合理性，按照最佳提取工艺条件进行了3批验证实验，结果如表5。

表5 三批验证实验

3 讨 论

3.1 经过研究确定王不留行配方颗粒提取的最佳工艺为：A3B1C3，即加25倍量水、煎煮提取3次、每次1h。实验证明该炒王不留行提取工艺稳定合理，能有效地提取王不留行黄酮苷，且能适用于大生产，可作为炒王不留行配方颗粒的提取工艺。

3.2 王不留行黄酮苷是炒王不留行饮片中的重要成分，黄酮类化合物具有降脂、抗心律失常、抗炎、抗菌及抗病毒、泻下等多种药理活性[6]，且《中国药典》2010年版一部将测定王不留行黄酮苷作为评价王不留行质量优劣的指标，因此，将王不留行黄酮苷转移率作为本实验的指标是可行的。

3.3 中药配方颗粒作为饮片的发展，大多以水作为其提取溶剂，炒王不留行中的王不留行黄酮苷易溶于水，故以水作为溶媒将其制成中药配方颗粒，既保证了传统中药以水煎煮的特点，又为生产节约了成本，值得推广和应用。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:49.

[2] 桑圣民,劳爱娜,王洪诚,等.中药王不留行化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,1998,l0(4):1-4.

[3] 桑圣民,夏增华,毛士龙,等.中药王不留行中黄酮甙类成分的研究[J].中国中药杂志,2000,25(4):221-222.

[4] 李帆,梁敬钰.王不留行的研究进展[J].海峡药学,2007,19(3):1.

[5] 黄柏良,旺明爱,刘桂焕,等.王不留行炮制工艺的比较研究[J].湖南中医杂志,1994,10(3):46-47.

[6] 姚新生,吴立军,吴继洲.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社,2004:177-180.

R927.2

B

1671-8194（2012）16-0081-03

10.15912/j.cnki.gocm.2012.16.030

*通讯作者