EB病毒血清学检测和EB病毒DNA定量检测在诊断传染性单核细胞增多症中的应用价值

梁曾凤 陶 佳

（1 广东省广州市番禺区钟村医院儿科，广东 广州 511495；2 广州医学院附一医院儿科，广东 广州 510120）

EB病毒血清学检测和EB病毒DNA定量检测在诊断传染性单核细胞增多症中的应用价值

梁曾凤1陶 佳2*

（1 广东省广州市番禺区钟村医院儿科，广东 广州 511495；2 广州医学院附一医院儿科，广东 广州 510120）

目的 探讨EBV血清学检测和EBV-DNA定量检测诊断传染性单核细胞增多症（IM）的应用价值。方法 选取广州医学院第一附属医院2010年1月至2011年4月期间78例诊断为IM的病例作为研究对象，使用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测患者血清中EBV四项抗体，同时使用荧光定量PCR（FQ-PCR）检测血浆中EBV-DNA负载量，对比两组的检测结果。结果 抗EBV-VCA-IgM抗体 阳性率93.6%，EBV-DNA阳性率为71.8%。结论 IM临床诊断中抗EBV-VCA- IgM阳性率比同期血浆中EBV-DNA阳性率高，故不推荐对IM患者进行常规EBV-DNA检测，但对病程长，症状反复，病情重的患儿应监测血浆中EBV-DNA，有助于评估治疗的效果及预后。

传染性单核细胞增多症；EB病毒抗体四项；EBV-DNA

EB病毒(EBV)是一类嗜人淋巴细胞病毒，属于疱疹病毒的γ亚科，由Epstein、Barr等于1986年首次发现，EBV是一种比较容易感染的病毒，在正常人群中易感程度高，且大多数患者有血清学转化[1]。我国对此的研究显示，3～5岁儿童血清学阳性转化率为80.7%～100%；10岁时可达100%。EBV的主要传播途径是通过唾液传播，此外还可通过输血传染。BEV在人体内只表达于潜伏感染相关联的一些抗原，诸如EBNA-1、EBNA-3A等。但是患者机体免疫能力较低的话或在某些因素触发条件下，身体内潜伏的EV则可以再被激活，最终导致临床发病[2]。现报道如下。

表1 EB病毒四项抗体谱

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月至2011年4月广州医学院第一附属医院接收的78例诊断为IM的病例，所有病例的诊断标准均符合诊断标准[3]：其中男45例，女33 例，年龄2～17岁，平均年龄5.8岁。临床表现：发热76例，咽峡炎75例，颈部淋巴结肿大76例，肝肿大（＜4岁肝肋下＞2cm，＞4岁肋下可触及）56例，脾肿大64例，皮疹18例，眼睑浮肿33例，外周血异型淋巴细胞比例≥10%者18例，合并支气管肺炎25例，上呼吸道感染13例，皮炎2例，血小板减少性紫癜3例，来诊时病情最短3d，最长28d。

1.2 检测方法

所有患儿入院第2天分别用促凝管和EDTA抗凝管抽取静脉血2mL，EBV血清学检测采用德国OUMENG公司的EBV抗体四项ELISA检测试剂盒（VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG 和EBNA-1-IgG）；EBVDNA检测采用达安基因股份有限公司的检测试剂盒，使用TapMan荧光探针基因PCR扩增法。检测方法参考试剂说明书。对VCA- IgM阴性患者，治疗2周后复查抗体四项，对病程长，症状反复，治疗效果不理想的，病情重的患儿3周后监测血浆中EBV-DNA。

1.3 统计学处理

采用SPSS13.0统计学软件对所得数据进行分析处理，计数资料用卡方检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结 果

EB病毒抗体检测中，抗VCA-IgM阳性率93.6%。其血清中EBVDNA检测的阳性率为71.8%。入院时VCA- IgM阴性者，治疗2周后复查抗体四项，VCA- IgM阳转率达95%。病程3周以上，症状反复，治疗效果不好的，病情重的患儿复查血浆中EBV-DNA的负载量，发现EBV-DNA拷贝数仍＞1×103copies/mL。随访2例症状反复者，其中1例8个月后诊断为慢性活动性EB病毒感染，1例诊断为噬血细胞综合征。EBV四项抗体谱见表1。EBV-DNA检测结果见表2。两组数据经统计学处理，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 EB-DNA负载量检测结果（≥1×103copies/mL为阳性）

3 讨 论

3.1 EBV血清抗体检测

原发性EBV感染过程中首先产生抗衣壳抗原IgM和IgG(抗VCAIgM、抗VCA-IgG)；急性感染晚期，抗早期抗原IgG(抗EA-IgG)出现；恢复期晚期，抗核抗原IgG(抗EBNA-IgG)产生。抗VCA-IgG和抗EBNA-IgG可持续终身[4]。在EBV感染者体内，抗EBV-VCA-IgM呈阳性历来是临床IM的诊断标准与参考依据，但是值得注意的是，EBV患者感染后的血清学反应十分复杂，呈多样化，另有一些病例中患者抗EBV-CA-IgM的产生延迟或长时间存在等不同表现，这为临床IM的诊治带来一定的挑战与难度。

3.2 EBV-DNA负载量检测

EBV-DNA检测一方面可以应用于EBV携带者的低水平复制，此外，还可检测EBV相关性疾病的活动性感染。对于EBV携带者而言，其淋巴细胞内一般可能存在着较低水平的EBV-DNA载量，但是这些携带者的血浆或血清中则很少检测到EBV-DNA。

对于EBV的临床检测方法目前有多种，Real-time PCR则是应用最广也是最主要的检测方法，其具有特异性与高敏感性的特点。一般对于IM患者而言临床不推荐使用EBV载亮检测方法。IM患者外周血中EBV载量在2周内达到峰值，随后很快下降，病程22 d后，所有EBV-IM血清中均检测不到EBV核酸。对于CAEBV患者而言，外周血中EBV的载量相比于潜伏感染的个体要显著升高，外周血单个核细胞和血彩血清均被用来检测EBV载量，但PMBC中EBV-DNA水平有助于CAEBV的诊断。绝大多数CAEBV患者的PBMC中EBV-DNA水平高于102.5拷贝/txg DNA，而部分CAEBV患者的血清中对于EBV-DNA的检测结果通常呈阴性，有研究表明，CAEBV患者血浆/血清中EBV-DNA水平与患者病情的严重与否和预后的情况密切相关。

3.3 总结

本研究表明EBV-DNA阳性率明显低于EBV-VCA-IgM阳性率，可能与部分病例来诊前已在院外抗病毒治疗，或病程已超3周，导致EBV-IM患者血浆中检测不到EBV核酸。故不推荐对IM患者进行常规EBV-DNA检测，但对病程长，症状反复，病情重的患儿则应监测血浆中EBV-DNA以有助于评估治疗效果及预后转归。

[1] Wang PS,Evans AS.Prevalence of antibodies to Epstein-Barr virus and cytomegalovims in sera from a group of children in the People"s Republic of China[J].J Infect Dis,1986,153(1):150-152.

[2] 谢正德,申昆玲.重视儿童非肿瘤性EB病毒感染疾病的研究[J].首都医科大学学报,2010,31(2):55.

[3] Saus SE.The chronic mononucleosis syndrome[J].J Infect Dis,1988,157(3):405-412.

[4] Guuey ML,Tang WH.Laboratory Assays for Epstein-Barr Vires-Related Disease[J].J Mol Diagon,2008,4(2):279-292.

Serological detection of EB virus and EB virus DNA quantification assays in the diagnosis of infectious mononucleosis application

LIANG Zeng-feng1, TAO Jia2
1 Department of Pediatric, Panyu District Zhongcun Hospital, Guangzhou 511495, China; 2 the First Affliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510120, China

ObjectiveTo investigate the EBV serological detection and quantitative EBV-DNA assay for the diagnosis of infectious mononucleosis ( IM )application value.MethodsThe fi rst hospital of Guangzhou Medical College in 2010January -2011April78 cases were diagnosed as IM case as the research object, the use of enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) method for the detection of serum EBV four antibody, at the same time using fl uorescence quantitative PCR (FQ-PCR) were detected in the plasma of EBV-DNA load, comparing the two groups of test results.ResultsAnti EBV-VCA-IgM antibody positive rate was 93.6%, the positive rate of EBV-DNA was 71.8%.ConclusionIM clinical diagnosis of EBV-VCA - IgM positive rate than the same period in the plasma of EBV-DNA positive rate is high, it is not recommended for patients with IM routine EBV-DNA testing, but for the long course of disease,symptoms of recurrent, severe illness in children should be monitored in plasma EBV-DNA, contribute to the evaluation of therapeutic effect and prognosis.

Infectious mononucleosis virus antibody; EB four; EBV-DNA

R512.7

B

1671-8194（2012）16-0056-02

10.15912/j.cnki.gocm.2012.16.125

*在读研究生