凤冈有机茶和湄潭翠芽中茶多糖与茶多酚含量的分析

杨正久，方应培，蒙正涛，林江华

（遵义医药高等专科学校医学技术系，贵州 遵义563000）

茶是中国的国饮，又是21世纪天然的绿色饮料.遵义是贵州的茶业基地，也将成为中国国内外名优绿茶的生产和加工基地，其知名绿茶主要有凤冈有机茶和湄潭翠芽.绿茶的主要生化成份有茶多酚、茶多糖、茶氨酸等，茶多酚是形成茶叶品质的重要成份之一，对茶叶品质的影响显著，是茶叶生化研究最多的一类化合物［1］，具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、消炎、降脂等多种生物学功效；茶多糖是茶叶中的多糖类物质，实为可溶性糖蛋白，其具体结构至今尚未明了［2］.茶多糖具有降血糖、降血脂、抗氧化等多种功效［3］.但有关凤冈有机茶和湄潭翠芽生化成份及生物药效方面的研究文献报道甚少，本研究对这两种绿茶中的茶多酚和茶多糖进行了提纯，并以国家级名茶都匀毛尖为对照，对其含量进行测定，为遵义绿茶种植、加工、评价及进一步综合开发利用提供参考.

1 材料与方法

1.1 仪器药品

仪器：AL204电子天平 （上海梅特勒一托利多）；722型可见分光光度计 （天津博宇通达仪器有限公司）；电热恒温水浴锅－DK－S22（上海实验仪器厂）；SHB－III循环水式多用真空泵 （郑州长城科工贸有限公司）；低速台式离心机－80－2 B（上海实验仪器厂），ZK－82 A型干燥箱 （上海市实验仪器总厂）.

药品：98%乙醇、氯仿、正丁醇、蒽酮、浓 H2SO4、葡萄糖、硫酸亚铁、酒石酸钾、Na2HPO4、KH2PO4，以上药品均为分析纯.

1.2 实验材料

实验中所用的凤冈有机茶、湄潭翠芽和都匀毛尖均为具有销售包装的成品茶叶，且购买于该三种茶叶的生产公司.

1.3 实验方法

1.3.1 茶多酚和茶多糖的纯化制备

茶汤制备：称取茶叶2 g，磨碎过50目筛，纯化茶多糖时，沸水 （纯化茶多酚时用80℃热蒸水）浸提50 min，3次，各次茶水比为1∶10，1∶20，1∶30，浸提时间分别为30 min、40 min、50 min，合并滤液并浓缩得茶汤.

茶多糖纯化制备：茶汤→用3倍体积95%的乙醇沉淀多糖→乙醚—丙酮—无水乙醇溶剂系统冲洗→热蒸馏水溶解多糖→Sevage法沉淀蛋白质→离心，上清用乙醇95%沉淀→低温干燥，溶解多糖待测.

茶多酚纯化制备：茶汤→3倍体积无水乙醇沉淀离心→上清乙醇液→浓缩→水溶液→氯仿萃取三次去咖啡碱→水相→浓缩干燥→茶多酚，溶解待测.

1.3.2 茶多酚含量的测定

采用酒石酸亚铁比色法［4］，准确吸取待试液l mL，注入25 mL的容量瓶中，加水4 mL，酒石酸铁溶液5 mL，充分混合，再加p H 7.5的缓冲溶液至刻度，在波长540 n m处，以试剂空白溶液为参比，测定吸光度 （A）.重复三次取平均值计算，茶多酚的含量按下式计算：

式中：L1－试液的总量 （mL）；L2－测定时的用液量 （mL）；M－试样的质量 （g）；m－试样干物质含量 （%）.

1.3.3 茶多糖含量的测定

采用蒽酮法［5］测定茶多糖，配成系列浓度为20 ug／mL、40 ug／mL、60 ug／mL、80 ug／mL、100 ug／mL的葡萄糖溶液，各取1 mL于试管中，分别加3 mL的蒽酮试剂后，迅速浸入冰水中冷却，然后加塞子 （防蒸发）于100℃水浴加热10 min，以蒽酮试剂作为空白对照，于620 n m处比色.以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，制作标准曲线.

测定：取待测样品1 mL，加入3 mL蒽酮试剂，同以上方法测定，重复3次取平均值计算，公式为：m% ＝C·V／m×100%.

2 结果与分析

2.1 茶多酚的含量

从表1中可以看出，这三种茶叶的茶多酚均较高，在27%左右.但具有较小的差异，凤冈有机茶的茶多酚含量比都匀毛尖和湄潭翠芽分别高出1.15和1.71个百分点.本实验所用的凤冈有机茶、湄潭翠芽和都匀毛尖均属于炒青茶，实验测得茶多酚含量，低于鄢东海等人［6］采用标准的蒸青制茶方法，测得贵州地方茶树资源的茶多酚含量平均值32.60%，这可能与本试验中所用茶叶的制茶工艺及茶多酚的提纯方法有关.

表1 茶多酚的含量

2.2 茶多糖的含量

2.2.1 葡萄糖标准曲线

以620 n m处吸光值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，制作标准曲线，如下图：

表2 茶多糖的含量

2.2.2 样本中茶多糖的含量

如表2，本实验中三种茶叶中的茶多糖含量较低，分别为1.19%、1.00%和1.11%，均在1.00%左右，但凤冈有机茶的茶多糖含量比都匀毛尖和湄潭翠芽分别高0.08和0.19个百分点，该较小差异可能与茶叶的品种及加工工艺等因素有关.茶叶越老茶多糖含量越多［7］，结果表明实验三种茶叶均采用鲜嫩茶叶原料加工而成.

图1 葡萄糖标准曲线

3 讨 论

本实验采用水溶液浸提法对茶多酚和茶多糖进行提纯，有效地去除了干扰成份的影响［8］；采用酒石酸亚铁比色法测定茶多酚，蒽酮法测定茶多糖，该方法稳定性较好，具有准确、可靠、简便的特点［5］.结果表明，凤冈有机茶和湄潭翠芽中的茶多酚和茶多糖含量均与国家级名茶都匀毛尖相近，其中以凤冈有机茶中的茶多酚和茶多糖含量略高.推测实验中三种绿茶的茶多酚和茶多糖含量相近，可能跟茶叶产地的地理气候条件有关［9］，虽然都匀和遵义两地分别位于贵州省的南部和北部，但均处于云贵高原的第二阶梯，年均降雨量1 200 mm左右，无霜期近300 d，平均近温度15℃，冬无严寒，夏无酷暑，这样的地理气候条件造成了高酚低糖的优质茶叶.

茶多酚是茶叶中一类多元酚的混合物，是绿茶滋味浓度和苦涩味的代表物质，它对绿茶的品质形成具有双重作用［10］，它既参与茶叶的滋味、色泽和香气物质的转化形成［11］，又使茶具有苦涩味，茶多酚对绿茶品质的作用不是孤立的，它随其它可溶性成分的变化而改变，对绿茶品质的影响比较复杂［12］，因此，简单从茶多酚含量预测茶叶品质好坏不妥.绿茶为未经发酵的茶，它保留了茶叶的天然特性，茶多酚含量较高［13］，但测定其茶多酚含量的高低除随茶叶产地品种而不同外，还与绿茶的制作工艺、茶多酚的提取方法、纯化工艺条件等因素有关.实验中测得凤冈有机茶和湄潭翠芽中茶多酚含量较高，这与绿茶茶多酚含量高相符.但它对该茶叶品质形成的具体作用还有待与其它生化成分一起进行综合分析.

研究表明，茶多糖的含量与品种及产地有着密切的关系，其含量与组成会随着提取方法和工艺的不同而有很大的差异，此外还与茶叶的采摘日期及加工方法有关［14］.成品绿茶中茶多糖的含量在1%～8%之间不等，一般随着茶叶原料的老化，茶多糖含量增加［15］.虽然茶多糖含量不能作为衡量茶叶品质好坏的主要指标，但通常优质绿茶采用鲜嫩芽叶加工而成，因此，对于同一产地和相同品种的茶叶，它在一定程度上反应了茶叶的品质［7］.本实验用茶叶，包括国家级名茶都匀毛尖均为名优绿茶，茶多糖含量较低，表明该三种茶叶为采用鲜嫩茶叶原料加工而成的高品质茶叶.

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