黄精中蒽醌类化合物的含量分析△

彭小冰 王和生 杨 涛

(贵阳中医学院药学系，贵州 贵阳 550002)

黄精的百合科Liliaceae黄精属Polygonatum Mill多种植物的根茎，中国药典(2000版)收载了滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl、多花黄精 Polygonatum cyrtonema Hua、黄精Polygonatum sibiricum Red3种，在民间同属其它一些植物根茎也被当作黄精使用。黄精在我国的药用历史已逾2000年，祖国医学认为，黄精性平、叶甘、入脾、肾、肺经，具有补肾益精、滋阴润燥的功效，长期用于治疗肾虚亏损，脾胃虚弱，肺虚燥咳，体倦乏力等症，同时也是数十种复方滋补药剂的重要组分。20世纪七、八十年代开始，现代医学对黄精的研究逐渐增多，药理研究不断深入，现已证明黄精具有降低血糖、血脂，保护心血管系统，调节和增强免疫功能，延缓衰老，抗炎，抗病毒等重要药理作用。同时对黄精的化学成分研究结果也表明，黄精除含有多糖外，还含有蒽醌等活性成分，但其含量的高低未曾见报道，本文对黔产多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua中蒽醌类化合物进行了提取和含量测定。

1 仪器和试药

1.1 仪器：DU－70紫外－可见分光光度计(美国BECKMAN)，索氏提取器，回流提取装置。

1.2 试剂：氯仿，硫酸，石油醚，醋酸镁，甲醇均为分析纯。

1.3 对照品：1.8－二羟基蒽醌(供含量测定用)中国药品生物制品鉴定所制。

1.4 药材：黄精采自贵阳市郊，经贵阳中医学院药学系生药教研室刘芃教授鉴定。

2 方法与结果

2.1 样品的制备：将黄精药材粉碎后过80目，用乙醇回流提取至基本无色得醇浸膏。醇浸膏加氯仿提取至无色，过滤，氯仿提取液减压浓缩至干黄精的乙醇－氯仿提取物;残渣用水提取，水提液减压浓缩至干得黄精的乙醇－水提取物。把黄精的乙醇－氯仿提取物和黄精的乙醇－水提取物置于烘箱中，让温度保持在60℃左右，烘8小时后放置于干燥器重备用。

2.2 标准曲线的制作：精密称取1.8－二羟基蒽醌5.50mg，用石油醚定容至 50ml，分别精密吸取 0.40，0.80，1.60，2.00，2.50，3.00，3.50ml置于 25ml容量瓶中，在水浴上挥去石油醚(水浴温度不超过80℃)，残渣用0.5%的醋酸镁－甲醇溶液定容显色，摇匀使之溶解，用0.5%的醋酸镁－甲醇溶液做空白，在510nm处测定吸光度，求得回归方程如下：A= －0.0021+0.0459C r=0.9994。

2.3 乙醇－氯仿提取物中蒽醌的含量测定：精密称取已烘干的黄精的乙醇－氯仿粗品0.0430g，置于索氏提取器中，用30ml氯仿提取4个小时至提取溶剂氯仿无色，把氯仿溶液转移至50ml具塞瓶中，用氯仿洗涤圆底烧瓶数次均与氯仿提取物合并，用氯仿定容至刻度摇匀，精密吸取5ml氯仿提取液到250ml的具塞瓶中，把氯仿挥干，用胖肚吸管精密吸取25ml醋酸镁甲醇溶液至具塞瓶中摇匀使之溶解，30min后测定吸光度值。结果见表1

表1 乙醇－氯仿提取物中蒽醌的含量

2.4 乙醇－水提取物中蒽醌含量的测定：精密称取黄精的乙醇－水提取物2.40g左右于圆底烧瓶中，加入2.5mol.L－1硫酸30ml在超声波清洗器中振荡5min使之完全溶解，加入氯仿30min，回流提取2个小时，把底层的氯仿液吸取置于250ml的具塞瓶中，然后再加入30ml氯仿再回流提取1个小时，重复以上操作四次，合并氯仿液，然后用蒸馏水洗涤数次至水层为中性为止，吸取蒸馏水后，用冷凝回流装置回收氯仿液至挥干为止，用胖肚吸管精密吸取25ml0.5%的醋酸镁－甲醇溶液溶解残留物并显色，30分钟后测定吸光度值。测定结果见表2。

表2 乙醇－水提取物中蒽醌的含量(n=5)

2.5 乙醇－水提取物中蒽醌的含量(n=5)：用黄精的乙醇－氯仿提取物作回收率实验：称取黄精的乙醇－氯仿提取物约0.02g左右，根据样品本底值平均含量1：1比例精密加入1.8－二羟基蒽醌标准品，然后按照乙醇－氯仿提取物中蒽醌含量测定步骤进行。测得回收率为98.61%、RSD=3.1%(n=5)。

用黄精的乙醇－水提取物作回收率实验：称取黄精的乙醇－水提取物约1.3g左右，根据样品本底值平均含量按1：1比例精密加入1.8－二羟基蒽醌标准品，然后按照乙醇－水提取物中蒽醌含量测定步骤进行。测得回收率为 101.51%、RSD=0.53%(n=5)。

2.6 稳定性试验：用乙醇－氯仿提取物按含量测定方法操作，将显色后的溶液分成两份，同在室温下，一份不避光，一份避光置于暗处，分别在0、1、2、3、6小时后测其吸光度。结果见表3。

表3 时间及光照对吸光度的影响

光照对吸光度没有明显差异;时间的延长吸光度却逐渐降低，因此测定最好在显色后1个小时内完成。

3 讨论

用乙醇－氯仿提取的蒽醌衍生物主要是游离蒽醌，而乙醇－水提取的则是结合蒽醌。通过实验我们发现，在结合蒽醌的含量测定之前的前处理过程中，如果不将样品中的水和酸除尽，将会使样品溶液的吸光度值降低，尤其是酸的存在最为明显，从而使测定结果误差较大，这是因为酸和水对蒽醌与镁离子生成的络合物的稳定性降低所致，下面的实验结果可以说明：

在15支10ml比色管中分别加入显色后的蒽醌溶液至刻度，然后分成3组：

第一组：分别加入 0.5%醋酸镁甲醇溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml摇匀。

第二组：分别加入蒸馏水 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml摇匀。

第三组：分别加入 0.025mol.L －1 的硫酸 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml摇匀。

分别测定以上三组的吸光度值，结果见表4。

表4 0.5%的醋酸镁－甲醇溶液(a)，水(b)，0.025mol.L －1的硫酸(c)对吸光度的影响

通过以上实验结果看出：有酸和谁存在的情况下，实验结果误差会增大，因为酸可以影响到蒽醌与镁离子生成的络合物的稳定性，从而使测量值下降，而水除了有稀释作用以外，还可以和酸一样降低蒽醌与镁离子生成络合物的稳定性，但相对酸的影响要小很多，所以在实验过程中一定不能有酸和水的介入，在结合蒽醌的前处理过程中，用水洗涤至中性是很关键的，由于酸的影响远大于水，所以在此过程中一定要水洗至中性为止，在最后蒸干氯仿的同时也必须将水蒸干。

测定结果可以看出，黄精中的蒽醌含量并不高，且大多数蒽醌于游离态形式存在于原药材中。

［1］姚桂根，孙小萍，等.用醋酸－甲醇比色法测定何首乌及其制剂中蒽醌类成分的含量［J］.中草药，1983.14(6)：15－18.