心脉隆注射液对动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞的保护作用

张文静，王琳琳，宋树英

（1.河北北方学院基础医学院组胚教研室，河北 张家口075000；2.河北北方学院附属第一医院肾内科，河北 张家口075000；3.河北北方学院附属第二医院，河北 宣化075100）

动脉粥样硬化 （ather oscler osis，AS）是严重威胁人类健康和生命的心血管疾病.血管内皮细胞损伤，导致脂质沉着明显增加，促进细胞黏附、迁移和平滑肌细胞增殖，伴随血浆凝血、纤溶机制受损，生长因子、趋化因子增多等一系列反应.目前被普遍接受的Ross“损伤反应”学说认为血管内皮功能障碍是动脉粥样硬化形成的早期始动环节，并且贯穿动脉粥样硬化发生发展的全过程［1］.心脉隆注射液的有效成分为多肽、核苷及复合氨基酸等.本实验用心脉隆注射液干预大鼠动脉粥样硬化的形成，观察其对内皮细胞功能的影响，为临床治疗动脉粥样硬化提供实验依据.

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级Wistar大鼠40只，健康，成年，雄性，体质量160～190 g，购于北京军事医学科学院实验动物中心.

1.2 动物饲料

参照文献［2］的方法配制大鼠高脂饲料，在普通饲料中添加3.5%胆固醇，10%猪油，0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠，5%白糖.

1.3 药品与试剂

胆固醇、胆酸钠购于北京奥博星生物技术责任有限公司；丙硫氧嘧啶片购于上海信谊药厂有限公司；维生素D3购于上海通用药业股份有限公司；心脉隆注射液购于云南腾冲制药厂 （批号：国药准字Z20060443）；辛伐他汀滴丸购兴安药业有限公司；一氧化氮 （NO）试剂盒购于南京建成生物工程研究所；内皮素 （ET）、血栓素 （TXB2）、6－酮－前列素F1a（6－Keto－PGF1a）放免试剂盒购于解放军总医院科技开发中心放免所.

1.4 实验方法

1.4.1 动脉粥样硬化模型的建立 所有40只大鼠适应性喂养一周，随机取其中30只参照文献 ［2］的方法复制动脉粥样硬化大鼠模型，大鼠自由进食进水，进食为高脂饲料，并一次性腹腔注射维生素D365万单位／kg体质量，由于丙基硫氧嘧啶味苦，故在制备高脂饲料时未与普通饲料混合，而是每天灌胃给予以免影响大鼠的进食量，剂量按照大鼠每天喂食饲料量的0.2%灌胃给予，持续喂养8周.

1.4.2 给药方法及分组 造模的30只大鼠再随机分为3组分别为：模型组、辛伐他汀组及心脉隆治疗组，每组各10只.其余10只为正常组.辛伐他汀组大鼠按5 mg／kg体质量每天灌胃给予辛伐他汀一次，心脉隆治疗组大鼠按5 mg／kg体质量每天腹腔注射心脉隆一次，正常组和模型组大鼠给予同体质量比例的生理盐水每天一次腹腔注射.共8周.正常组普通饲料自由进食进水.

1.4.3 标本的采集与测定 实验在第8周最后一次给药后，所有实验大鼠禁食12 h，不禁水，断尾取血约6 mL，3 mL室温静置30 min，3 000 r／min离心15 min，取上清液置－20℃待测血清NO的含量.另3 mL，4℃，4 000 r／min离心20 min，留取上清－20℃保存待测血浆ET、TXB2（TXA2在体内极不稳定，在短时间内可水解成无活性的血栓素B2，故测定TXB2来反映TXA2的含量）、6－Keto－PGF1a（PGI2前列环素）不稳定，国内外一般以其稳定产物6－Keto－PGF1a做为判断其浓度的指标）的含量.各数值的测定操作步骤严格按照试剂盒上的操作规程执行.

1.5 统计学方法

2 结 果

模型组大鼠血清NO和血浆6－Keto－PGF1a的含量较正常组相比有明显的降低（P＜0.01），血浆ET含量比正常组有明显的升高（P＜0.01），血浆TXB2的含量有所升高但差异没有统计学意义.心脉隆治疗组和辛伐他汀组大鼠与模型组大鼠相比较血清NO和血浆6－Keto－PGF1a的含量显著升高（P＜0.05），血浆ET含量明显降低（P＜0.05），血浆TXB2的含量有降低但差异无统计学意义.心脉隆治疗组与辛伐他汀组之间各指标含量没有明显的差异，见表1.

表1 治疗前后各组大鼠 ET、TXB2、6－Keto－PGF1a、NO含量的变化s）

表1 治疗前后各组大鼠 ET、TXB2、6－Keto－PGF1a、NO含量的变化s）

注：与正常组比 较＊P＜0.01，与模型组比较＃P＜0.05

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3 讨 论

血管内皮功能障碍是动脉粥样硬化形成的早期始动环节，并且贯穿动脉粥样硬化发生发展的全过程.内皮细胞是全身血管内膜的屏障结构，具有多方面的生理功能，主要为调节血管张力、维持凝血和纤溶系统之间的平衡、抑制血小板的聚集和活性等，同时也是一个重要的内分泌器官，血管内皮细胞分泌的内皮源性收缩因子有血栓素A2和ET等［3］，内皮源性舒张因子有前列环素、NO等，收缩因子和舒张因子是否平衡直接影响了血管张力.

PGI2和TXA2是花生四烯酸 （AA）的代谢产物，二者一起参与调节血小板活性和血管张力.TXA2是强烈的血管收缩剂和血小板聚集促进剂，PGI2是血管内皮细胞分泌的重要舒血管物质，具有阻止血小板黏附聚集、抑制血栓形成、保护血管内皮的生物活性作用.TXA2的半衰期只有30s，很快就转化为无生物活性的TX B2，PGI2的半衰期也很短，仅为10s，很快就代谢为6－酮－前列素Fla（6－Keto－PGF1a）.故一般通过测定血浆中TXB2和6－Keto－PGF1a的含量反应TXA2和PGI2的水平.血液中脂质质量和数量的异常，引起血管内皮细胞的损伤，使之产生PGI2的功能下降，在受损内皮黏附血小板及脂质过氧化的参与下，进一步刺激血小板合成并释放大量的TXA2入血，黏附更多的血小板形成血栓；从而诱发白细胞附壁、炎性浸润、纤溶活性降低，并能促进内皮细胞释放生长因子，刺激成纤维细胞、平滑肌细胞的增生和迁移，形成动脉粥样硬化［4］.

NO、ET是一对重要的内皮依赖性舒张血管和收缩血管的因子［5］，内皮源性NO与ET的平衡失调，也就是NO合成与释放减少和ET合成与释放的异常增加，与AS的形成有密切的关系.NO是由一氧化氮合酶 （NOS）催化L－精氨酸而产生的，具有扩张血管、抑制多种血细胞对内皮的黏附和损伤，抑制血小板活化聚集，抗血管平滑肌细胞增生等作用，可以抑制或延缓AS的发生和发展.ET具有收缩血管，促使血小板黏附聚集等作用，是目前所知的作用最强、最持久的缩血管肽，对AS的发展具有促进作用.ET还可通过ET（B）受体发挥刺激NO合成和释放的作用.当发生动脉粥样硬化时内皮细胞受损，ET合成和释放增多，NO分泌减少［6］.

心脉隆注射液是由美洲大蠊干品经过浸渍、减压浓缩、分离得到心脉隆浸膏再溶解后制得，有效成分为多肽、核苷及复合氨基酸等.心脉隆注射液对心血管系统具有多方面作用，可以增加心肌收缩力、扩张血管、利尿、降低肺动脉压、抑制ET分泌等［7］.本实验研究显示，心脉隆注射液能够有效的降低动脉粥样硬化大鼠血浆ET的含量，显著提高血清NO和血浆6－Keto－PGF1a的含量，从而有效地保护了内皮细胞的功能，对动脉粥样硬化的治疗起到了良好作用，在疗效上与临床上常用的辛伐他汀几乎相同，但其却具有中药作用持久，副作用小的特点.

［1］ 白霞，牛丽颖，刘娇，等.淡豆豉防治早期动脉粥样硬化大鼠血管损伤的机制研究 ［J］.时珍国医国药，2008，19（1）：170－171

［2］ 赵娟，李相军，孙波.维生素D3联合高脂饲料建立大鼠动脉粥样硬化模型 ［J］.实用医学杂志，2009，25（21）：3569－3571

［3］ Scotland RS，Madhani M，Chauhan S，et al.Investigation of vascular responses in endothelial nitric oxide synthase／yclooxygenase－1 double－knockout mice：key role for endotheliu m－derived hyper polarizing factor in the regulation of blood pressure in vivo ［J］.Circulation，2005，111 （6）：796

［4］ 孙玉凤，陈志强，丁奇峰，等.姜黄素对高脂血症大鼠TXB2、6－Keto－PGF1α的影响 ［J］.河北中医，2008，30（5）：533－534

［5］ Taddei S，Ghiadoni L，Virdis A，et al.Clinical significance of the assess ment of endothelial f unction ［J］.Ital Heart J Suppl，2004，5 （5）：357

［6］ 王瑞鑫，王春波，罗世滨，等.SS－GAG对高糖状态下血管内皮细胞NO释放及ET－1分泌的影响 ［J］.山东大学学报：医学版，2008，46 （4）：358－361

［7］ 唐晓鸿.心脉隆注射液药理作用和治疗心理衰竭临床研究进展 ［J］.中国新药杂志，2008，17（6）：461－464